Строение иммуноглобулина: 1-Fab-участок,2-Fc-участок, 3-тяжелая цепь, 4- легкая цепь, 5- антиген-связывающийся участок, 6-шарнир. - презентация

1

2

3

4 Строение иммуноглобулина: 1-Fab-участок,2-Fc-участок, 3-тяжелая цепь, 4- легкая цепь, 5- антиген-связывающийся участок, 6-шарнир.

5 Иммунологическая фазаИммунологическая фаза Патохимическая стадияПатохимическая стадия Патофизиологическая фазаПатофизиологическая фаза

6

7

8

9 Первичная профилактика сенсибилизации пациентов Первичная профилактика сенсибилизации пациентов Базовая терапия. Базовая терапия. Коррекция иммунологических нарушений Коррекция иммунологических нарушений

10

11

12 Плазмаферез (ПФ). Гемо- и плазмосорбция Селективная Полуселективная Неселективная

13 Замена плазмы пациента пациента донорской.

14

15 1.забор крови пациента. 2.перистальтический насос 3.массобменник4.ловушка

16 IgE матрица сорбент

17 Сорбент В лаборатории прикладной биохимии ИБОХ НАН Беларуси был разработан биоспецифический сорбент, получивший название «Антиглобулин-Е». Он позволяет существенно снизить уровень IgE в плазме крови больных, выраженность клинических симптомов, а в ряде случаев – и выйти на стойкую клиническую ремиссию. Однако терапевтический эффект данного метода до конца не изучен, т.к. неизвестна судьба IgE, связанного с клетками эффеторами

18 Цель Обоснование механизма действия сорбента in vitro и in vivo.

19 Лабораторные животные: –Белые лабораторные крысы, Vistar, самцы масса 250г Материалы: –Среда для культивирования клеток RPMI1640 Sigma USA –Плазма человека после плазмафереза. –Планшеты культуральные. –Набор для определения общего IgE ИФА (La Hema)

20 Методы: –Получение тучных клеток Лабораторное животное умерщвляем путем ингаляции углекислого газа. В брюшную полость вводим 10 мл ЗФР. Проводим вскрытие животных и забор житкости из брюшной полости Клетки отмывали, подсчитывали и довили концентрацию до 2млн/мл

21 Методы: –Культивирование клеток. Клетки ресуспензируем в инактивированной плазме 1ч 37С 3-е кратно отмываем ЗФР и ресуспензируем в среде Культивируем в течении 3-х дней

22 Методы: –Оценка экспрессии комплексов FceRI-IgE на мембране тучных клеток Постановка иммуноцитохимического метода o Мазки, фиксация метанол-ацетоном. o Нейтрализация 1% перекись в ЗФР 30 мин o Отмывка o Коньюгат антиIgE-пероксидаза 1 час o Отмывка o Субстрат до окрашивания (раствор ДАБа) 15 мин o Подсчет % окрашенных клеток.

23 Методы: –Оценка экспрессии комплексов FceRI-IgE на мембране тучных клеток Определение содержания IgE на клетках методом ИФА o Фиксация клеток параформальдегидом 1%. o Концентрацию клеток доводили до /мл o Внесение материала в лунки 96-луночного планшета o Проведение ИФА o Чтение результатов на ИФА-ридере o Расчет концентрации IgE.

24 Снижение связанного IgE с клетками.

25 Показатель (n=20) Исходный После сорбции Общий белок, г/л 78,3 3,1 77,2 3,2 Альбумин, г/л 40,1 3,0 39,0 3,2 Глобулины, г/л 34,2 3,1 33,2 3,2

26 Показатель(n=20)ИсходныйПосле сорбции IgA (г/л) 1,9 0,51,8 0,6 IgM (г/л) 2,3 0,32,2 0,4 IgG (г/л)21,6 4,121,3 4,2

27

28 Иммуносорбция является высокоэффективным методом лечения аллергии и перспективным направлением в медицинской практике. Терапевтический эффект метода основан на изменении экспрессии рецепторов к IgE Разработанный в РБ метод селективной анти IgE сорбции с использованием триптофана в качестве лиганда эффективен в лечении аллергических заболеваний, при которых доказана патогенетическая роль IgE.