Методы лабораторного исследования гемостаза 1. Скрининговые исследования 2. Исследование сосудисто- тромбоцитарного звена гемостаза. - презентация

1 Методы лабораторного исследования гемостаза 1. Скрининговые исследования 2. Исследование сосудисто- тромбоцитарного звена гемостаза

2 Лабораторные методы, используемые в исследовании гемостаза: Клоттинговые: (ВСК, ПВ, АПТВ, ТВ …) Хромогенные: (активность ATIII, PC, Pl) Иммунологические:(количество отдельных факторов) ПЦР: (ДНК-диагностика наследственных гемофилий и тромбофилий: аномалия Лейдена, гомоцистеинемия, дефицит AT) Проточная цитофлуориметрия: (определение рецепторов тромбоцитов) Нефелометрия: (исследование функции тромбоцитов по методу Born)

3 Клоттинговые методы: - основаны на определении времени образования, а также растворения сгустка в стандартных условиях; - определяется активность отдельных звеньев системы свертывания и фибринолиза.

4 Хромогенные методы: - это хромогенное (оптическое) определение хромогенных (окрашенных) веществ (нитроанилина) связанных с субстратами (белками) специфических реакций; - так определяется активность отдельных компонентов свертывающей, антитромбиновой или фибринолитической системы. Пример: Стрептокиназа + плазминоген** = плазмин + свободный нитроанилин**(желтая окраска)

5 Скрининговые тесты гемостаза: 1) Определение резистентности микрососудов: - манжеточная проба; -баночная проба; -проба щипка 2) Определение времени кровотечения: - по Дьюка; - по Айви; - по Шитиковой 3) Определение времени свертывания крови: - по Ли и Уайту

6 Манжеточная проба Выполнение: Создают венозный стаз путем дозированного сжатия плеча манжеткой тонометра (90 мм на 5 минут) и подсчитывают количество петехий в в верхней ладонной поверхности предплечья и локтевого сгиба. Клиническое значение: Положительная проба возможна при врожденной ломкости капиляров, тромбоцитопении, значительной тромбоцитопатии, гиповитаминозе С, болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

7 Время кровотечения - тест общего состояния сосудисто- тромбоцитарного звена гемостаза Выполнение: Определяют длительность кровотечения из микрососудов кожи после дозированного (3 мм) прокола ее ланцетом. Клиническое значение: Удлинение времени кровотечения возможна при значительной тромбоцитопении, тяжелых формах тромбоцитопатии (тробастения Гланцмана), болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

8 Оценка работы первичного гемостаза

9 Platelet Function аnalyzer-100 Прибор для количественной оценки гемостатической функции тромбоцитов

10 Определение количества тромбоцитов : ( х10/л) 1) В мазке по Фонио: не может быть рекомендован из-за малой точности. 2) Подсчет в камере Горяева после гемолиза эритроцитов оксалатом аммония. 3) С помощью автоматического счетчика в венозной крови, стабилизированной ЭДТА.

11 Исследование функции тромбоцитов Выполняется из венозной крови, стабилизированной цитратом натрия в соотношении 1/9; в течении 1 часа после забора крови. Богатая тромбоцитами плазма - отбирают после центрифугирования крови при 1000 оборотов /6 минут Бедная тромбоцитами плазма - отбирают после центрифугирования крови при 3000 оборотов/ 15 минут

12 Исследование функции тромбоцитов: РЕТРАКЦИЯ В ПЛАЗМЕ (богатой тромбоцитами) Пробирка полистироловая мерная: 2,5 мл забуференного физ.раствора 0,2 мл тромбина 0,2 мл Ca Cl 2 (0,277%) Добавить 0,2 плазмы, богатой тромбоцитами Перемешать, вылить в пластиковый шприц на 5,0 мл инкубировать 60 минут при 37 0 С Вынуть сгусток Замерить объем Расчет: Vост/ Vобщ. 100%

13 Исследование агрегации тромбоцитов ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД Борна - основан на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы после активации индукторами. Индукторы агрегации - естественные или искуственные активаторы: АДФ; Адреналин; Коллаген; Ристоцетин и др.

14 Агрегометр HELENA PACKS-4 СПИСОК МЕТОДИК: Агрегация с АДФ Агрегация с эпинефрином Агрегация с коллагеном Агрегация с ристоцетином Агрегация с арахидонатом Активность фактора фон Виллебранда (по ристоцетин-кофакторной активности) Хромогенное определение: Антитромбина III Плазминогена Протеина С Гепарина Активности фактора VIII

15 AP 2110 Анализатор агрегации тромбоцитов предназначен для исследования in vitro агрегационных свойств тромбоцитов турбидиметрическим методом. Анализатор агрегации тромбоцитов АMS 600 Агрегометры

16 Агрегометр LA230 ( " БИОЛА" Россия) Двухканальный анализатор агрегации тромбоцитов Прибор позволяет проводить в каждом канале исследования агрегации тромбоцитов методом светопропускания и определения среднего радиуса тромбоцитарных агрегатов. Агрегометр тромбоцитарный "CHRONOLOG CORP." (США) Агрегометр 430 (одноканальный) Агрегометр 440VS(двухканальный) Агрегометр 470VS(четырехканальный) Оптический анализатор агрегации тромбоцитов служит для исследования агрегационных свойств тромбоцитов в плазме. Агрегометры

