Иммуноферментные бесприборные тест-системы для определения антител/антигенов к ВИЧ и для подтверждения скрининговых исследований 1© ЗАО «Биоград», 2011. - презентация

1 Иммуноферментные бесприборные тест-системы для определения антител/антигенов к ВИЧ и для подтверждения скрининговых исследований 1© ЗАО «Биоград», 2011 г. Дробченко А.Е ЗАО «Биоград», Санкт-Петербург,

2 СП «Профилактика ВИЧ-инфекции» Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика ВИЧ-инфекции» СП утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 1 от , вступили в силу г. Раздел IV посвящен лабораторной диагностике. © ЗАО «Биоград», 2011г.

3 Алгоритм тестирования (СП ) «Стандартным методом лабораторной диагностики ВИЧ- инфекции служит определение антител/антигенов к ВИЧ с помощью ИФА. » « Для подтверждения результатов в отношении ВИЧ применяются подтверждающие тесты (иммунный, линейный блот).» © ЗАО «Биоград», 2011г.

4 Алгоритм тестирования (СП ) « На первом этапе (скрининговая лаборатория). Если получен положительный результат в ИФА, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка запрашивается только в случае невозможности направления для дальнейшего исследования первой сыворотки). Если получены два положительных результата из трех постановок в ИФА сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию (Лаборатория диагностики ВИЧ- инфекции центра по профилактике и борьбе со СПИД) для дальнейшего исследования.» © ЗАО «Биоград», 2011г.

5 Алгоритм тестирования (СП ) « На втором этапе (референс-лаборатория). Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов, выбранной для подтверждения. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе другого производителя, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. » … © ЗАО «Биоград», 2011г.

6 Алгоритм тестирования (СП ) « На втором этапе (референс-лаборатория). … При получении положительного результата (во второй и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные.» © ЗАО «Биоград», 2011г.

7 Области применения простых / быстрых тестов: (СП ) транспслантология - перед забором донорского материала; донорство - обследование крови, в случае экстренного переливания препаратов крови и отсутствия обследованной на антитела к ВИЧ донорской крови; вертикальная профилактика - тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде (для назначения медикаментозной профилактики ВИЧ-инфекции в родах); постконтактная профилактика ВИЧ - тестирование на ВИЧ в случае аварийной ситуации. © ЗАО «Биоград», 2011г.

8 Простые / быстрые тесты: (СП ) « Каждое исследование на ВИЧ с применением простых/быстрых тестов должно сопровождаться обязательным параллельным исследованием той же порции крови классическими методами ИФА, ИБ Выдача заключения о наличии или отсутствии ВИЧ- инфекции только по результатам простого/быстрого теста не допускается. Результаты простых/быстрых тестов используются только для своевременного принятия решений в экстренных ситуациях. » © ЗАО «Биоград», 2011г.

9 Бесприборные тесты Бесприборные тесты, применяемые для определения антител к ВИЧ: 1. Иммунохроматографические Минимальное время реакции Принцип анализа, отличный от классического ИФА Визуальное считывание, нестабильные результаты 2. Иммуноферментные Принцип анализа, Чувствительность и специфичность, соответствующие классическому ИФА Стабильность результата в течение лет © ЗАО «Биоград», 2011г.

10 Иммуноферментные бесприборные тест-системы Особенности Иммуноферментных бесприборных тест- систем ИммуноКомб: Чувствительность и специфичность, соответствующая классическому ИФА Внутренний контроль в каждом тесте (верхняя точка) Положительный и отрицательный контроли поставляются в составе набора Отдельные точки для разных маркеров – информативность результата выше © ЗАО «Биоград», 2011г.

11 11 Типовой состав набора ИммуноКомб

12 © ЗАО «Биоград», 2011г.12 Схема постановки анализа 6. Результат анализа в виде окрашенных точек. Верхняя точка: внутренний контроль. Нижняя точка и (или) средняя точки появляются в случае наличия антител или антигенов. 1. Для индивидуального тестирования гребень можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. 2. В ряд А проявочной ванны вносятся образцы (сыворотка, плазма или цельная кровь) и контроли. 3. Гребень вставляется в ряд А и инкубируется (реакция антиген-антитело). 4. Гребень перемещается из ряда в ряд проявочной ванны в соответствии с инструкцией (промывки и связывание с конъюгатом). 5. Цветная реакция в ряду F.

