Альфа-Амилаза α-Амилаза - фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление крахмала и гликогена до декстринов и мальтозы с образованием, конечных продуктов, - презентация

1

2 Альфа-Амилаза α-Амилаза - фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление крахмала и гликогена до декстринов и мальтозы с образованием, конечных продуктов, не дающих цветной реакции с йодом.

3 Амилаза, расщепляя крахмал и другие углеводы, обеспечивает переваривание углеводов пищи. Из организма амилазу выводят почки вместе с мочой. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. Амилаза секретируется в кровь из этих органов. Плазма крови человека содержит α-амилазы 2-х типов: панкреатическую (Р-тип), вырабатываемую поджелудочной железой и слюнную ( S – тип), продуцируемую слюнными железами. Амилолитической активностью обладают клетки печени, кишечника, почек легких. В физиологических условиях амилаза сыворотки крови состоит на 40% из панкреатической и на 60% из слюнной амилазы. Амилаза, расщепляя крахмал и другие углеводы, обеспечивает переваривание углеводов пищи. Из организма амилазу выводят почки вместе с мочой. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. Амилаза секретируется в кровь из этих органов. Плазма крови человека содержит α-амилазы 2-х типов: панкреатическую (Р-тип), вырабатываемую поджелудочной железой и слюнную ( S – тип), продуцируемую слюнными железами. Амилолитической активностью обладают клетки печени, кишечника, почек легких. В физиологических условиях амилаза сыворотки крови состоит на 40% из панкреатической и на 60% из слюнной амилазы.

4 С диагностической точки зрения наиболее информативным является определение панкреатической амилазы, на активность, которой в крови приходится до 30%, а в моче- до 70% от общей амилолитической активности. С диагностической точки зрения наиболее информативным является определение панкреатической амилазы, на активность, которой в крови приходится до 30%, а в моче- до 70% от общей амилолитической активности. α-Амилаза и ее активность зависит от возраста. Отмечается низкая активность амилазы в слюнной железе у 14 недельного плода, с возрастом она увеличивается, по достижении 5 –ти летнего возраста достигает величин, характерных для взрослых. α-Амилаза и ее активность зависит от возраста. Отмечается низкая активность амилазы в слюнной железе у 14 недельного плода, с возрастом она увеличивается, по достижении 5 –ти летнего возраста достигает величин, характерных для взрослых. Панкреатическая амилаза в сыворотке детей до 3-х месяцев не обнаруживается, появляется позднее и достигает величины, характерной для взрослых к годам. Панкреатическая амилаза в сыворотке детей до 3-х месяцев не обнаруживается, появляется позднее и достигает величины, характерной для взрослых к годам. У людей разного пола существенных различий в активности амилаз не выявлено. Амилолитическая активность сыворотки крови днем выше, чем ночью во время сна. Выделение амилазы днем в 1,5 раза выше чем ночью. Отличается содержание амилазы в сыворотке крови и выделение с мочой в течение дня, поэтому определять её активность лучше в суточной моче. Амилолитическая активность сыворотки крови днем выше, чем ночью во время сна. Выделение амилазы днем в 1,5 раза выше чем ночью. Отличается содержание амилазы в сыворотке крови и выделение с мочой в течение дня, поэтому определять её активность лучше в суточной моче.

5 В клинической лабораторной практике распространены две группы методов исследования активности альфа- амилазы в биологических жидкостях: В клинической лабораторной практике распространены две группы методов исследования активности альфа- амилазы в биологических жидкостях: 1.Сахарифицирующие, основанные на определении образующихся из крахмала сахаров по редуцирующему действию глюкозы и мальтозы. 1.Сахарифицирующие, основанные на определении образующихся из крахмала сахаров по редуцирующему действию глюкозы и мальтозы. 2. Амилокластические, основанные на определении остатка нерасщепленного крахмала по его реакции с йодом. Молекулы декстринов, имеющие 30 гексозных остатков, дают с йодом синюю окраску, молекулы, имеющие 8-10 остатков - красную, молекулы, состоящие из 4-5 остатков, окраски не дают. 2. Амилокластические, основанные на определении остатка нерасщепленного крахмала по его реакции с йодом. Молекулы декстринов, имеющие 30 гексозных остатков, дают с йодом синюю окраску, молекулы, имеющие 8-10 остатков - красную, молекулы, состоящие из 4-5 остатков, окраски не дают. Определение активности амилазы в сыворотке крови и мочи в КДЛ, проводится с целью дифференциальной диагностики острого и хронического панкреатита. Определение активности амилазы в сыворотке крови и мочи в КДЛ, проводится с целью дифференциальной диагностики острого и хронического панкреатита.