17 Оптическая агрегометрия используется для исследования процессов агрегации на плазме обогащенной тромбоцитами (PRP), а также для измерения агглютинации латексных частиц и для исследования изменения формы взвешенных частиц. Оптические агрегометры «Хроно-лог» с успехом используются во всем мире уже многие годы, начиная с 1967 г и являются «золотым» стандартом в оптической агрегометрии. Двойной инфра-красный луч и чувствительный фотодетекторный модуль используется для определения разницы в световом прохождении между плазмой обогащенной и обедненной тромбоцитами. Цельная кровь, разведенная кровь, плазма обогащенная тромбоцитами, отмытые тромбоциты, отмытые лейкоциты – все эти образцы могут быть измерены с помощью импедансной технологии. Корпорация «Хроно-лог» обладает патентом на применение этого метода.

18 Широкий спектр люминисцентных реакций (выброс АДФ, уровень ионизированного кальция, генерация супероксидов и др.) может быть измерен при помощи ультра-чувствительной фотоумножительной трубки, которая испльзуется в люми-агрегометрах корпорации Хроно-лог. Люминисценция используется для детекции всех дефектов накопления и секреции. Этот метод также достаточно чувствительный для детекции гепарин- индуцированной тромбопении.

19 Тромбоэластограф Гематокоагулограф ГКГМ4-02 тромбоэластограф

20 ПРИМЕРЫ ГРАФИКОВ ОСНОВНЫЕ ИЗМЕРЯЕМЫЕ ПАРАМЕТРЫ CT (время коагуляции) - общая активность коагуляционной системы CFT (время образования сгустка) и a-угол (начальная скорость оборазования сгустка) – оценка функции тромбоцитов, действия фактора XIII, полимеризации фибрина, активности гепарина MA (или MCF) – качество сгустка, оценка его механических свойств LOT (время наступления фибринолиза) – оценка фибринолитической активности l-угол – скорость фибринолиза роТЭГ " Анализатор гемостаза роТЭГ " это современный 4-х канальный компьютерный тромбоэластограф.

21 ИДЦ г.г. Автоматический коагулометр STA-R Evolution Roche Diagnostics, Франция

22 Гемостаз в ИДЦ

23 Спектр анализов лаборатории гематологии ИДЦ с учетом гомеостатических методов Полный гематологический анализ Миелограмма Протромбиновое время и фибриноген Коагулограмма стандартная Ретикулоциты Цитограмма (мазок из носа или глаза) LE-клетки Осмотическая резистентность эритроцитов Ретракция плазменного сгустка Агрегация тромбоцитов с АДФ Агрегация тромбоцитов с ристоцетином Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой Агрегация тромбоцитов с коллагеном Агрегация тромбоцитов с адреналином Определение фактора Виллебранда Активность фактора свертывания крови XII Активность фактора свертывания крови VIIIАктивность фактора свертывания крови IXАктивность фактора свертывания крови XI Активность комплекса протеина С (скрининг) Активность антитромбина III Активность протеина С Активность плазминогена Активность альфа-2-антиплазмина АПТВ с люпус-чувствительным кефалином Время кровотечения Коррекционно-ингибиторная проба по АПТВ Коррекционно-ингибиторная проба по ПТИ Определение групповой принадлежности по АВО Определение резус-антигенов Фибринолиз Активность фактора свертывания крови II Активность фактора свертывания крови V Активность фактора свертывания крови VII Активность фактора свертывания крови X Активность фибриназы (фактор XIII) Коагулограмма (тромбогенный риск) Протромбиновое время (с МНО) Фибриноген Активированное время рекальциф Активированное парциальное тро Тромбиновое время Растворимые фибрин-мономерные Содержание Д-димера

24 -Диагностика тромбофилий - Диагностика гемофилий -Мониторинг противо-гемофилийной терапии для пациентов с наличием ингибитора фактора VIII -Мониторинг антикоагулянтной терапии, направленной на ингибирование тромбина и фактора Xa (гепарин) TGA-анализ – универсальный метод оценки тромбогенного потенциала гемостаза

25 CEVERON-ALPHA для 4 методов анализа: - коагулометрия АЧТВ, ПВ, ТВ, Фибриноген, Протеин С, ВА, дефицит факторов свертывания, мутация Лейдена и другие. - фотометрия С1-ингибитор, FVIII, Протеин С, АТ-III и другие. - турбидиметрия Д-димер, ВА, С- реактивный белок и другие. - флуориметрия кинетика образования эндогенного тромбина (для модификации Ceveron TGA) Автомат CEVERON- ALPHA TGA позволяет проводить уникальный флуориметрический TGA-анализ 360/430 нм Длины волн фотометрического блока: 405, 570, 630 и 740 нм Скорость проведения анализов на CEVERON- ALPHA до 70 образцов/час (ПВ) (Стационар на больных)

26 Спасибо за внимание!