Проблемы преаналитического этапа Практика и теория Проблемы преаналитического этапа Практика и теория Иркутский областной консультативно-диагностический центр Мирошниченко Иван Андреевич Научно-практический семинар «Преаналитический этап клинико-лабораторных исследований. Современные подходы» 29 октября 2014 года ГБУЗ «Иркутская государственная областная детская клиническая больница»

Подготовка пациента для взятия крови из вены Пациент должен быть информирован заранее о планируемом заборе биоматериала, о правилах подготовки к сдаче биоматериала Кровь собирается натощак. Некоторые тесты (напр. Холестерин, липидограмма) требуют более длительного воздержания от еды перед исследованием Уровень некоторых гормонов связан с суточными (кортизол) и иными ритмами секреции (половые гормоны), забор крови должен быть осуществлен с учетом данных ритмов На результаты оказывает влияние психоэмоциональная а также физическая нагрузка непосредственно перед взятием биоматериала (требуется минимум 30-минутный отдых) На результаты оказывает влияние курение в день забора биоматериала и прием алкоголя, в том числе накануне исследования. Забор крови осуществляют в спокойном психофизическом состоянии пациента

Внимание: пробы на бак посев берут первыми Порядок взятия крови Техника взятия венозной крови

Сразу после взятия крови аккуратно переверните пробирки 8-10 раз для обеспечения полного перемешивания реагента и крови. Однократный переворот: поверните наполненную пробирку крышкой вниз и верните в исходное положение. Техника взятия венозной крови

ВНИМАНИЕ: Не встряхивайте пробирки. Энергичное перемешивание может вызвать вспенивание или гемолиз. Недостаточное или медленное перемешивание пробирок для сыворотки может замедлить образование сгустка. В пробирках с антикоагулянтами неправильное перемешивание может привести к склеиванию тромбоцитов, образованию сгустка и / или недостоверным результатам анализа.

Гемостаз !Перевернуть 4 раза ! Подготовка образцов для исследования системы гемостаза требует особого внимания Время наложения жгута - не более 1 мин После набора крови пробирки аккуратно перемешиваются путем переворачивания на 180 С не более 4-5 раз. НЕ ВСТРЯХИВАТЬ ПРОБУ!!! Для развернутого коагулологического исследования, как правило, необходимо взятие крови в несколько пробирок В отдельные пробирки необходимо брать следующие пробы: ~ чувствительные к внешним условиям; ~ на исследование функциональной активности тромбоцитов; ~ требующие охлаждения; ~ предназначенные для хранения и транспортировки. Заполнение вакуумной пробирки точно до метки. Оптимальным вариантом является закрытая вакуумная система, позволяющая провести точное дозирование порции крови.

Обработка проб для исследования системы гемостаза !Перевернуть 4 раза ! Сразу после взятия крови – поместить ее в термоконтейнер или провести центрифугирование. Нельзя открывать пробирки до начала аналитической стадии исследования. Необходимо соблюдать правильный температурный режим хранения, транспортировки и обработки проб. Пробы крови для коагулологических исследований следует доставлять с использованием термоконтейнеров при постоянной температуре в пределах 22–24 °C. Время доставки пробы для исследования в лабораторию не должно превышать 45 мин.

Каждый тип проб в соответствующих пробирках имеет свой регламент обработки Сроки работы с биоматериалом

Особенности заполнения пробирок для отправки в ИДЦ Забор крови осуществляейте в типы пробирок, строго соответствующие заказанным исследованиям (смотрите направление!). Для биохимии, иммунохимии – вакутейнер с красной крышкой. Внимание! Одного полностью заполненного вакутейнера хватает для выполнения примерно 20 тестов. Пожалуйста, не набирайте лишних вакутейнеров! При одновременном заказе ПЦР и полного гематологического анализа забор крови производится в отдельные вакутейнеры (с сиреневой крышкой) – один для ПЦР, второй для полного гематологического анализа. Если необходимы дополнительные исследования в пробирке с сиреневой крышкой – наберите дополнительную пробирку