6 Увеличение активности амилазы более чем в 10 раз: Увеличение активности амилазы более чем в 10 раз: При остром панкреатите активность амилазы в крови и моче увеличивается в раз. При этом гиперамилазурия наступает позже, чем гиперамилаземия, но держится дольше, необходимо повторное исследование активности амилазы мочи на протяжении первых 1-3-х суток заболевания. При остром панкреатите активность амилазы в крови и моче увеличивается в раз. При этом гиперамилазурия наступает позже, чем гиперамилаземия, но держится дольше, необходимо повторное исследование активности амилазы мочи на протяжении первых 1-3-х суток заболевания.панкреатите Увеличение активности амилазы в 5-10 раз: Увеличение активности амилазы в 5-10 раз: При перитоните, остром аппендиците, непроходимости кишечника и другие состояния »острого живота», острая почечная недостаточность с олигурией. При перитоните, остром аппендиците, непроходимости кишечника и другие состояния »острого живота», острая почечная недостаточность с олигурией. Увеличение активности менее чем в 5 раз: Увеличение активности менее чем в 5 раз: При хроническом панкреатите и раке поджелудочной железы активность амилазы в моче и крови может остаться в норме или подняться незначительно. Поражение слюнных желез,(камни, эпидемический паротит) При хроническом панкреатите и раке поджелудочной железы активность амилазы в моче и крови может остаться в норме или подняться незначительно. Поражение слюнных желез,(камни, эпидемический паротит)

7 Снижение активности амилазы в крови: Снижение активности амилазы в крови: 1. При остром и хроническом гепатите, инфаркте миокарда, некрозе поджелудочной железы, тиреотоксикозе, при токсикозе у беременных, сахарном диабете, обширных ожогах (гипоамилаземия, гипоамилазурия). 2. При нарушении фильтрующей способности почек активность в крови возрастает, в моче снижается, иногда отсутствует. 3. Гиперамилаземию вызывают некоторые лекарственные препараты: кортикостероиды, салицилаты, тетрациклин, фуросемид, гистамин, алкоголь.

8 Уровень активности амилазы в норме. -в сыворотке МЕ/Л или 8-32 ЕД -в сыворотке МЕ/Л или 8-32 ЕД -в моче МЕ/Л или16-64 ЕД -в моче МЕ/Л или16-64 ЕД

9

10 Амилаза- _фермент расщепляющий крахмал до мальтозы и далее до глюкозы. Амилаза- _фермент расщепляющий крахмал до мальтозы и далее до глюкозы. ПРИНЦИП МЕТОДА : ищут пробирку с неполным расщеплением крахмала при наименьшем разведении мочи. ПРИНЦИП МЕТОДА : ищут пробирку с неполным расщеплением крахмала при наименьшем разведении мочи.

11

12 1 этап : подготовительный - разведение мочи 1 этап : подготовительный - разведение мочи 2 этап: ферментативный гидролиз крахмала, 2 этап: ферментативный гидролиз крахмала, 3 этап: остановка ферментативной реакции путем добавления ингибитора (Н2О) 3 этап: остановка ферментативной реакции путем добавления ингибитора (Н2О) 4 этап: обнаружение крахмала, 4 этап: обнаружение крахмала, 5 этап: расчет результатов (визуально) 5 этап: расчет результатов (визуально) 6 этап: интерпретация результатов. 6 этап: интерпретация результатов.

13 Приготовление крахмала. Приготовить 100г 1% раствора крахмала. Приготовить 100г 1% раствора крахмала. 1. Рассчитать кол-во крахмала и растворителя 1. Рассчитать кол-во крахмала и растворителя % % Х- 1% Х= 100 * 1 = 1г Х- 1% Х= 100 * 1 = 1г г = 99мл г = 99мл 2. Взвесить сухой крахмал на техно - химических весах и пересыпать в стакан емкостью 50мл 2. Взвесить сухой крахмал на техно - химических весах и пересыпать в стакан емкостью 50мл 3. Цилиндром отмерить 99мл дист Н 2О, перелить в термостойкий стакан 3. Цилиндром отмерить 99мл дист Н 2О, перелить в термостойкий стакан 4. Часть дист Н2О 20 – 30мл налить в стакан с крахмалом (суспензия крахмала) 4. Часть дист Н2О 20 – 30мл налить в стакан с крахмалом (суспензия крахмала) 5. Поставить термостойкий стакан с водой на водяную баню. 5. Поставить термостойкий стакан с водой на водяную баню. 6. Постепенно влить суспензию крахмала в кипящую в термостойком стакане воду, помешивать, чтобы крахмал не осел, довести до кипения 6. Постепенно влить суспензию крахмала в кипящую в термостойком стакане воду, помешивать, чтобы крахмал не осел, довести до кипения 7. Промаркировать 7. Промаркировать Хранить в емкости из темного стекла (крахмал на свету разлагается) Срок хранения 5-7 дней в холодильнике. Готовность крахмала определяют р-ром Люголя.

