Трансферазы- ферменты, катализирующие перенос различных групп атомов от одной молекулы к другой. Трансферазы- ферменты, катализирующие перенос различных. - презентация

1

2 Трансферазы- ферменты, катализирующие перенос различных групп атомов от одной молекулы к другой. Трансферазы- ферменты, катализирующие перенос различных групп атомов от одной молекулы к другой. АМИНОТРАСФЕРАЗЫ- катализируют перенос аминогруппы от аминокислоты на кетокислоту. АМИНОТРАСФЕРАЗЫ- катализируют перенос аминогруппы от аминокислоты на кетокислоту. АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗА- катализирует перенос аминогруппы от Ĺаланина к α –кетоглутаровой ислоте. АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗА- катализирует перенос аминогруппы от Ĺаланина к α –кетоглутаровой ислоте. АСПАРТАТАМИНОТРАСФЕРАЗА- катализирует перенос аминогруппы от аспарагиновой кислоты к α – кетоглутаровой ислоте АСПАРТАТАМИНОТРАСФЕРАЗА- катализирует перенос аминогруппы от аспарагиновой кислоты к α – кетоглутаровой ислоте

3 Аминотрансферазы: аланинаминотранс Аминотрансферазы: аланинаминотранс фераза (АЛТ), аспартатаминотранс фераза (АСТ)- близкие по действию ферменты, участвующие в обмене аминокислот. Коферметом является пиридоксальфосфат. Реакция обратима. фераза (АЛТ), аспартатаминотранс фераза (АСТ)- близкие по действию ферменты, участвующие в обмене аминокислот. Коферметом является пиридоксальфосфат. Реакция обратима.

4 Клиническое значение аминотрансфераз Клиническое значение аминотрансфераз Аминотрансферазы - ферменты, катализирующие межмолекулярный перенос аминогруппы между аминокислотами и кетокислотами. Аминотрансферазы - ферменты, катализирующие межмолекулярный перенос аминогруппы между аминокислотами и кетокислотами. Наибольшее клинико-диагностическое значение имеет определение двух аминотрансфераз: аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ). Наибольшее клинико-диагностическое значение имеет определение двух аминотрансфераз: аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ). Различия в наименовании аминотрансфераз определяются названием той аминокислоты, от которой отделяются аминогруппа. Фермент, катализирующий перенос аминогруппы с аспарагиновой кислоты на кетоглутаровую кислоту, получил название АСТ. Фермент же, катализирующий обратимый перенос аминогруппы с аланина на кетоглутаровую кислоту называется АЛТ. Различия в наименовании аминотрансфераз определяются названием той аминокислоты, от которой отделяются аминогруппа. Фермент, катализирующий перенос аминогруппы с аспарагиновой кислоты на кетоглутаровую кислоту, получил название АСТ. Фермент же, катализирующий обратимый перенос аминогруппы с аланина на кетоглутаровую кислоту называется АЛТ.

5 Фермент АСТ имеется во всех тканях тела, но наибольшая активность его наблюдается в печени, сердце, скелетных мышцах и эритроцитах. Наименьшая активность АСТ отмечена в коже, почках, поджелудочной железе. Фермент АСТ имеется во всех тканях тела, но наибольшая активность его наблюдается в печени, сердце, скелетных мышцах и эритроцитах. Наименьшая активность АСТ отмечена в коже, почках, поджелудочной железе.сердце

6 Самое большое количество АЛТ находится в печени, что определяет важное диагностическое значение активности фермента при заболеваниях этого органа Самое большое количество АЛТ находится в печени, что определяет важное диагностическое значение активности фермента при заболеваниях этого органапечени

7 Содержание АСТ и АЛТ в различных клетках в порядке уменьшения их концентрации.

8 Нормальная активность АСТ в сыворотке крови МЕ/л или до 40 ед. Нормальная активность АСТ в сыворотке крови МЕ/л или до 40 ед. Нормальная активность АЛТ в сыворотке крови 7-40 МЕ/л или до 40 ед. Нормальная активность АЛТ в сыворотке крови 7-40 МЕ/л или до 40 ед.

