Референтная лаборатория по АЧС Тема: «И Референтная лаборатория по АЧС Тема: «Исследование факторов патогенности возбудителя АЧС, циркулирующего на территории Российской Федерации, усовершенствование методов диагностики АЧС» в 2013 году Научный руководитель Д.б.н. проф. Груздев К.Н. тел./факс: 8(4922) ;

История лаборатории Референтная лаборатория по африканской чуме свиней была создана 1 августа 2012 г. В настоящее время лаборатория является структурным подразделением ФГБУ «ВНИИЗЖ», входит в состав лаборатории диагностики болезней сельскохозяйственных животных. 2

Штатный состав лаборатории Заведующий лабораторией, к.б.н. А.С. Иголкин Главный научный сотрудник, д.б.н. Н.Н. Власова Ведущий научный сотрудник, к.в.н. А.А. Шевцов Старший научный сотрудник, к.в.н. О.С. Пузанкова Научный сотрудник, к.б.н. В.Л. Гаврилова Младшие Научные сотрудники, С.Г. Ремыга и А.С. Першин Ведущий ветеринарный врач, А.А. Варенцова Ведущие биологи, И.В. Шевченко и И.Ю. Жуков Техники-лаборанты, В.М. Зайнутдинова, Н.И. Камаева, Т.В.Клочкова Всего: 13 человек 3

Задачи лаборатории Научно-исследовательская работа; Анализ рисков и оценка развития ситуации по АЧС на территории РФ и стран ТС ; Научное обоснование планов мониторинга АЧС утверждаемых Россельхознадзором; Выполнение государственных заданий по мониторингу и диагностике АЧС; Подготовка нормативной и методической документации по АЧС в соответствии с международными стандартами; Проведение сличительных лабораторных испытаний; Участие в международных научных проектах; Образовательная деятельность. 4

Научно-исследовательская работа После утверждения Россельхознадзором г. темы НИР «Исследование факторов патогенности возбудителя африканской чумы свиней (АЧС), циркулирующего на территории Российской Федерации, усовершенствование методов диагностики АЧС» осуществляемая в рамках основного мероприятия «Предупреждение распространения и ликвидации африканской чумы свиней на территории РФ» Государственной программы «Развитие сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на годы» работа велась в соответствии с календарным планом по 6 этапам. 5

В настоящее время сотрудники лаборатории ведут работу по теме: «Исследование факторов патогенности возбудителя африканской чумы свиней (АЧС), циркулирующего на территории Российской Федерации, усовершенствование методов диагностики АЧС» в рамках Государственной программы «Развитие сельского хозяйства и регулирования рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия на годы». 6 Задачи лаборатории

Этап 1Анализ существующих международных методов и подходов по проведению исследований для определения изменчивости вируса АЧС, установления критериев изменчивости вируса АЧС Этап 2Выделение не менее 5 изолятов вируса АЧС Этап 3Изучение культурально - биологических свойств выделенных изолятов вируса АЧС, в т.ч. вирулентности, контагиозности для домашних свиней Этап 4Изучение молекулярно-биологических свойств выделенных изолятов вируса АЧС Этап 5Оптимизация условий хранения изолятов с подбором стабилизирующих сред и режима лиофилизации Этап 6Разработка и совершенствование методов диагностики АЧС 7

Результаты вируса выделения ВАЧС на КК АМС Изолят ВАЧСПроисхождение Титр вируса (lg ГАдЕ/г ) 1ASFV RU S/12/1Дом свинья 1,5 2ASFV RU S/12/2Дом свинья< 1,0 3ASFV RU B/13Павший кабан 2,0 4ASFV RU B/13/1Кабан отстрелянный 5,0 5ASFV RU S/13/1Домашняя свинья 5,0 6ASFV RU S/13/2Домашняя свинья 4,5 7ASFV RU B/13/1Павший кабан 6,0 8ASFV RU B/13/2Павший кабан 5,0 9ASFV RU S/13/1Дом свинья 5,0 10ASFV RU S/13/2Дом свинья 5,0 11ASFV RU B/13/1Отстрелянный кабан 1 год 4,5 12ASFV RU B/13/2Отстрелянный кабан 3 года 4,0 8

