Лактатдегидрогеназа – относится к классу оксидоредуктаз. Оксидоредуктазы катализируют ОВР. ЛДГ – цитоплазматический цинксодержащий гликолитический фермент, - презентация

1

2

3 Лактатдегидрогеназа – относится к классу оксидоредуктаз. Оксидоредуктазы катализируют ОВР. ЛДГ – цитоплазматический цинксодержащий гликолитический фермент, обратимо катализирующий восстановление пировиноградной кислоты ( пируват ) в молочную кислоту ( лактат ) в процессе окисления глюкозы и образования молочной кислоты. ПИРУВАТ + НАД ( Н ) ЛАКТАТ + НАД

4 Фермент широко распространен в организме человека. По степени убывания активности фермента органы и ткани располагаются в следующем порядке : почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови.

5 ЛДГ имеет 5 изоферментов, представляющих различные комбинации из четырех субъединиц двух основных типов – Н ( сердце ) и М ( мышцы ) по названию органов, где обнаружена их наибольшая активность, которые обозначают цифрами от 1 до 5 : ЛДГ 1, ЛДГ 2,….. ЛДГ 5.

6 В составе изофермента может быть 4 субъединицы типа Н (4 Н ) НННН ; В другом 3 субъединицы Н и одна М (3 Н 1 М ) НННМ В 3 м – 2 субъединицы Н и 2 субъединицы М (2 Н 2 М ) ННММ ; В 4 м – 1 субъединица Н и 3 М (1 Н 3 М ) НМММ В 5 М – четыре субъединицы М (4 М ) ММММ

7 В тканях с преимущественным аэробным обменом веществ ( мозг, сердце, почки ) наибольшей активностью обладают ЛДГ 1 и ЛДГ 2; В тканях с выраженным анаэробным обменом веществ ( печень, легкие, скелетная мускулатура, и др.) преобладают ЛДГ 4 и ЛДГ 5. Изофермент ЛДГ 1 активен при низкой концентрации пирувата и ингибируется его избытком, ЛДГ 5 активен при высоких концентрациях пирувата. ЛДГ 1 происходит в основном из сердца, а ЛДГ 5 – из печени.

8 ЛДГ 1 обладает устойчивостью к действию мочевины. ЛДГ содержится не только в сыворотке, но и в эритроцитах, поэтому сыворотка для анализа должна быть свежей, без следов гемолиза. Исследование общей активности фермента характеризует интенсивность ОВР организма, определение активности отдельных изоферментов ЛДГ способствует диагностике некоторых заболеваний сердца, печени и др. органов

9 Существуют следующие методы определения общей активности ЛДГ в сыворотке крови : 1. Колориметрические : - Динитрофенилгидразиновые методы основаны на определении количества ПВК ( продукт реакции ) при помощи 2,4- ДНФГ ( унифицированный метод ) - Редоксиндикаторные методы основаны на превращении бесцветной окисленной формы тетрозолиевых солей в окрашеную форму за счет окисления восстановленного молочной кислотой НАДН.

10 2. Спектрофотометрические – основаный на различии спектров поглощения окисленной и восстановленной формой НАД. Принцип метода : ЛДГ катализирует превращение лактата в пируват при одновременном восстановлении НАД в НАД ( Н ), которые далее восстанавливает в присутствии п - метилфеназонийметилсульфата йоднитротетразониевой фиолетовый в красный формазан.

11 Одновременно с определением общей каталитической активности ЛДГ можно определить долю фермента, устойчивого к действию мочевины, что характерно для изофермента сердечной фракции. НАД ( Н )+ йоднитротетрафиолет +N- метил - Ф. красный формазан + НАД

12 В норме основным источником ЛДГ в сыворотке крови являются разрушенные клетки крови. При повреждении тканей фермент поступает в кровь. Активность общей ЛДГ возрастает при повреждении миокарда, лейкозах, почечных заболеваниях, гемолитической, серповидноклеточной анемиях, тромбоцитопениях, инфекционных мононуклеозах, а также прогрессивной мышечной дистрофии.

13 Все заболевания, протекающие с некрозом тканей ( инфаркт миокарда, некротические поражения почек, гепатиты, панкреатиты, опухоли ) как правило, сопровождаются резким повышением активности ЛДГ в сыворотке крови.

14 Увеличение активности ЛДГ 1- ЛДГ 2: - Инфаркт миокарда, анемия - Острые поражения почечной ткани - Опухолевые заболевания яичников Увеличение активности ЛДГ 3- ЛДГ 4: - Массивные разрушения тромбоцитов и вовлечение в патологический процесс лимфатической системы. Увеличение активности ЛДГ 5: - Повреждение скелетных мышц, воспалительные заболевания мышц, печени ( гепатиты, цирроз ), раковые опухоли.

15 Увеличение общей ЛДГ : - Вирусный гепатит, шок, гипоксия, обширные опухолевые процессы, циррозы, обтурационная желтуха, заболевания почек, опорно - мышечного аппарата. Нормальные показатели ЛДГ в сыворотке крови : 0,65-2,60 мккат / л Доля устойчивого к действию мочевины фермента ( сердечная фракция ) – 60-80%

16 Вопросы Тесты

17 К какому классу ферментов относится ЛДГ ? В каких органах содержится фермент ? Как различаются ферменты ЛДГ ? Где преимущественно содержится ферментЛДГ 1? Где преимущественно содержится ферментЛДГ 5? Какая фракция стабильна к мочевине ? Какими субъединицами представлен фермент ЛДГ ? Какими методами можно определить активность ЛДГ ? Почему при проведении анализа надо использовать свежую сыворотку ?

18 мышечной фракции ЛДГ 33 – – – – 80 На сколько % снижается активность ЛДГ через сутки ? 5% 20% 10% 2% При какой температуре можно хранить исследуемую пробу ? Комнатной Какими субъединицами представлен фермент ЛДГ ? М Н В Какие методы более унифицированы ? Спектрофотометрические Колориметрические Какие изоферменты определяются при массивной гемотрансфузии ЛДГ 5 ЛДГ 3 ЛДГ 1 ЛДГ 2 Какой элемент из тяжелых металлов содержит фермент ЛДГ ? Cu Zn Pb Какой фактор влияет на получение достоверного ответа ? Гемолиз эритроцитов Изменение температуры на 2 градуса Действие ингибиторов Выберите сердечную фракцию ЛДГ ЛДГ 2 ЛДГ 1 ЛДГ 4 ЛДГ 5 Чем характеризуется фермент ЛДГ ? Изофермент Обладает обратимостью действия Оксидоредуктаза Органоспецифичность Все ответы верны