9 При поражении клеток печени вирусами, различными химическими веществами, в том числе алкоголем и лекарствами (гепатиты), а также при нарушении оттока желчи из-за сдавления желчного протока или его закупорки камнями, активность АЛТ в крови существенно увеличивается пропорционально тяжести заболевания, и в острых случаях может в 5-10 раз превышать норму. Повышение активности фермента происходит значительно раньше, чем другие очевидные признаки заболевания (желтуха, болевые ощущения и др.). При поражении клеток печени вирусами, различными химическими веществами, в том числе алкоголем и лекарствами (гепатиты), а также при нарушении оттока желчи из-за сдавления желчного протока или его закупорки камнями, активность АЛТ в крови существенно увеличивается пропорционально тяжести заболевания, и в острых случаях может в 5-10 раз превышать норму. Повышение активности фермента происходит значительно раньше, чем другие очевидные признаки заболевания (желтуха, болевые ощущения и др.). Определение активности АЛТ обязательно для всех доноров крови для исключения хронических заболеваний печени. Определение активности АЛТ обязательно для всех доноров крови для исключения хронических заболеваний печени.

10 АСТ в большом количестве находится в сердце и печени, что используется для диагностики заболеваний этих органов. АСТ в большом количестве находится в сердце и печени, что используется для диагностики заболеваний этих органов. Повышение активности фермента происходит при тех же заболеваниях печени, что и АЛТ, но пропорция между увеличением АСТ и АЛТ при разных заболеваниях различна, поэтому их одновременное определение дает врачу хорошую информацию для постановки точного диагноза. Увеличение активности фермента при инфаркте миокарда происходит через 6-8часов, максимальная активность через часов и снижается до нормы через5-6 дней. Повышение активности фермента происходит при тех же заболеваниях печени, что и АЛТ, но пропорция между увеличением АСТ и АЛТ при разных заболеваниях различна, поэтому их одновременное определение дает врачу хорошую информацию для постановки точного диагноза. Увеличение активности фермента при инфаркте миокарда происходит через 6-8часов, максимальная активность через часов и снижается до нормы через5-6 дней.

11 Для постановки диагноза важно значение коэффициента Для постановки диагноза важно значение коэффициента Де Ритиса (АСТ/АЛТ)=1,33. Де Ритиса (АСТ/АЛТ)=1,33. При заболевании печени величина ниже этого значения, при заболеваниях сердца –выше. При заболевании печени величина ниже этого значения, при заболеваниях сердца –выше. Снижение активности АСТ и АЛТ ниже нормы встречается только при тяжелых поражениях печени, когда значительно уменьшается количество клеток, синтезирующих эти ферменты (обширный некроз, цирроз). Снижение активности АСТ и АЛТ ниже нормы встречается только при тяжелых поражениях печени, когда значительно уменьшается количество клеток, синтезирующих эти ферменты (обширный некроз, цирроз). Период полувыведения АСТ составляет 17 часов, АЛТ-47часов. Период полувыведения АСТ составляет 17 часов, АЛТ-47часов. АЛТ локализуется преимущественно в цитоплазме гепатоцитов. АСТ в цитоплазме и митохондриях клетки. АЛТ локализуется преимущественно в цитоплазме гепатоцитов. АСТ в цитоплазме и митохондриях клетки.

12 АСТ и АЛТ обладают различной активностью в различных органах и тканях. Наибольшая активность АСТ наблюдается в сердечной мышце, а АЛТ в ткани печени.В сыворотке активность аминотрасфераз низка и заметно повышается при нарушении целостности мембран клеток печени или сердечной мышцы. АСТ и АЛТ обладают различной активностью в различных органах и тканях. Наибольшая активность АСТ наблюдается в сердечной мышце, а АЛТ в ткани печени.В сыворотке активность аминотрасфераз низка и заметно повышается при нарушении целостности мембран клеток печени или сердечной мышцы.

13 Определение активности в сыворотке крови является важным тестом для диагностики инфаркта миокарда и вирусного гепатита. Изучают активность АЛТ и АСТ в сыворотке крови, а также В тканях печени и сердца. Определение активности в сыворотке крови является важным тестом для диагностики инфаркта миокарда и вирусного гепатита. Изучают активность АЛТ и АСТ в сыворотке крови, а также В тканях печени и сердца.