Изучение репродукции вируса АЧС (Российские изоляты) в перевиваемых культурах клеток Изолят ВАЧС A4C2A4C2СПЭВППК Наличие ЦПД Гемадсо рбция Наличие ЦПД Гемадсорб ция Наличие ЦПД Гемадсор бция ASFV RU B/13 2 п+3 п+ - ASFV RU B/13/ 1 п+ +3 п- ASFV RU S/13 2 п+3 п+ - ASFV RU S/13 2 п+1 п+ - ASFV RU B/13 1 п+3 п+ - ASFV RU B/13 1 п+3 п+ - 9

Динамика изменений температуры тела поросят зараженных и/назально разными изолятами ВАЧС в дозе 5000 ГАдЕ 10

Динамика изменений температуры тела поросят зараженных и/назально разными изолятами ВАЧС в дозе 50 ГАдЕ 11

Динамика изменений температуры тела интактных поросят при их контактном содержании с животными, зараженными разными изолятами ВАЧС 12

Течение заболевания на свиньях 13

Схема расположения подобранных для создания клонотеки генов на полноразмерном геноме вируса АЧС 14

Сконструирована клонотека генов иммунозначимых белков вируса АЧС и проведен анализ нуклеотидных последовательностей 8 генов изолята Краснодар 06/12. Проведение про секвенирования ДНК вируса АЧС изолята ASFV RU B/13 и сравнительный анализ изменений показали, что в сравнении с последовательностью изолята Грузия 2007/1 в геноме изолята ASFV RU B/13 обнаружены 52 единичные встройки, 12 делеций и 8 замен, что от нуклеотидов составляет ~0,0327% изменений. 15

16 стрелками указаны места мутаций в генах ДНК изолята ASFV RU B/13. Dixon, L.K., Abrams C.C., Bowick G., Goatley L.C., Kay-Jackson P.C., Chapman D., Liverani E., Nix R., Silk R., Zhang F. (2004) African swine fever virus proteins involved in evading host defence systems. / Vet. Immunol Immunopathol. 100:

Дальнейшие исследования Для дальнейшего изучения основ патогенности и изменчивости вируса АЧС планируется: Выделение, сравнительное изучение биологических свойств изолятов вирусов АЧС, а также создания новых средств диагностики и специфической профилактики Формирование и пополнение коллекции штаммов вирусов АЧС Определение изменений генома у изолятов вируса АЧС, различающихся по биологическим свойствам Совершенствование методов раннего выявления антител к вирусу АЧС в сыворотке крови зараженных животных Разработка методов индикации вируса АЧС в кормах и почве Изучение возможности передачи вируса АЧС видами клещей представленными на территории Российской Федерации 17

Международное сотрудничество по АЧС Развитие сотрудничества с референтными лабораториями МЭБ и ФАО по АЧС, стажировки научных сотрудников; Совместные работы по изучению биологических свойств вируса АЧС, циркулирующего на территории РФ; Участие в программах по вопросам профилактики распространения трансграничных болезней свиней в приграничных районах России с сопредельными странами; Участие в международных симпозиумах и конференциях 18

Для продуктивной работы референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ» необходима научно-консультативная помощь: Секвенирование генома (от пробоподготовки до выполнения анализа и компьютерной обработки данных) Рекомбинантные белки и антитела Электронная микроскопия Серодиагностика – иммуноферментный анализ, иммуноблот, дот-блот, иммунофлуоресценция, гемадсорбция и др. Цитофлюориметрия Энтомология клещей переносчиков вируса АЧС 21

Заключение Изучение культурально-биологических свойств изолятов вируса АЧС, выделенных на территории Российской Федерации в 2013 году, позволило установить изменение патогенности в сторону снижения вирулентности и увеличения длительности заболевания. Проведенное пиросеквенирование генома изолята ASFV RU B/13 выявило наличие мутаций в 3 генах, ответственных за вирулентность вируса африканской чумы свиней.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ ! 22