Www.r-biopharm.deApril / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Иммунологические методы диагностики паразитарных и острых кишечных. - презентация

1 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Иммунологические методы диагностики паразитарных и острых кишечных инфекций

2 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Индустриальные страны Второе по распространенности заболевание после болезней дыхательных путей. По оценкам ВОЗ являются причиной 4% смертельных исходов во всем мире Каждый ребенок болеет гастроэнтеритом 1-3 раза в год (5-20 раз в развивающихся странах) Германия До 1998 г. причина более 50% эпидемий гастроэнтеритов оставалась невыясненной Введение

3 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Ротавирус Астровирус Аденовирус Энтеровирус Саповирус Коронавирус Сальмонеллы Кампилобактер Шигеллы E.coli (EHEC) C. difficile C. perfringens Лямблии (жиардии) Криптоспоридии Энтамёбы Трихинеллы Инфекция Норовирус тип инфекции вируснаябактериальнаяпаразитарная

4 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Общепринятая (традиционная) диагностика: Классическая микробиология (TPGR = тиф, паратиф, микроорганизмы, устойчивость) Сальмонеллы Шигеллы Кампилобактер Вторая ступень диагностики: Вирусология: ротавирус Паразитология: глисты и яйца глист

5 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Результаты К сожалению, более, чем 60% всех исследований заканчиваются без выяснения причины или без идентификации микроорганизма, вызвавшего появление клинических симптомов

6 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Единичные случаи не придаются огласке Эпидемии не исследуются Не собираются образцы Не проводится рутинное тестирование Тестируют лишь традиционные параметры Почему такие распространенные заболевания так редко диагностируются? Недостатки диагностики

7 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Бактериальные токсины Clostridium difficile токсин A/B Clostridium perfringens энтеротоксин Веротоксины 1 и 2 (шига-подобные токсины, SLT I/II)

8 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Cd & Cp – клинические аспекты -Важность гигиены (споры!!!!) -Симптомы: (AA-) Диарея вплоть до смертельных случаев (PMC) -Дети (до 2 лет 50% +!) -Гериатрия -Индикация мишени в лабораториях -В основном в больничных условиях (интенсивная терапия) -Дифференциальная диагностика в амбулаторных условиях

9 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Clostridum dificile Одно из наиболее важных исследований кала В развитых странах тест на токсины A и B является «золотым стандартом» Культивирование требует много времени, связано с трудностями и недостаточно специфично (токсин-негативные штаммы) С помощью экспресс- тестов и других методов, определяющих только токсина А, можно проглядеть наличие фатальных инфекций!!!!!

10 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Clostridium perfringens НОВЫЙ появившийся параметр Исследования показали, что С. perfringens также необходимо определять в параллель во всех случаях, указывающих на наличие клостридий!!!! Не уступает по распространенности C. difficile Мы ожидаем, что очень скоро С. perfringens приобретет такое же важное значение, что и C. difficile

11 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Веротоксины Вызывают гемолитико-уремический синдром (HUS) (смертельный для детей) Выделяются энтерогеморрагическими E. coli (EHEC) Фекально-оральный механизм передачи Приобретают политическое значение В Германии ВСЕ образцы кровянистого и водянистого стула ДОЛЖНЫ быть протестированы Так как существует более, чем 500 известных штаммов EHEC безусловно не достаточно проводить тесты только на штамм O-157:H7 (менее 10%)

12 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Клостридии (Clostridium difficile & perfringens) Классическое культивирование на различных агарах/бульонах -Занимает много времени -Зависит от практического опыта и условий (название Clostridium difficile появилось из-за больших сложностей при облигатно-анаэробном культивировании) -Не обнаруживает присутствие самих патогенов!