14 СХЕМА ПРИНЦИПА МЕТОДА: СХЕМА ПРИНЦИПА МЕТОДА: АЛТ АЛТ Α-аланин + ά-кетоглутаровая кислота ПВК+2,4ДНФГ гидразон ПВК + NaOH коричневое окрашивание. Α-аланин + ά-кетоглутаровая кислота ПВК+2,4ДНФГ гидразон ПВК + NaOH коричневое окрашивание. АСТ АСТ Аспарагиновая аминокислота + ά-кетоглутаровая кислота ПВК+2,4ДНФГ гидразон ПВК + NaOH коричневое окрашивание Аспарагиновая аминокислота + ά-кетоглутаровая кислота ПВК+2,4ДНФГ гидразон ПВК + NaOH коричневое окрашивание АЛТ и АСТ –ферменты ; аланин, аспарагиновая кислота, кетоглутаровая кислота-субстрат ; 2,4ДНФГ-ингибитор ; гидразон ПВК -продукт реакции. АЛТ и АСТ –ферменты ; аланин, аспарагиновая кислота, кетоглутаровая кислота-субстрат ; 2,4ДНФГ-ингибитор ; гидразон ПВК -продукт реакции. При определении активности АСТ и АЛТ пользуются тем, что образующийся продукт реакции пировиноградная кислота (ПВК) при добавлении 2,4 динитрофенилгидрозина (2,4ДНФГ) образует окрашенный гидразон ПВК в щелочной среде. Интенсивность окраски прямо пропорционально количеству образовавшейся ПВК, а значит и активности фермента. При определении активности АСТ и АЛТ пользуются тем, что образующийся продукт реакции пировиноградная кислота (ПВК) при добавлении 2,4 динитрофенилгидрозина (2,4ДНФГ) образует окрашенный гидразон ПВК в щелочной среде. Интенсивность окраски прямо пропорционально количеству образовавшейся ПВК, а значит и активности фермента.

15

16 1этап-подготовительный 1этап-подготовительный 2этап-ферментативная реакция 2этап-ферментативная реакция 3этап-остановка ферментативной реакции 3этап-остановка ферментативной реакции 4этап-обнаружение продукта реакции 4этап-обнаружение продукта реакции 5этап-измерение оптической плотности раствора 5этап-измерение оптической плотности раствора 6этап-расчет по калибровочной кривой 6этап-расчет по калибровочной кривой 7этап-интерпретация результатов 7этап-интерпретация результатов

17 Приготовление 0,4 н NaOH. Содержимое флакона NaOH (4,0моль/л) развести в 10 раз.

18 Вопросы Вопросы Вопросы Ситуационные задачи Ситуационные задачи Ситуационные задачи Ситуационные задачи Тесты Тесты Тесты

19 ВОПРОСЫ. ВОПРОСЫ. 1.К какому классу ферментов относятся аминотрансферазы. 1.К какому классу ферментов относятся аминотрансферазы. 2.Какую реакцию катализируют АСТ и АЛТ. 2.Какую реакцию катализируют АСТ и АЛТ. 3.Какую роль выполняют в организме человека аминотрансферазы. 3.Какую роль выполняют в организме человека аминотрансферазы. 4.Какие патологические состояния можно диагностировать при повышении активности АЛТ, АСТ. 4.Какие патологические состояния можно диагностировать при повышении активности АЛТ, АСТ. 5.Составте схему анализа. 5.Составте схему анализа. 6.Какую роль при проведении анализа выполняют физ р-р; 2,4ДНФГ; 0,4 н NaOH. 6.Какую роль при проведении анализа выполняют физ р-р; 2,4ДНФГ; 0,4 н NaOH. 7.Перечислите этапы анализа, их суть. 7.Перечислите этапы анализа, их суть. 8.Укажите нормальные показатели активности АЛТ и АСТ. 8.Укажите нормальные показатели активности АЛТ и АСТ. 9.Укажите название метода определения активности аминотрасфераз. 9.Укажите название метода определения активности аминотрасфераз. 10.В чем состоит принцип метода. 10.В чем состоит принцип метода. 11.Как определить активность фермента. 11.Как определить активность фермента. 12.Как построить калибровочную кривую. 12.Как построить калибровочную кривую. 13.КДЗ исследований. 13.КДЗ исследований.

