Векторные наносистемы в диагностике опухолей мозга Володин Н.Н., В. П. Чехонин, В.П. Баклаушев, О.И. Гурина, Кафедра медицинских нанобиотехнологий НИУ. - презентация

1 Векторные наносистемы в диагностике опухолей мозга Володин Н.Н., В. П. Чехонин, В.П. Баклаушев, О.И. Гурина, Кафедра медицинских нанобиотехнологий НИУ РГМУ им. Н.И. Пирогова, Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГУ ГНЦССП им. В.П. Сербского Россия, Москва

2 Общая стратегия разработки иммунолипосомальных наноконтейнеров для направленного транспорта диагностических и лекарственных препаратов в очаг глиомы Моделирование глиобластомы Моделирование глиобластомы Культура глиомы Стереотаксическая имплантация в мозг крысе Получение моноклональных антител к белкам-мишеням в опухоли (GFAP, Сх43, VEGF, Integrin v 3 ) Получение моноклональных антител к белкам-мишеням в опухоли (GFAP, Сх43, VEGF, Integrin v 3 ) Прямая конъюгация антител и их фрагментов с радиоизотопом или наноконтейнером Многокомпонентные системы Pretargeting Радиоиммунодиагностика и радиоиммунотерапия Направленный транспорт с помощью иммунолипосом и наночастиц, конъюгированных с авидином 1 2 2

3 Структура ПЭГилированных липосом с соответствующим вектором Участки ПЭГ Молекулы векторных моноклональных анти- GFAP-антител

4 Иммуноцитохимический анализ Сx43 на препаратах глиомы С6 Nissl staining GFAP-immunoreactivity Cx43-immunoreactivity (extracellular loop)

5 Результаты иммунофлюоресцентного анализа распределения ПЭГилированных иммунолипосом в культуре эмбриональных астроцитов крысы (Drug Delivery, 2005, V 12, 1, p. 1-6) 1 – картина флюоресцентной микроскопии препарата культуры эмбриональных астроцитов крысы (увеличение 1 200). Препарат инкубировали с ПЭГилированными векторными липосомами, конъюгированными с моноклональными анти-GFAP-антителами, содержащими флуоресцентный индикатор Dil (без включения пептида) в течение 3 часов; 2 – картина флюоресцентной микроскопии препарата культуры эмбриональных астроцитов крысы (увеличение 1 200). Препарат инкубировали с ПЭГилированными векторными липосомами, конъюгированнымис неспецифическим для антигенов астроцитов препаратом IgG мыши, содержащим флуоресцентный индикатор Dil (без включения пептида) в течение 3 часов; 1 2

6 Направленный транспорт липосомальных наноконтейнеров в культуру клеток глиомы С6 А. Mab Cx43- биотин + Векторные SAv- липосомы с Dil Б. Избыток Mab Сx43 + Mab Cx43- биотин + Векторные SAv- липосомы с Dil В.Г. – контроли с неспецифическими биотинилированны ми антителами

7 Визуализация Cx43-позитивных клеток в зоне перитуморального астроглиального вала MAb E2 Cx43 меченными Alexa Fluor 660 Зеленая флюоресценция: поликлональные антитела к GFAP + Antirabbit Alexa Fluor 488 (Invitrogen) Красная флюресценция: моноклональные антитела к экстраклеточному фрагменту Е2 Сх43, меченные Alexa Fluor 660 (ВНУТРИВЕННОЕ ВВЕДЕНИЕ!) Зеленая флюоресценция: поликлональные антитела к GFAP + Antirabbit Alexa Fluor 488 (Invitrogen) Красная флюресценция: моноклональные антитела к экстраклеточному фрагменту Е2 Сх43, меченные Alexa Fluor 660 (ВНУТРИВЕННОЕ ВВЕДЕНИЕ!)

8 Доставка Gd-DTPA-содержащих наносистем в очаг глиомы (совместно с ЦМТС МГУ им. Ломоносова) Мицеллы Липосомы Наночастицы

9 Предварительные результаты испытания GD-содержащих векторных липосом для визуализации периферии глиомы Совместное исследование с ЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова (Ю.А. Пирогов, Д.А. Куприянов, А.А.Учеваткин)

10 Визуализация коннексонов на живой культуре C6 глиомы

11 Адресная доставка иммунолипосом после внутривенного введения крысам с экспериментальной глиомой А. Флюоресцентно-меченые иммунолипосомы (Dil C18) с антителами к GFAP, визуализированные с помощью сканирующей лазерной конфокальной микроскопии. Б. – Невекторные липосомы с Dil C18, конъюгированные с неспецифическими иммуноглобулинами мыши А. Флюоресцентно-меченые иммунолипосомы (Dil C18) с антителами к GFAP, визуализированные с помощью сканирующей лазерной конфокальной микроскопии. Б. – Невекторные липосомы с Dil C18, конъюгированные с неспецифическими иммуноглобулинами мыши МРТ мозга крыс с глиомой после внутривенного введения иммунолипосом с GdDTPA с антителами к E2 Cx43

12 GLIOMA C6 Immunohistochemical analysis of the endothelial and astroglial markers А.,B. Immunohisto- chemical analysis of the AMVB1 (MAb2mB6). C.,D. Immunohisto- chemical analysis of the GFAP ) (MAb GFAP) А.,В.: the second Ab Texas Red; nucleus - DAPI. B C A D