Техника центрифугирования ГЕЛЬ

Правила центрифугирования Пробирки с антикоагулянтами: центрифугировать и отобрать пробу настолько быстро, насколько это возможно Пробирки с сывороткой центрифугировать не ранее чем через 30 минут и не позже чем через 2 часа. Предпочтительное использование горизонтальных роторов При установке пробирок необходимо убедиться, что крышка не опирается на стенки стакана центрифуги Угловой ротор – лучше не использовать предпочтительно использовать центрифуги с горизонтальным ротором

ОЦСВремя Пробирки для коагулологии Богатая тромбоцитами плазма 150 g 5 мин. Бедная тромбоцитами плазма 1500 – 2000 g10 мин. Свободная от тромбоцитов плазма 2500 – 3000 g20 мин. Пробирки для сыворотки Пробирки для сыворотки с гелем Пробирки для сыворотки с гранулами 1800 g 10 мин. Пробирки для плазмы Пробирки с гепарином и гелем Пробирки с ЭДТА и гелем 2200 g 1800 – 2200 g 15 мин. 10 мин. ОЦС = x радиус* x (об/мин/1000)² *Радиус измеряется от центра вращения до дна пробирки при ее максимально удаленном расположении. Параметры центрифугирования

ОЦС = x радиус* x (об/мин/1000)² *Радиус измеряется от центра вращения до дна пробирки при ее максимально удаленном расположении. Параметры центрифугирования Корректное использование значений g – относительной центробежной силы (ОЦС). ОЦС (g) скорость (об/мин). температура не должна опускаться ниже 15С и подниматься выше 24С (Наиболее полное отделение сыворотки и плазмы происходит при температуре С). из рекомендуемого времени центрифугирования необходимо вычесть время разгона и торможения.

ОЦС = x радиус* x (об/мин/1000)² *Радиус измеряется от центра вращения до дна пробирки при ее максимально удаленном расположении. Параметры центрифугирования Всегда следуйте рекомендациям производителя центрифуги (руководство должно быть на рабочем месте) В случае возникновения вопросов по работе центрифуги – всегда связывайтесь с представителями фирмы производителя. Необходимо правильно рассчитанные параметры центрифугирования напечатать в виде краткой инструкции и сделать доступным для лаборантов и врачей

Техника центрифугирования Центрифугирование сыворотки сразу после взятия: виден сгусток фибрина.

Гемолиз – проблема несоблюдения Техники забора крови Интерференция. По Kroll и Elin – «влияние вещества, присутствующего в образце, которое изменяет истинное значение результата. Гемолиз – наличие свободного гемоглобина в плазме, сыворотке крови Причины: эндогенные, технологические. Видимый на глаз гемолиз >50 мг/дл (от 30 до 50) Минимальный гемолиз, оказывающий влияние на измеряемый показатель 10 мг/дл

Причины гемолиза Возможная причина Способ решения проблемы Слишком сильное сдавление вены (больше 1 мин) Точный контроль времени наложения жгута (не более 1 мин) Перенос крови в пробирку с помощью шприца Использовать специальные двусторонние иглы для вакуумных пробирок Использовать вакуум-шприцы Слишком интенсивное перемешивание образца Аккуратно перевернуть пробирку 6-8 раз, точное соблюдение правил Пробирка неадекватно заполнена Контролировать, чтобы пробирка была заполнена до черной метки ( + 10%). Не использовать пробирки, потерявшие вакуум

Маркировка образца Выполняется с целью корректной идентификации биологического материала Данные могут наноситься без штрих-кода (отсутствие ЛИС в лаборатории) Данные сопровождаются штрихкодированием (регистрация с помощью ЛИС)

Маркировка образца штрихкодированием Позволяет закодировать значительную часть информации: -Данные пациента -Дату регистрации биоматериала -Организацию, направившую биоматериал -Другая информация (тип биоматериала, заказанные тесты и пр.) Значимо уменьшает количество ошибок Значимо ускоряет скорость обработки (регистрации) биоматериала Важно соблюдение правил штрихкодирования!