14 Приготовление 0,9% NaCl Приготовление 0,9% NaCl 1 Рассчитать кол-во NaCl и растворителя 1 Рассчитать кол-во NaCl и растворителя 500 – 100% Х – 0,9 % Х = 500 * 0,9 = 4,5гр V(Н О) = 500 – 4,5 = 495,5 мл 2 Приготовление : 2 Приготовление : 1) навеску NaCl 4,5гр взвешиваем на техно – химических весах 1) навеску NaCl 4,5гр взвешиваем на техно – химических весах 2) пересыпаем в колбу емкостью на 500мл или больше 2) пересыпаем в колбу емкостью на 500мл или больше 3) отмерим цилиндром 495мл и пипеткой доб – им 0,5мл Н О 3) отмерим цилиндром 495мл и пипеткой доб – им 0,5мл Н О 4) 1/3 часть дист.воды добавим в колбу и опять перемешиваем 4) 1/3 часть дист.воды добавим в колбу и опять перемешиваем 5) добавляем оставшуюся Н О в колбу и опять перемешиваем 5) добавляем оставшуюся Н О в колбу и опять перемешиваем 6) приготовленный р – р переливаем в бутыль с крышечкой и маркируем (0,9% NaCl - физ. р - р) 6) приготовленный р – р переливаем в бутыль с крышечкой и маркируем (0,9% NaCl - физ. р - р)

15 Приготовление р-ра Люголя В 100мл воды растворяют 20г йодистого калия и 10г йода. Для реакции с крахмалом полученный раствор разводят в 5 раз дист. водой.

16 Вопросы Вопросы Вопросы Ситуационные задачи Ситуационные задачи Ситуационные задачи Ситуационные задачи Тесты Тесты Тесты

17 ВОПРОСЫ ВОПРОСЫ 1.К какому классу ферментов относится альфа-амилаза. 1.К какому классу ферментов относится альфа-амилаза. 2.Какую роль в организме выполняет альфа-амилаза. 2.Какую роль в организме выполняет альфа-амилаза. 3.Где синтезируется фермент альфа-амилаза. 3.Где синтезируется фермент альфа-амилаза. 4.Как называется метод определения активности альфа–амилазы мочи. 4.Как называется метод определения активности альфа–амилазы мочи. 5.В чем заключается принцип метода. 5.В чем заключается принцип метода. 6.Какие заболевания позволяет отдиферренцировать определение активности альфа-амилазы. 6.Какие заболевания позволяет отдиферренцировать определение активности альфа-амилазы. 7.Какие растворы используются при определении активности альфа-амилазы мочи. 7.Какие растворы используются при определении активности альфа-амилазы мочи. 8.Какую роль в анализе выполняют 0.9% р-р NaCl, 0,1% р-р крахмала, р-р Люголя 8.Какую роль в анализе выполняют 0.9% р-р NaCl, 0,1% р-р крахмала, р-р Люголя 9.Как рассчитать результат анализа. 9.Как рассчитать результат анализа. 10.Как интерпретировать результат анализа. 10.Как интерпретировать результат анализа. 11.Чему равны нормальные показатели активности альфа-амилазы. 11.Чему равны нормальные показатели активности альфа-амилазы. 12.Как изменятся результаты анализа при остром панкреатите, при хроническом панкреатите, при синдроме острый живот. 12.Как изменятся результаты анализа при остром панкреатите, при хроническом панкреатите, при синдроме острый живот. 13.Как провести подготовительный этап анализа. 13.Как провести подготовительный этап анализа. 14.Из каких этапов состоит анализ. 14.Из каких этапов состоит анализ. 15.Какие свойства ферментов используются в анализе. 15.Какие свойства ферментов используются в анализе. 16.Как приготовить 0.1 % р-р крахмала, 0,9 % р-р NaCl, р-р Люголя. 16.Как приготовить 0.1 % р-р крахмала, 0,9 % р-р NaCl, р-р Люголя.

