Химерные мыши материал предоставлен сотрудниками лаборатории генетики развития Института общей генетики РАН Мартыновой М.Ю. и Исаевым Д.А. - презентация

1 Химерные мыши материал предоставлен сотрудниками лаборатории генетики развития Института общей генетики РАН Мартыновой М.Ю. и Исаевым Д.А.

2 Методика создания химер выделяют яйцеклетки из доноров с различающимися генотипами; культивируют эмбрионы на стандартных питательных средах (основа-солевой буфер, ПВК и лактат, глюкоза, альбумин) до стадии 8 бластомеров; агрегируют морулы (8-кл.) (агрегационный метод) и культивируют in vitro до стадии бластоцисты; имплантируют химерный эмбрион в матку самки-рецепиента

3 Создание аллофенных мышей 2 линии мышей, отличающихся по окраске и характеру волосяного покрова HRS/J – линия, мыши которой несут рецессивный ген hairless (hr ) – обусловливающий полное отсутствие волосяного покрова линия С57BL/6 – черная окраска шерсти

4 Для гомозигот линии характерно нарушение формирования волосяного покрова. До 10 дневного возраста развивается нормальный покров, который начинает выпадать, в результате трехнедельные мыши полностью его теряют. Для гомозигот линии HRS/J характерно нарушение формирования волосяного покрова. До 10 дневного возраста развивается нормальный покров, который начинает выпадать, в результате трехнедельные мыши полностью его теряют. На рисунке слева направо показан характер волосяного покрова у 12,15 17 и 21-дневных мышат

5 Гомозигота hr/hr в 4-х недельном возрасте. У человека обнаружен ортолог этого гена (некоторые палестинские племена), он также приводит к отсутствию волосяного покрова и узелковую атрихию (эффекты этого гена у человека начинают проявляться в 7-летнем возрасте), ортологи этого гена найдены и у др. млекопитающих (крысы, обезьяны).

6 При половом скрещивании нормальных и мутантных линий образуется потомство с нормальной шерстью. При получении химер возможны различные варианты распределения волосяного покрова и его окраса: 8-дневные химеры19-дневные химеры Распределение волосяного покрова зависит от % мутантного компонента у химеры

7 2-месячные химерные мыши. У крайней правой мыши 51% мутантного компонента и наблюдаются четкие чередующиеся полосы с шерстью и без, эти данные указывают, что ген действует в эпидермальных клетках волосяного фолликула. Клоны эпидермальных клеток кожи зародышей в эмбриогенезе мигрируют в латерально-вентральном направлении когерентно, не перемешиваясь друг с другом. В случае, если ген действует в мезодерме, распределение мутантных и нормальных клеток в шерстном покрове будет мозаичным.