ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ С ЭРИТРОЦИТАМИ Магистрант Григорьева Дарья Владимировна Научный руководитель канд. биол. наук Горудко Ирина Владимировна. - презентация

1 ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ С ЭРИТРОЦИТАМИ Магистрант Григорьева Дарья Владимировна Научный руководитель канд. биол. наук Горудко Ирина Владимировна

2 Эритроциты Для нормального функционирования эритроцит должен сохранять свою целостность и быть хорошо деформируемым, что очень важно для нормальной микроциркуляции. При нарушении деформируемости эритроциты становятся более жесткими, усиливается гемолиз таких клеток. Это ведет к активации свободнорадикального окисления, внутрисосудистого тромбообразования и ишемизации органов и тканей. Установлена роль нарушения деформируемости эритроцитов в патогенезе ишемической болезни сердца, диабета, гипертонии, тромбозов, метастазирования рака и других заболеваний.

3 Факторы, способные изменять структурно-функциональные свойства эритроцитов: активные формы кислорода, продукты секреции нейтрофилов Миелопероксидаза (МПО) (воспалительные и сердечно-сосудистые заболевания) Ферментативная активность Гипогалоидные кислоты: HOCl и HOBr (Zavodnik I.B., 2002) + Галогенированные молекулы (Carr A.C., 1997) Непосредственное связывание с клеточной поверхностью: Макрофаги (Lefkowitz D.L., 1992) Нейтрофилы (Lau D., 2005) Эритроциты?

4 Ц ЕЛЬ РАБОТЫ Целью данной работы явилось изучение механизмов влияния МПО, изолированной из лейкоцитов крови человека, на кислотный и осмотический гемолиз эритроцитов

5 М ЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА 30 мкл суспензии отмытых эритроцитов (4×10 7 кл/мл), фосфатно-солевой буфер, рН 7,4 3 мкл МПО (10 -6 М, натрий-фосфатный буфер, pH 5,5) 3 мин 60 мМ NaCl – осмотический гемолиз; 10 мМ фосфат-цитратный буфер, содержащий 155 мМ NaCl, рН 2,9 – кислотный гемолиз агрегометр АР2110 эритроциты+МПО 1) 2) 3) регистрация изменения светопропускания клеточных суспензий при 620 нм, 37ºС и постоянном перемешивании

6 К ИСЛОТНЫЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ В ПРИСУТСТВИИ МПО Кинетические кривые кислотного гемолиза эритроцитов в отсутствие (кривая 1) и в присутствии (кривая 2) 100 нМ МПО. Зависимости степени (G) и скорости (v) кислотного гемолиза эритроцитов от концентрации МПО.

7 К ИСЛОТНЫЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ В ПРИСУТСТВИИ МПО Кинетические кривые кислотного гемолиза эритроцитов в отсутствие (кривая 1) и в присутствии (кривая 2) 100 нМ МПО. Зависимости степени (G) и скорости (v) кислотного гемолиза эритроцитов от концентрации МПО.

8 О СМОТИЧЕСКИЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ В ПРИСУТСТВИИ МПО Кинетические кривые осмотического гемолиза эритроцитов в отсутствие (кривая 1) и в присутствии (кривая 2) 100 нМ МПО. Зависимости степени (G) и скорости (v) осмотического гемолиза эритроцитов от концентрации МПО.

9 К ИСЛОТНЫЙ И ОСМОТИЧЕСКИЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ ПОСЛЕ ПРЕИНКУБАЦИИ ЕЕ С МПО Зависимость степени (G) и скорости ( v ) кислотного и осмотического гемолиза эритроцитов, выделенных из цельной крови после ее инкубации с МПО, от концентрации МПО.

10 С ТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ МПО В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VITRO Структурные изменения эритроцитов цельной крови при воздействии 100 нМ МПО. контроль100 нМ МПО

11 МПО- ОПОСРЕДОВАННЫЙ КИСЛОТНЫЙ И ОСМОТИЧЕСКИЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ В ПРИСУТСТВИИ ИНГИБИТОРА ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ МПО Влияние гидразида 4-аминобензойной кислоты (50 мкМ) – ингибитора ферментативной активности МПО - на степень (G) и скорость (v) кислотного и осмотического гемолиза эритроцитов в отсутствие и в присутствии 100 нМ МПО. * p

12 МПО-ОПОСРЕДОВАННЫЙ КИСЛОТНЫЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ В ПРИСУТСТВИИ НЕЙРАМИНИДАЗЫ Влияние МПО (100 нМ) на параметры кислотного гемолиза эритроцитов после обработки нейраминидазой (16 мкг/мл). * p

13 В ЛИЯНИЕ УГЛЕВОДОВ (50 М М) НА СКОРОСТЬ МПО- ОПОСРЕДОВАННОГО КИСЛОТНОГО ГЕМОЛИЗА ЭРИТРОЦИТОВ Примечание: * p

14 ВЛИЯНИЕ ФИБРИНОГЕНА (ФБ) НА МПО- ОПОСРЕДОВАННЫЙ ОСМОТИЧЕСКИЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ Влияние МПО (100 нМ) на параметры осмотического гемолиза эритроцитов после обработки ФБ (200 мкг/мл). * p

15 ВЛИЯНИЕ АЛЬБУМИНА (ЧСА) И ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА (ЦП) НА МПО-ОПОСРЕДОВАННЫЙ КИСЛОТНЫЙ ГЕМОЛИЗ ЭРИТРОЦИТОВ Влияние МПО (100 нМ) на параметры кислотного гемолиза эритроцитов после обработки ЧСА (1 мг/мл) и ЦП (300 мкг/мл). * p

16 ВЫВОДЫ : Установлено, что в присутствии МПО уменьшается устойчивость эритроцитов к кислотному и осмотическому гемолизу. Усиление кислотного и осмотического гемолиза эритроцитов в присутствии МПО не зависит от ее ферментативной активности, а обусловлено взаимодействием фермента с компонентами плазматической мембраны. Выявлено, что эффект МПО на кислотный гемолиз эритроцитов ингибируется при обработке эритроцитов нейраминидазой, отщепляющей сиаловые кислоты и снижающей поверхностный отрицательный заряд эритроцитов. В присутствии лактоферрина – катионного белка нейтрофилов, также наблюдается уменьшение устойчивости эритроцитов к гемолизу. Эти данные указывают на то, что катионные белки нейтрофилов по средством электростатических взаимодействий связываются с поверхностью эритроцитов и изменяют их структурные свойства. Установлено, что МПО-опосредованный гемолиз является результатом взаимодействия фермента с гликозилированными компонентами плазматической мембраны клеток. Выявлена способность белков плазмы крови (альбумина и церулоплазмина) препятствовать усилению кислотного гемолиза эритроцитов в присутствии МПО.

17 СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!