13 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Clostridium difficile & perfringens: Патогенами являются ТОКСИНЫ, а не сами бактерии! Альтернативный метод: Цитотоксический тест (с веро-клетками): -Только в специализированных лабораториях Диагноз иногда ставится только после смерти

14 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Clostridium difficile токсин A и B Clostridium perfringens энтеротоксин Новый «золотой стандарт»: ИФА -Основан на высокой чувствительности и специфичности моноклональных антител -Простой, быстрый и надежный диагностический инструмент -Немедленно полученные результаты могут спасти жизни больных и ускорить улучшение состояния пациентов

15 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Энтерогеморрагические E. coli (EHEC) Классическое культивирование на различных агарах/бульонах -Требует много времени -Зависит от практических навыков и условий -Не обнаруживает присутствия самих патогенов!

16 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика EHEC Патогенами являются ТОКСИНЫ, но не сами бактерии! Альтернативный метод определения: Цитотоксический тест (с веро-клетками): -Только в специализированных лабораторпиях Диагноз иногда устанавливается после смерти (гемолитико-уремический синдром)

17 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Веротоксины 1 и 2 (шига-подобные токсины I/II) EHEC Новый «золотой стандарт»: селективное культивирование EHEC и метод ИФА для обнаружения веротоксинов -Культивирование для определения веротоксинов нуждается в селективной питательной среде (MTSB + митомицин) -Основан на высокой чувствительности и специфичности моноклональных антител -Простой, быстрый и надежный диагностический инструмент -Немедленно получаемые результаты могут спасти жизни и ускорить улучшение состояния пациентов

18 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Бактерии Кампилобактер

19 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Распространение инфекция распространена повсеместно источниками инфекции являются птицы и млекопитающие; кишечные симбионты домашней птицы, в отличие от сальмонелл, не присутствующие в яйцах, и другие дикие и домашние животные обнаруживается преимущественно в теплое время года диарея путешественников поражает преимущественно детей моложе 6 лет и взрослых людей от 18 до 35 лет После сальмонелл это наиболее часто встречающийся патоген, вызывающий гастроэнтерит, с возрастающей тенденцией наблюдается во всей Европе (единичные случаи и эпидемии) Инфекция

20 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Классическое культивирование на различных агарах -Требует много времени (до 72 часов) -Зависит от практических навыков и условий (образец должен быть по возможности свежим; при хранении более, чем 2 часа, образец следует заморозить!) -Отсутствие стандартизованного метода культивирования во всем мире Кампилобактер (Campylobacter jejuni & coli)

21 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Кампилобактер ИФА на антиген в кале -Немедленные (!!!) результаты, сходные по чувствительности и специфичности с методом культивирования -Нет необходимости в интактных клетках (задержка во времени из-за транспортировки образцов не сказывается на результатах) -Быстрый, простой и надежный диагностический и инструмент

22 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Вирусы Ротавирус Аденовирус Астровирус Норовирус

23 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекции Клинические аспекты Вызывают +/- тяжелые (кратковременные) диареи Нет лечения (симптоматическое лечение) Важность соблюдения гигиены в больницах (в основном в детских)!!! Смертельны для детей (и пожилых людей) Дифференциальная диагностика В настоящее время в некоторой степени рутинная диагностика (стандартные параметры)

24 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Ротавирус Ответственен за >30% вирусных кишечных инфекций Наиболее частый параметр лабораторных исследований кала Стандартный параметр в педиатрии Необходимо принимать во внимание в случае пациентов пожилого возраста Заболевание заканчивается преимущественно само по себе без лечения Обнаруживается как в больничных, так и амбулаторных условиях

25 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Аденовирус Намного менее важны по сравнению с ротавирусами (прибл. 3%) Показания те же, что и для ротавирусов Мы используем моноклональные антитела к гексону определение ВСЕХ серотипов (а не только 40/41) Можно также использовать при конъюктивитах и для фарингеальных мазков 60% респираторных инфекций у детей вызывают диарею, как побочное явление В развивающихся странах часто используют, как «диагностическую пару», вместе с ротавирусом

