Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы. - презентация

1 Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы

2 Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около % случаев приходится на детей 2-6 лет. В Казахстане ежегодно заболевают 130 детей.

3 Хромосомные изменения обнаруживают приблизительно у % больных. неблагоприятные факторы внешней среды: ионизирующее излучение, действие электромагнитного поля, химических веществ, бензола, медикаментов, в состав которых входят алкилирующие соединения. вирусы (HTLV-I - Т-клеточный лейкоз/лимфома взрослых; вирус Эпштейна- Барр – лимфома Беркитта, Лимфома Ходжкина)

4 ! Особенно чувствительны к воздействию электромагнитного излучения дети школьного возраста, организм которых еще не сформировался: даже всего несколько часов в неделю, проведенных около компьютера, опасны для их здоровья. В 1997 году в США опубликованы данные по увеличению количества заболеваний детей лейкозом, которые более 2 часов в день играли на компьютере и в видео игры.

5 лейкозы острые хронические миелобласт ные лимф областные редкие ХЛЛХМЛ ВТ

6 Основной клинической симптоматикой ОЛ служат процессы гиперплазии опухолевой ткани (бластная трансформация костного мозга, увеличение лимфатических узлов, органов, появление опухолевых инфильтратов и т.д,) и признаки подавления нормального кроветворения.

7 Клиническая симптоматика развернутой стадии ОЛ складывается из 5 основных синдромов: 1. гиперпластического 2. геморрагического 3. анемического 4. интоксикационного 5. инфекционных осложнений

8 Л.- опухолевые клональные заболевания кроветворной системы с первичным поражением костного мозга. Мишенью опухолевой трансформации являются стволовые кроветворные клетки и коммитированные клетки- предшественники. Субстрат опухоли представлен бластами.

9

10 FAB-классификация, 1976 Лф: L1, L2, L3 Миело: М0, М1, М2, М3,М4, М5,М6, М7

11 Иммунофенотипирование CD – кластер дифференцировки Антитела (мембранные гликопротеины, карбогидраты, гликолипиды) Проточная цитометрия является современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.

12

13 Образцы для проточной цитометрии кровь костный мозг ликвор суставная жидкость плевральная жидкость асцитическая жидкость клетки тканей (например, опухолей)

14 Проточные цитофлюориметры

15 Концепция соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки. В большинстве случаев ОЛ бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки.

16 Иммунологическая идентификация включает: Определение линейной принадлежности злокачественных клеток Анализ клеточного созревания, т.е. уровня дифференцировки, степени гетерогенности популяции злокачественных клеток Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов Клональности Определение количества гемопоэтических клеток Контроль и мониторинг эффективности терапии Выявление минимальной остаточной болезни

17

18 Лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев. К основным типам аберрантности фенотипа л.клеток относятся:

19 Коэкспрессия антигенов нескольких линий Асинхронная экспрессия антигена Избыточная экспрессия антигенов Отсутствие экспрессии или низкий уровень экспрессии антигена Фенотипический профиль, практически не встречающийся в норме

20 Структура иммунологических вариантов острых лейкозов НЦПиДХ

21 Частота выявления различных фенотипических вариантов ОЛ

22 Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза 1995, 2009 Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров «чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20% клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ устанавливаться, если маркеры и м. и л. линии набирают более 2 баллов. Учитывается также СИФ.

23 Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза Баллы Маркеры В ряда Маркеры Т ряда Маркеры миелоряда 2CD79acyIgMcyCD22CD3cy/mem TCRαβ TCRγδ MPO 1CD19CD10CD20CD2CD5CD8CD13CD33 0,5TdTCD24TdTCD7CD1aCD14CD15CD64CD117

24 За последние 5 лет в НЦПиДХ было выявлено 6 и фенотипических лейкозов, причем 3 из них имели фенотип Т-линейной и миелоидной направлений дифференцировки, и 3 случая В-линейной и миелоидной направлений дифференцировки.

25 Суммарный иммунофенотип Т+миело: CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLA- DR+CD34+MPO+ В+миело: CD19+CD22+CD79 а+CD13+CD33+CD117+CD 15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+

26

27 Мегакариоцитарный лейкоз (М7) С 2010 по 2014 гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д, с-м Дауна - 3 CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34- MPO- CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DR- CD34-MPO-, Коэкспрессия CD4, CD7, CD56

28 Мегакариоцитарный лейкоз (М7)

29 Эритробластный лейкоз (М6)

30 Плазмобластный лейкоз

31 Спасибо за внимание!