18 СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ. СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ. 1. Приготовить 0,1% р-р крахмала из 1% р-ра крахмала для проведения анализа 6-ти больным. 1. Приготовить 0,1% р-р крахмала из 1% р-ра крахмала для проведения анализа 6-ти больным. 2. Первый синий цвет появился в 6-ой пробирке. Какой результат анализа. Ответ обоснуйте 2. Первый синий цвет появился в 6-ой пробирке. Какой результат анализа. Ответ обоснуйте 3. Первый синий цвет появился в 9-ой пробирке. Какой результат анализа. Ответ обоснуйте 3. Первый синий цвет появился в 9-ой пробирке. Какой результат анализа. Ответ обоснуйте 4. Первый синий цвет появился в 4-ой пробирке. Какой результат анализа Ответ обоснуйте 4. Первый синий цвет появился в 4-ой пробирке. Какой результат анализа Ответ обоснуйте 5. Все пробирки оказались прозрачными. Какой результат анализа. Ответ обоснуйте. 5. Все пробирки оказались прозрачными. Какой результат анализа. Ответ обоснуйте. 6. При проведении анализа активность альфа-амилазы оказалась выше нормы в 10 раз. Какое патологическое состояние можно предположить. 6. При проведении анализа активность альфа-амилазы оказалась выше нормы в 10 раз. Какое патологическое состояние можно предположить. 7. При проведении анализа активность альфа-амилазы оказалась выше нормы в 5 раз. Какое патологическое состояние можно предположить. 7. При проведении анализа активность альфа-амилазы оказалась выше нормы в 5 раз. Какое патологическое состояние можно предположить. 8. При проведении анализа мочи на определение активности альфа- амилазы лаборант обнаружил, что термостат показывает температуру 30 град. Лаборант решил провести анализ до конца. Дать оценку действиям лаборанта. 8. При проведении анализа мочи на определение активности альфа- амилазы лаборант обнаружил, что термостат показывает температуру 30 град. Лаборант решил провести анализ до конца. Дать оценку действиям лаборанта. 9. При проведении анализа активность альфа-амилазы оказалась ниже нормы. Какое патологическое состояние можно предположить. 9. При проведении анализа активность альфа-амилазы оказалась ниже нормы. Какое патологическое состояние можно предположить. 10. При проведении анализа активность альфа-амилазы в крови оказалась выше нормы в 5 раз, а в моче нормальные показатели. Какое патологическое состояние можно предположить. 10. При проведении анализа активность альфа-амилазы в крови оказалась выше нормы в 5 раз, а в моче нормальные показатели. Какое патологическое состояние можно предположить.

19 Как изменяется активность L- амилазы мочи и крови при синдроме «острый живот»? Как изменяется активность L- амилазы мочи и крови при синдроме «острый живот»? a) Остается в норме b) В крови резко увеличивается, в моче резко снижается c) Увеличивается в раз d) Увеличивается в 3-5 раз Концентрация какого вещества изменяется в процессе исследования активности L- амилазы? Концентрация какого вещества изменяется в процессе исследования активности L- амилазы? a) Продукта реакции b) фермента c) Активатора реакции d) Субстрата реакции Которая активность L- амилазы мочи соответствует норме? Которая активность L- амилазы мочи соответствует норме? a) 2 ед. b) 32 ед. c) 122 ед. d) 512 ед. Какое вещество я вляется конечным продуктом гидролиза крахвала L- амилазой ? Какое вещество я вляется конечным продуктом гидролиза крахвала L- амилазой ? a) Глюкоза b) Мальтоза c) Декстрины d) Лактоза Для диагностики острого панкреатита на 3-5 день заболевания целесообразно определить активность L- амилазы в: Для диагностики острого панкреатита на 3-5 день заболевания целесообразно определить активность L- амилазы в: a) Крови b) Моче c) Слюне d) Кале Для дифференциальной диагностики острого и хронического панкреатита определяют активность: Для дифференциальной диагностики острого и хронического панкреатита определяют активность: a) Аспартатаминотрансферазы b) Аланинаминотрансферазы c) Лактатдегидрогеназы d) L- аминотрансферазы Для диагностики острого панкреатита в 1 день заболевания целесообразно определить активность L- амилазы в: Для диагностики острого панкреатита в 1 день заболевания целесообразно определить активность L- амилазы в: a) Крови b) Желудочном содержимом c) Слюне d) Кале Как изменяется активность L- амилазы мочи и крови при остром панкреатите? Как изменяется активность L- амилазы мочи и крови при остром панкреатите? a) Увеличивается в раз b) Остается в норме c) Увеличивается слегка d) Снижается Как изменяется активность L- амилазы мочи и крови при хроническом панкреатите? Как изменяется активность L- амилазы мочи и крови при хроническом панкреатите? a) Чаще остается в норме b) Увеличится в 3-5 раз c) Увеличивается в раз d) Снижается Как производится расчет активности L- амилазы мочи по Вольгемуту? Как производится расчет активности L- амилазы мочи по Вольгемуту? a) Визуально b) По формуле c) По калибровочной кривой d) По таблице