26 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Астровирус НОВЫЙ параметр Исследован и энергично разработан в Скандинавских странах 6 лет назад Те же показания, что и при ротавирусе Важность меньше, чем в случае ротавируса, но значительно больше, чем в случае аденовируса (8%-20%) !!!!! Ввиду нестабильности размеров вируса, часто неправильно диагностируется электронной микроскопией

27 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Европа> 85% всех зарегистрированных эпидемий в 1995 – 2000 были вызваны норовирусом СШАЕжегодно регистрируется 23 миллиона случаев инфекции норовирусом (всего > 60 %, 3 из 4 случаев вирусных инфекций) Норовирус

28 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Mead et al., Emerg Inf Dis, 1999;5: Норовирус

29 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Природные источники Пища: мороженое, зеленый салат, фруктовый и картофельный салаты, выпечка, дыни, морепродукты, например, устрицы, лангусты Вода:бассейны, пляжи, грунтовые воды, питьевая вода Фекально-оральная, аэрозоли, от человека к человеку Передача Норовирус

30 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика 1.Дифференциальная диагностика -Чтобы свести к минимуму применение антибиотиков (MRS) -Распознавание дополнительных/двойных инфекций -Особенно в случае ротавирусной инфекции у детей немедленная водо- и электролито-замещающая терапия 2. Контроль эпидемий -Заинтересованность в здоровье нации -Спасение жизни пациентов с многочисленными заболеваниями/защита от осложнений -Предупреждение быстрого распространения в закрытых учреждениях (больницы, дома престарелых, детские учреждения и т.д.) -Эпидемиологический интерес (норовирус) Зачем диагностировать заболевание, если нет способов его лечения?

31 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика 1.Культивирование -Очень затруднительно (использование яиц или тканей) -Крайне проблематично для астровируса, а для норовируса в настоящее время НЕ ВОЗМОЖНО 2. Электронная микроскопия -Дорогое оборудование -Необходимы практические навыки -Занимает много времени -Соответственно низкая чувствительность -Специфичность для маленьких частиц низка Вирусы

32 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика 3. ПЦР -Дорогие технология и оборудование -Необходимы практические навыки и аппаратура -Требует много времени -Чувствительность может быть «слишком высокой» (положительный результат может не иметь отношение к микроорганизму, вызвавшему заболевание причина заболевания остается невыясненной) -Специфичность может быть «слишком высокой» (отрицательный результат может быть связан с неподходящей парой праймеров или с используемой технологией) Вирусы

33 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика 4. ИФА и ИХ экспресс-тесты -Очень быстрые и простые в работе методы -Очень высокая чувствительность и специфичность моноклональных антител (около 100%) -Нет необходимости в квалифицированном персонале -Надежные и воспроизводимые диагностические результаты -Экономически выгодные методы -В формате экспресс-тестов пока не все параметры доступны Вирусы

34 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Паразиты Лямблии (жиардии) Криптоспоридии Энтамёбы (дизентерийные амёбы)

35 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

36 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

37 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция Giardia

38 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

39 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

40 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

41 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

42 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

43 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

44 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

45 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Инфекция

46 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Обзор диагностических методов Микроскопия Культивирование ПЦР ИФА ИХ экспресс-тесты

47 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Микроскопия Электронная микроскопия (вирусы) -Дорогостоящее оборудование -Необходимость в практических навыках -Ограниченная чувствительность -НЕЛЬЗЯ использовать для рутинной диагностики

48 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Микроскопия Световая микроскопия (трофозоиты и цисты) -Необходимость в практических навыках -Занимает много времени -Даже 3 последовательно взятых независимых образца обеспечивают в сумме чувствительность не выше 90% -Низкая стоимость -Один слайд = много различных возможных диагнозов

49 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Микроскопия С окраской мазков (паразиты) -Те же требования и возможности, что и в световой микроскопии -Различные красители и их модификации -Здесь также необходимы практические навыки -Более высокая чувствительность из-за легкого распознавания видов -Одно окрашивание = 2 возможных результата (Gia+Cry)

