Выполнила: Накенова Камила Научный руководитель: Лаврентий Е.В. - презентация

1 Выполнила: Накенова Камила Научный руководитель: Лаврентий Е.В

2 Если будет создан препарат для профилактики бактериального вагиноза, то это снизит количество заболевающих женщин в Казахстане.

3 В последние годы проблема вагинальных инфекций привлекает все более пристальное внимание исследователей. Это связанно с явной тенденцией к росту этих заболеваний как среди женщин детородного возраста, так и у детей. На сегодняшний день актуальным является применения для лечения и профилактики бактериального вагиноза биологических препаратов разработанных на основе лактобактерий.

4 разработка пробиотического препарата на основе лактобактерий обладающего высокой биологической активностью для профилактики бактериального вагиноза. Задачи проекта: 1. Изучение морфолого-культуральных и физиолого-биохимических свойств лактобактерий, выделенных от здоровых людей. 2. Изучение пробиотического потенциала выделенных лактобактерий. 3. Получение биопрепарата на основе культур обладающих высоким пробиотическим потенциалом.

5 1 Аналитический обзор литературы 2 Материалы и методы 2.1 Идентификация микроорганизмов по их способности ферментировать различные углеводы. 2.2 Изучение морфолого-культуральных свойств. 2.3 Изучение антагонистических свойств 2.4 Изучение адгезии лактобацилл 2.5 Кислотообразующая активность

6 2.6 Изучение антибиотикочувствительности 2.7 Выделение ДНК 2. 8 Методы длительного хранения микроорганизмов Генотипирование лактобактерий по 16S rRNA Для определения нуклеотидной последовательности была проведена ПЦР с использованием праймеров: 8F – AGAGTTTGATCCTGGCTCAG и 806R – GGACTACCAGGGTATCTAAT. Смесь для ПЦР Условия амплификации Праймер прямой 8F (10 pmol)1 нкл 95 С - 3 мин Праймер обратный 806R (10 pmol) 1 нкл 95 С - 20 с 30 повторов Буфер x103 нкл 59 С - 20 с дНТФ (0,2 mM)3 нкл 72 С – 40 с MgCl 2,5mM3 нкл 72 С – 6 мин Вода До 30 нкл Хранение 10 С Taq Polymerase1,5 ед.активности Матрица 5 нкл

7 3.1 Создание рабочей коллекции лактобактерий Наиме но вание Форма Разм ер Поверхно сть Профи ль Блеск и прозрачность Цве т L.20 округлая 1 мм гладкая выпуклый блестящая белый L.30 округлая 1 мм гладкая выпуклый блестящая белый L.31 округлая 1 мм гладкая выпуклый блестящая белый L.180 округлая 1 мм гладкая выпуклый блестящая белый

8 Углеводы L.180 L.30 L.31 L.20 Сахароза (Su) Целлобиоза(Ce) Арабиноза (Ar) Раффиноза(Rf) Рамноза (Rh) Салицин (Sa) Фруктоза (Fc) Галактоза (Ga) Глюкоза (De) Лактоза (La) Мелибиоза (Mb) Трегалоза(Te) Мальтоза (Ma) Манноза (Mo) Ксилоза (Xy) Маннит (Mn)

9 М L.20 L.30 L.31 L.180 К+ К-

10 Антагонистическая активность лактобацилл к P.mirabilis

11 Антагонистическая активность лактобацилл к S.aureus

12 Антагонистическая активность лактобацилл к E.coli Межвидовая антагонистическая активность лактобацилл Наименовани е L.rhamnosusL.paracaseiL.reuteriL.rhamnosus L.casei22 мм 19 мм 0 мм L.fermentum0 мм L.acidofillus0 мм L.rhamnosus-0 мм L.paracasei0 мм- L.reuteri0 мм - L.rhamnosus0 мм -

13

14

15 Антибиотики/штаммы L.rhamnosus 1 L.rhamnosus 2 L.reuteriL.paracasei ампициллин (А)22 мл 35 мл 15 мл 23 мл тетрациклин (Т)31 мл 40 мл 32 мл 30 мл эритромицин (Е)33 мл 45 мл 37 мл 30 мл офлоксацин (Of)24 мл 28 мл 18 мл 24 мл метронидазол (Mt)0 мл амоксициллин (Am)15 мл 26 мл 15 мл гентамицин (G)19 мл 13 мл имипинем (I)32 мл 19 мл 23 мл 25 мл линкомицин (L)30 мл 32 мл 30 мл цефазолин (Cz)0 мл 12 мл 0 мл ципрофлоксацин (Cf)31 мл 35 мл 30 мл 33 мл

16 В результате скрининга по пробиотическому потенциалу была отобрана 1 культура L.reuteri, которая не обладала антагонистической активностью к другим видам лактобацилл, обладала высокой антагонистической активностью к условно- патогенным микроорганизмам, населяющих микробиоценоз влагалища при бактериальном вагинозе, низкой адгезирующей способностью и умеренной кислотообразующей активностью. В результате осуществления проекта на основе биологически активного штамма лактобацилл получен пробиотический препарат для профилактики и лечения бактериального вагиноза. Препарат представляет собой лиофильно высушенную культуру лактобактерий.