20 ЗАДАЧИ. ЗАДАЧИ. 1.При проведении анализа активность АЛТ и АСТ увеличилась более чем 10 раз. Какое патологическое состояние можно предположить. 1.При проведении анализа активность АЛТ и АСТ увеличилась более чем 10 раз. Какое патологическое состояние можно предположить. 2. При проведении анализа активность АСТ увеличилась более чем 5 раз, а активность АЛТ изменилась незначительно. Какое патологическое состояние можно предположить. 2. При проведении анализа активность АСТ увеличилась более чем 5 раз, а активность АЛТ изменилась незначительно. Какое патологическое состояние можно предположить. 3.При определении коэффициента Де Ритиса, значение больше, чем 1,33. Что это означает. 3.При определении коэффициента Де Ритиса, значение больше, чем 1,33. Что это означает. 4..При определении коэффициента Де Ритиса, значение меньше, чем 1,33. Что это означает. 4..При определении коэффициента Де Ритиса, значение меньше, чем 1,33. Что это означает. 5.Больной обратился в ЛПУ с жалобами на сильные боли в области сердца с иррадиацией в левую лопатку, руку, шею. Какой анализ необходимо провести. 5.Больной обратился в ЛПУ с жалобами на сильные боли в области сердца с иррадиацией в левую лопатку, руку, шею. Какой анализ необходимо провести. 6..Больной обратился в ЛПУ с жалобами на общую слабость, недомогание, похудание, потерю аппетита, тошнота, боль в правом подреберье. Какой анализ необходимо провести. 6..Больной обратился в ЛПУ с жалобами на общую слабость, недомогание, похудание, потерю аппетита, тошнота, боль в правом подреберье. Какой анализ необходимо провести. 7.При проведении анализа кровь больного попала на халат. Ваши действия. 7.При проведении анализа кровь больного попала на халат. Ваши действия. 8.При проведении анализа кровь больного попала на стол. Ваши действия. 8.При проведении анализа кровь больного попала на стол. Ваши действия.

21 К какому классу ферментов относятся АЛТ и АСТ? К какому классу ферментов относятся АЛТ и АСТ? Изомеразы Изомеразы Трансферазы Трансферазы Гидролазы Гидролазы Лиазы Лиазы Концентрация какого вещества изменяется в процессе исследования активности АСТ и АЛТ? Концентрация какого вещества изменяется в процессе исследования активности АСТ и АЛТ? Фермента Фермента Продукта реакции Продукта реакции Субстрата реакции Субстрата реакции Ингибитора реакции Ингибитора реакции Какова роль 2,4 – ДНФГ при определении активности аминотрансфераз? Какова роль 2,4 – ДНФГ при определении активности аминотрансфераз? Это цветной реактив Это цветной реактив Активатор реакции Активатор реакции Ингибитор фермента Ингибитор фермента Субстрат Субстрат Какой фермент катализирует следующие превращения - &-аланин + &- кетоглутаровая кислота->ПВК? Какой фермент катализирует следующие превращения - &-аланин + &- кетоглутаровая кислота->ПВК? ЛДГ ЛДГ &-амилаза &-амилаза АЛТ АЛТ АСТ АСТ Какие из перечисленных ферментов относятся к классу гидролаз? Какие из перечисленных ферментов относятся к классу гидролаз? ЛДГ ЛДГ АЛТ АЛТ &-амилаза &-амилаза АСТ АСТ Какая активность АСТ соответствует норме? Какая активность АСТ соответствует норме? 0,01 мкмоль/л час/ПВК 0,01 мкмоль/л час/ПВК 0,19 мкмоль/л час/ПВК 0,19 мкмоль/л час/ПВК 0,92 мкмоль/л час/ПВК 0,92 мкмоль/л час/ПВК 1,2 мкмоль/л час/ПВК 1,2 мкмоль/л час/ПВК Наибольшая активность АЛТ обнаруживается в клетках? Наибольшая активность АЛТ обнаруживается в клетках? Печени Печени Миокарда Миокарда Скелетных мышц Скелетных мышц Поджелудочной железы Поджелудочной железы Какая активность АЛТ соответствует норме? Какая активность АЛТ соответствует норме? 0,06 мкмоль/л ПВК 0,06 мкмоль/л ПВК 0,18 мкмоль/л ПВК 0,18 мкмоль/л ПВК 1,86 мкмоль/л ПВК 1,86 мкмоль/л ПВК 0,86 мкмоль/л ПВК 0,86 мкмоль/л ПВК Какое заболевание можно предположить, если активность АСТ в сыворотке крови больного составляет 1,0 мкмоль/л, а активность АЛТ – 5,6 мкмоль/л? Какое заболевание можно предположить, если активность АСТ в сыворотке крови больного составляет 1,0 мкмоль/л, а активность АЛТ – 5,6 мкмоль/л? ОИМ ОИМ Стенокардия Стенокардия Инфекционный гепатит Инфекционный гепатит Цирроз печени Цирроз печени О каком заболевании сведетельствует активность АСТ – 2,4 мкмоль/л час ПВК и активность АЛТ – 0,9 мкмоль/л час ПВК? О каком заболевании сведетельствует активность АСТ – 2,4 мкмоль/л час ПВК и активность АЛТ – 0,9 мкмоль/л час ПВК? Стенокардия Стенокардия ОИМ ОИМ Болезнь Боткина Болезнь Боткина Механическая желтуха Механическая желтуха