13 Иммуноферментные бесприборные тест-системы ИммуноКомб II HIV 1&2 Bispot – скрининговый, 36 мин Полноценный ИФА за 36 минут ИммуноКомб II HIV 1&2 TriSpot Ag-Ab – АГ-АТ, 84 мин ИФА четвертого поколения Дифференцированный результат по антителам и антигену p24 ИммуноКомб II HIV 1&2 CombFirm – подтверждающий (иммуноблот), 66 мин Рекомбинантный иммуноблот (подтверждающий тест) Определяет антитела к 5 различным антигенам ВИЧ (Для каждого анализа используется 2 зубца) © ЗАО «Биоград», 2011г.

14 14 Результаты испытаний тест-систем на сероконверсионной панели HIV 9017, Bioclinical Partners, США ИФА(ELISA) планшетные тест-системы (Данные производителя панели) Отчет о сравнительных испытаниях диагностических иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ, разрешенных к применению в РФ, МЗ РФ , таблица 24 образца Дата забора образца Abbott AxSYM Anti- HIV1/2 Organon Vironostika HIV Uni-Form II Ag/Ab Roche Enzymum -Test HIV Combi Abbott Architect HIV Ag/Ab Combo Serodia HIV-1/2, ИХА ИммуноКомб II ВИЧ 1+2 БиСпот, ИФА Genie II HIV-1/HIV-2, ИХА Детермин ВИЧ ½, ИХА Ретрочек ВИЧ ИХА ,310,470,230, ,310,500,230, ,390,480, ,400,520,250, ,680,570, ,930,690,570, ,01 0,62 1,401, ,43 0,80 1,961, ,231,083,172, ,511,453, ,121,704,435,

15 © ЗАО «Биоград», 2011г.15 Результаты испытаний тестов Иммуноферментные тесты Иммунокомб II HIV 1&2 Bispot выявили антитела к ВИЧ на дней раньше, чем экспресс-тесты, основанные на принципе иммунохроматографии.

16 © ЗАО «Биоград», 2011г.16 Испытания ВОЗ БПТ для выявления HBs Ag

17 © ЗАО «Биоград», 2011г.17 Испытания ВОЗ БПТ для выявления HBs Ag на сероконверсионной панели ПанельОбнаружение HBs Ag, дней с момента забора первого образца ИммуноКомб ИФА Экспресс тесты (иммунохроматографи- ческие и агглютинационные) ELISA референс-тесты PHM 901 (BBI) PHM 902 (BBI) и более71-73 PHM 903 (BBI)1417 и более14 PHM 907 (BBI) PHM 910 (BBI) и более35-42

18 © ЗАО «Биоград», 2011г.18 Бесприборные тесты Агглютационные, мембранные и иммунохроматографические тесты, обеспечивающие короткое время получения результата (15мин), менее чувствительны и специфичны на образцах сероконверсионных панелей, чем Иммуноферментные бесприборные тест-системы ИммуноКомб, основанные на иммуноферментном твердофазном анализе.

19 Санитарно-эпидемиологические правила СП "Профилактика ВИЧ-инфекции" устанавливают следующее требование к быстрым простым тестам: « Каждое исследование на ВИЧ с применением простых/быстрых тестов должно сопровождаться обязательным параллельным исследованием той же порции крови классическими методами ИФА, ИБ.» Иммуноферментные тесты ИммуноКомб позволяют поставить полноценный ИФА, поэтому повтор не требуется. © ЗАО «Биоград», 2011г.

20 Алгоритм тестирования (СП ) « На втором этапе (референс-лаборатория). Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов, выбранной для подтверждения. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе другого производителя, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. » … © ЗАО «Биоград», 2011г.

