П ИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ РАСТЕНИЙ. - презентация

1 П ИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ РАСТЕНИЙ

2 П РИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ IN VITRO Компоненты питательной среды для выращивания растительных клеток и тканей можно разделить на 6 основных групп, что обычно отражает порядок приготовления концентрированных маточных растворов: макроэлементы, микроэлементы, источник железа, витамины, источник углерода, регуляторы роста

3 Основой всех питательных сред для культивирования растительных эксплантов является смесь минеральных солей. Это соединения азота в виде нитратов, нитритов, солей аммония; фосфора – в виде фосфатов; серы – в виде сульфатов; а также растворимые соли К+, Na+, Са 2+, Мg 2+. Железо используется в виде хелатов (например, FeSO4·7H2O + этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) или её натриевая соль Na ЭДТА (трилон Б)) – наиболее доступной форме для усвоения растительными тканями.

4 В зависимости от консистенции существует деление на жидкие и твердые питательные среды.

5 Для приготовления твердых питательные сред используют агар-агар (0,7-1 %), который представляет собой полисахарид, получаемый из морских водорослей. Обычная его концентрация г на литр среды. Агар обеспечивает диффузию питательных элементов из среды в культивируемые ткани. Вместо агара можно использовать биогели.

6 Необходимо учитывать, что клетки растений и отдельные компоненты среды (витамины, фитогормоны, агар) чувствительны к определенным концентрациям водородных ионов. Например, агар в кислой среде теряет способность образовывать гель. В зависимости от объектов культивирования рН среды может варьировать от 5,2 до 6,6.

7 П РИМЕРЫ СОСТАВОВ НАИБОЛЕЕ УПОТРЕБЛЯЕМЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК ТКАНЕЙ

8

9 С РЕДА М УРАСИГЕ -С КУГА Среда Мурасиге-Скуга ( МСО или MS0 (МС- ноль) ) это питательная среда, используемая в лабораториях для выращивания растительной культуры клеток или цельных растений. Эта среда была придумана физиологами растений Тошио Мурасиге и Фольке К Скугом в 1962 году, во время поисков Мурасиге нового фитогормона. Число после букв МС обозначает концентрацию сахарозы в среде. Например, MS0 не содержит сахарозы, а MS20 содержит сахарозу в концентрации 20 г/л. Вместе с её модификациями это наиболее часто используемая в лабораторной практике среда для экспериментов на культуре растительных клеток.

10 В свою бытность докторантом Скуга, Мурасиге изначально пытался найти ещё не открытый гормон роста, присутствующий в соке растений табака. Такое вещество так и не было обнаружено; вместо этого, анализ табачной выжимки и пепла сожжённого табака выявил повышенные концентрации определенных минеральных веществ в растительных тканях. Серия экспериментов показала, что варьируя уровни этих питательных веществ можно добиться существенно ускорения роста по сравнению с существовавшими составами. Было установлено, что самое сильное влияние на скорость роста культуры тканей табака оказывал азот.

11 Ингредиенты

12 О СНОВНЫЕ СОЛИ (макроэлементы) Нитрат аммония (NH 4 NO 3 ) 1650 мг/л Нитрат аммония Хлорид кальция (CaCl 2 · 2H2O) 440 мг/л Хлорид кальция Сульфат магния (MgSO 4 · 7H2O) 370 мг/л Сульфат магния Гидрофосфат калия (КH 2 РО 4 ) 170 мг/л Гидрофосфат калия Нитрат калия (КNО 3 ) 1900 мг/л Нитрат калия

13 М ИНОРНЫЕ СОЛИ (микроэлементы) [править | править код]править код Борная кислота (Н 3 ВО 3 ) 6,2 мг/л Борная кислота Хлорид кобальта (CoCl 2 · 6Н 2 О) 0,025 мг/л Хлорид кобальта Сульфат меди(II) (CuSO 4 · 5Н 2 О) 0,025 мг/л Сульфат меди(II) Сульфат железа(II) (FeSO 4 · 7Н 2 О) 27,8 мг/л Сульфат железа(II) Сульфат марганца(II) (MnSO 4 · 4Н 2 О) 22,3 мг/л Сульфат марганца(II) Йодид калия (КІ) 0.83 мг/л Йодид калия Молибдат натрия (Na 2 МoО 4 · 2Н 2 О) 0,25 мг/л Молибдат натрия Сульфат цинка (ZnSO 4 ·7H 2 О) 8,6 мг/л Сульфат цинка Натрий железная соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (NaFe-ЭДТА) в концентрации 5 мл/л для стокового раствора, содержащего 5,57 г FeSO 4 · 7H 2 O и 7,45 г Na 2 - ЭДТА на литр воды. Натрий железная соль этилендиаминтетрауксусной кислоты Na 2 - ЭДТА

14 В ИТАМИНЫ И ОРГАНИЧЕСКИЕ вещества Мио-Инозитол 100 мг/л Мио-Инозитол Никотиновая кислота 0,5 мг/л Никотиновая кислота Пиридоксин · HCL 0,5 мг/л ПиридоксинHCL Тиамин · HCL 0,1 мг/л ТиаминHCL Глицин 2 мг/л Глицин Гидролизат лактальбумина (опционально) 1 г/л Гетероауксин 1-30 мг/л Гетероауксин Кинетин (цитокин) 0,04-10 мг/л Кинетин (цитокин)

15 С ОСТАВ СРЕДЫ М УРАСИГЕ -С КУГА

16