50 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Микроскопия Иммунофлуоресцентный метод (паразиты) -Использует флуоресцентные красители, конъюгированные со специфическими антителами -Более высокая специфичность и чувствительность, чем при световой микроскопии, НО: также необходимы интактные клетки!!! -Нужен флуоресцентный микроскоп -Необходимы практические навыки

51 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика ПЦР (любые микроорганизмы) Очень высокая специфичность (если позволяют лабораторные условия!!!) Очень высокая чувствительность (достаточно одной единственной ДНК/РНК) -ОДНАКО : положительный результат может быть «слишком чувствительным», так как может отсутствовать связь между определяемым видом и клинической картиной -Наиболее дорогой метод (трудозатраты и оборудование) -Зависит от профессиональных навыков и правильности выбора праймеров (в особенности для вирусов)

52 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика ПЦР Не подходит для рутинной диагностики Выполняется только в больших и референсных лабораториях В основном используется для подтверждения диагноза или при эпидемиях ПЦР не всегда является достаточным для диагностики или «золотым стандартом»

53 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика ИФА Очень простой и легкий в выполнении метод (при постановке вручную) Возможен автоматизированный анализ даже большого количества образцов Высокая чувствительность и специфичность (почти 100%), не нужны интактные клетки возбудителей инфекций Подходит для рутинной диагностики в любой лаборатории

54 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика ИФА Применим для диагностики всех перечисленных выше инфекций Стрипы из различных наборов RIDASCREEN могут быть скомбинированы и одновременно поставлены на одном микропланшете (одинаковая процедура исследования для различных наборов) Экономически выгодный метод Открытая система: для выполнения этих тестов может быть использовано любое оборудование для ИФА Оптимальный диагностический инструмент для диагностики гастроэнтерита в любых лабораториях

55 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Диагностика Иммунохроматографические экспресс-тесты Чувствительность и специфичность, как у ИФА Более быстрый (прибл. 5 мин) и простой (1 стадия) метод Идеальный метод, не требующий квалифицированного персонала, для подтверждения диагноза или для единичных определений Экономичный Доступен в кассетном и стриповом форматах

56 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Гастроэнтерит Выводы Иммунологические методы признаны надежными, простыми и удобными в применении для любых лабораторий. Для метода характерны высокая чувствительность и специфичность. Они стали стандартными диагностическими инструментами при обнаружении антигенов в образцах кала в клинических лабораториях по всему миру. R-Biopharm предлагает полный и уникальный спектр ИФА тест-систем и экспресс-тестов для диагностики кишечных инфекций в кале

57 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Диагностика кала ИФА Ротавирус Аденовирус Астровирус Норовирус (новый) Лямблии Криптоспоридии Энтамёбы Веротоксин C.difficile токсины А и В C. perfringens энтеротоксин Кампилобактер Экспресс-тесты Ротавирус Ротавирус/Аденовирус Лямблии Криптоспоридии/Лямблии Криптоспоридии Скоро (2005 г.): Энтамёбы Энтамёбы/Криптоспоридии/ Лямблии Выводы Гастроэнтерит

58 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Внешний вид набора ИФА Выводы Гастроэнтерит

59 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch Внешний вид набора для экспресс-диагностики Кассеты (20 кассет в наборе) Тест-полоски (25 полосок в наборе) Выводы Гастроэнтерит

60 / 2005 Диагностика желудочно-кишечных заболеваний Jens-Uwe Wuensch ИФА наборы RIDASCREEN ® для определения антител к паразитарным инфекциям в сыворотке крови: RIDASCREEN ® Эхинококки IgGK 7621 RIDASCREEN ® Энтамёбы IgGK 1721 RIDASCREEN ® Лейшмании AbK 7121 RIDASCREEN ® Тении (Цистицеркоз) IgGK 7721 RIDASCREEN ® Токсокары IgGK 7421 RIDASCREEN ® Трихинеллы IgGK 7521 Выводы Гастроэнтерит