21 Подтверждение скрининговых исследований ИммуноКомб II HIV 1&2 CombFirm – подтверждающий (иммуноблот), 66 мин Рекомбинантный иммуноблот (подтверждающий тест) Определяет антитела к 5 различным антигенам ВИЧ (Для каждого анализа используется 2 зубца) © ЗАО «Биоград», 2011г.

22 22 ИммуноКомб II ВИЧ 1+2 КомбФирм ImmunoComb ® II HIV 1&2 CombFirm gp36 gp41 gp120 p31 p24 Внутренний контроль Наименование Определяемые антитела: к Env ВИЧ 1 к Gag ВИЧ 1 к Pol ВИЧ 1 к Env ВИЧ 2 ImmunoComb ® II HIV 1&2 CombFirm рекомбинантный иммуноблот gp120, gp 41 p24p31gp36 Время анализа – 1 час Не требует разведения реагентов (реагенты готовы к применению)

23 Наименование Определяемые антитела:Оборудование / подготовка растворов Конъюгат Время анализа к Env ВИЧ 1 к Gag ВИЧ 1 к Pol ВИЧ 1 к Env ВИЧ 2 ImmunoComb ® II HIV 1&2 CombFirm рекомбинантный gp120, gp41 p24p31gp36не требует / не требует (все растворы готовы к применению) Конъюгат с щелочной фосфатазой 1 час Биосервис, "Блот- ВИЧ 1/2 +0" рекомбинантный gp160, gp41 p24/ p17 p51gp110/ gp38 вакуумный насос и шейкер / приготовление растворов Конъюгат с пероксидазой хрена часов Эколаб "ИФА Лайн- Блот ВИЧ-1,2" рекомбинантный gp160, gp41 p24p51gp36вакуумный насос и шейкер / приготовление растворов Конъюгат с пероксидазой хрена часов Bio-Rad NEW LAV BLOT I лизатный спектр gp160, gp120 gp41 спектр p24, p40, p55, p17 спектр p31, p51, p66 -вакуумный насос и шейкер / восстановление из концентрата Конъюгат с щелочной фосфатазой 3 часа © ЗАО «Биоград», 2011г.

24 Критерии положительного результата Критерии положительного результата (Western Blot): СП «Профилактика ВИЧ-инфекции» антитела к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ (env, gag, pol). ВОЗ (рекомедованы в письме Минздравсоцразвития N 4174-РХ от г.) два env (gp41, gp160, gp120) CDCлюбые два из: p24, gp41, gp 160/120 Американский Красный Крестпо одной полосе из env, gag и pol CRSS Консорциум по стандартизации ретровирусной серологии gag или pol И env (p24 или p31) И (gp41 или gp120/160) © ЗАО «Биоград», 2011г.

25 25 Тест ИммуноКомб КомбФирм разрешен для подтверждения наличия антител к ВИЧ (приказ МЗ РФ 292 от ). Результаты мультицентровых испытаний (Израиль, Франция, Бельгия, Бразилия, Сенегал) * - включая 15 положительных по ВИЧ-1 группы О Без учета неопределенных: чувствительность 100%, специфичность 100%

26 © ЗАО «Биоград», 2011г.26 Технология ИммуноКомб позволяет диагностировать широкий спектр инфекций: ВИЧ, HTLV, Гепатиты А, В, С, Цитомегалию, Токсоплазмоз, Хламидиоз, Краснуху, Хеликобактериоз, тропические инфекции.

27 © ЗАО «Биоград», 2011г.27 Тесты ИммуноКомб сертифицированы СЕ и широко используются более чем в ста странах мира. Как достоверные, высокочувствительные и специфичные тесты ИммуноКомб отобраны для программ ВОЗ, UNAIDS, Красного Креста, допущены FDA (США) для поставок по специальным программам фонда Клинтона.

28 28© ЗАО «Биоград», 2011г. ЗАО «Биоград» 18 лет в России. Адрес:197101, г. Санкт-Петербург, Петровский пр., д. 14, 19-Н тел./факс:(812) , (многоканальные) Спасибо за внимание.