Метод исследования кормов на анаэробы. Метод исследования кормов на анаэробы ГОСТ , Правила бакисследования кормов, утв. ГУВ МСХ СССР - презентация

1 Метод исследования кормов на анаэробы

2 Метод исследования кормов на анаэробы ГОСТ , Правила бак исследования кормов, утв. ГУВ МСХ СССР г. Метод основан на способности анаэробов расти в отсутствии кислорода воздуха, характерной морфологии, культуральных свойствах и на выявлении патогенности культур путем заражения лабораторных животных

3 Метод определения анаэробов Посев производится в две пробирки со средой Китт-Тароцци и в среду Вильсон- Блера по 1 мл из разведения 1:10. Для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов одну из пробирок после посева прогревают при 80 ° С 20 минут. Из анаэробных микроорганизмов в кормах предусматривается обнаружение Cl. perfringens, Cl. вotulinum. и их токсинов. Среду Китт-Тароцци перед посевом регенерируют – прогревают на кипящей водяной бане 30 минут и охлаждают под струей холодной воды до 45°С.

4 Результаты посевов регистрируют в первый день Почернение среды Вильсон- Блера в течение 1-3 часов Быстрое начало роста на среде Китт- Тароцци (через 4-5 часов)

5 Подтверждение принадлежности выделенных анаэробных микроорганизмов к роду Clostridium Из выросших культур готовят препараты и окрашивают их по Граму и одним из методов для выявления бактериальных спор. Анаэробы (сульфитредуцирующие клостридии) представляют собой грамположительные палочки, расположенные в одиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений. Споры овальные или сферические, суп терминальные или терминальные.

6 Выделение чистой культуры Делают посев на 2-3 чашки с кровяным агаром по Цейслеру, выдерживают их в анаэробных условиях при температуре 37С в течение часов, после чего просматривают рост в чашках и отбирают культуры, которые классифицируют по морфологическим и биохимическим свойствам.

7 Биохимические свойства анаэробов Название МолокоЖелатин Мозговая среда Свернутая сыворотка Cl.septicum Медленное свертывание (2-5 дн), запах кислый. Разжижение через 3-5 дн. Нет почернения. Не разжижается. Инволюционные формы и споры. Cl.oedematiens Медленное свертывание (4-10 дн). Разжижение через 3-5 дн. Нет почернения. Не разжижается. Инволюционные формы и споры. Cl.hystoliticum Свертывается через 1 сутки. Разжижается быстро. Почернение через 3-6 дн. Разжижается медленно. Cl.perfringens Бурное свертывание (4-6 ч). Газообразование бурное, сыворотка прозрачная. Разжижение на 3-5 дн. Нет почернения. Не разжижается. Инволюционные формы и споры. Cl.botulinum Пептонизируется.Разжижается.Чернеет медленно и слабо. Разжижается.

8 Биологические исследования проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинноййго заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через часов

9 Идентификация отдельных возбудителей Для идентификации отдельных возбудителей одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0,2-0,5 мл соответствующей типоспецифической сыворотки выдерживают в термостате 45 минут и вводят мышам внутрибрюшиннойй. Для контроля испытуемую культуру или фильтрат вводят мышам без сыворотки. Вид и тип микроорганизма определяют по выживаемости мышей, получивших соответствующую сыворотку.

10 Исследование кормов на ботулотоксин При исследовании кормов на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа: а) Нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой (антитоксином). Корм предварительно растирают в ступке со стерильным физраствором (1:4) и настаивают в течение 1-2 часов при комнатной температуре. Настой центрифугируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К 0,5 мл фильтрата добавляют 0,2 мл поливалентной противоботулиновой сыворотки. Смесь выдерживают 1 час при комнатной температуре, затем одному животному вводят подкожно 0,5 мл фильтрата, другому – смесь фильтрата с сывороткой в той же дозе.

11 Исследование кормов на ботулотоксин б) Разрушение токсина кипячением фильтрата. Фильтрат готовят как в пункте (а). Одну половину фильтрата кипятят в течение 30 минут. Затем одному животному внутрибрюшиннойй вводят 0,5-1,0 мл некипяченого фильтрата, другому – в этой же дозе прокипяченного. Положительным результатом биопробы по первому и второму способам, считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата необработанного противоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата не подвергнутого кипячению.