Правила маркировки образцов (вакуумные пробирки) Правильно Не правильно

Порядок наклейки штрих-кодов для ИДЦ Образец 1 Образец 2Направление «Триплет» штрихкодов

Порядок наклейки штрих-кодов для ИДЦ Образец 1 Образец 2 Направление «Триплет» штрихкодов Образцы 3, 4 и т.д. Заполнить еще одно направление и оформить по общим правилам

Порядок наклейки штрих-кодов для ИДЦ Единственный образец Направление «Триплет» штрихкодов Выбросить!

Порядок наклейки штрих-кодов для ИДЦ Единственный образец Направление «Триплет» штрихкодов Оставшийся штрих-код нельзя наклеивать на другие бланки

Основные ошибки маркировки штрих кодированных образцов Не наклеенный штрих-код Наклеивание поврежденного штрихкода, либо повреждение его при наклеивании Штрих-код наклеен поперек пробирки Штрих-код наклеен на свободное от ярлыка пробирки место Не соблюдено соответствие наклеенного штрихкода на образец и направление Данные пациента нанесены на линии штрихкода

Основные ошибки маркировки штрих кодированных образцов

Основные ошибки маркировки штрих кодированных образцов

Правила заполнения направлений Бланк направления в ИДЦ необходимо взять в ИДЦ. Не используйте ксерокопированные бланки! Пожалуйста, ничего не прикрепляйте к бланкам направлений скрепки, стикеры и т.д. Бланки направлений нельзя мять, сгибать и сворачивать в трубочку. Дата и время забора крови сделаны в полном формате – в поле дата указывается число.месяц, а время - час.минуты.

Правила заполнения направлений При заказе исследований методом ПЦР необходимо указывать материал, который отправляется на исследование. Например, так:

Правила заполнения направлений Заполняется шариковой, капиллярной или гелевой ручкой ЧЕРНЫМИ или ТЕМНО-СИНИМИ чернилами ЗАГЛАВНЫМИ ПЕЧАТНЫМИ БУКВАМИ. Образец заполнения находится на лицевой стороне направления внизу страницы. Поля, обязательные для заполнения: ФИО Дата рождения (полностью!) Данные полиса ОМС (серия, номер, номер договора, наименование страховой медицинской организации). Для пациентов, имеющих полисы ОМС других регионов РФ (не Иркутской области), необходимо прикладывать к направлению копию полиса. Контактный телефон лечащего врача Поля, содержащие информацию о параметрах пациента и биоматериала (срок беременности, объем суточной мочи и пр.)

Правила заполнения направлений Заказ исследований – в клеточке напротив необходимого исследования поставить V или Х. Правильно Не правильно

Правила заполнения направлений Если вы ошиблись и поставили ненужную отметку... Просто зачеркнуть недостаточно! Компьютер не человек, он этого не поймет. Есть два варианта это исправить воспользоваться корректором и замазать белой краской неправильную отметку, либо полностью закрасить квадрат с меткой чернилами. После назначения всех исследований в поле «Общее количество отметок» указать общее число заказанных исследований.

Транспортировка биоматериала

Основные правила работы с термосумками Уложить хладоэлементы в морозильную камеру с температурой -20(+-4С) на часов Разложить хладоэлементы на плоскую поверхность для оттаивания на минут Готовность определить путем появления первых всплесков хладоагента при встряхивании Протереть хладоагенты сухой ветошью и уложить их по боковым стенкам контейнера Для обеспечения Т 0-8С (без заморозки)

Основные правила работы с термосумками Уложить хладоэлементы в морозильную камеру с температурой -30(+-4С) на часов Протереть хладоагенты сухой ветошью, поместить их в полиэтиленовые пакеты Уложить хладоагенты по боковым стенкам контейнера Для обеспечения Т ниже 0С (в замороженном виде)

Транспортировка биоматериала

Спасибо за внимание!