ИММУНОДИАГНОСТИКА РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РФ КОМИТЕТ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЧИТИНСКОЙ ОБЛАСТИ БОРЗИНСКОЕ МЕДИЦИНСКОЕ УЧИЛИЩЕ ОТДЕЛЕНИЕ «Лабораторная диагностика» Автор – преподаватель высшей категории Теменева Т.В.

Преципитацией называется выпадение в осадок антигена преципитиногена, находящегося в растворенном состоянии, при взаимодействии его со специфическими иммунными телами сыворотки - преципитинами Реакция преципитации сходна по механизму с реакцией агглютинации. Они различаются тем, что в реакции агглютинации участвует цельный антиген, а в реакции преципитации – антиген в растворенном состоянии

Виды реакции преципитации В зависимости от задач и условий известно несколько методов постановки реакции преципитации: Преципитация в геле (агаре) Кольцепреципитации (по Асколи) Иммунодиффузии Иммунофореза Иммуноэлектрофореза

Реакция кольцепреципитации

Принцип постановки реакции Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках - на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.

Для постановки реакции необходимы Исследуемый антиген (фильтрат бульонной культуры, экстракт микробных тел, экстракты пораженных органов, СМЖ, гной, мокрота, моча и др.) Преципитирующая сыворотка, полученная от животных, иммунизированных специальным преципитиногеном Физиологический раствор (Участвующие в реакции ингредиенты должны быть совершенно прозрачны. Для этого их центрифугируют или фильтруют) Преципитационные пробирки высотой 4-6 см и диаметром 0,4-0,5 см – реакция в них наступает значительно быстрее и проявляется более четко Микропипетки или пастеровские пипетки (для каждого ингредиента отдельная) Штативы, резиновые груши, химические пробирки Термостат, центрифуга

++- -

Чтение результатов При положительной реакции преципитации в течение 5-10 минут на границе соприкосновения двух жидкостей появляется хорошо видимое на темном фоне кольцо молочно-белого цвета, четко отграниченное сверху и снизу. В контрольных пробирках, за исключением пробирки 2 (специфическая Преципитирующая сыворотка и и заведомо соответствующий ей антиген) кольца помутнения не появится Контроли сыворотки Контроль АГ Опыт

Реакция преципитации в геле (агаре)

Принцип постановки реакции В основу метода положен принцип взаимодействия антигена со специ- фической сывороткой, диффундиру- ющих в толщу агара и образующих в нем зону преципитации Применяется для определения токсигенности дифтерийной палочки.

Для постановки реакции необходимо: Исследуемый антиген Музейная культура токсигенных дифтерийных бактерий Фильтровальная бумага, пропитанная специфической антитоксической противодифтерийной сывороткой Стерильные чашки Петри с агаром ОТДМ (определение токсигенности дифтерийных микроорганизмов) Бактериологические петли, спиртовка Термостат

Этапы постановки реакции На застывшую среду кладут стерильную полоску фильтровальной бумаги, пропитанную раствором антитоксической сыворотки (1,5 х 6 см) На расстоянии 0,8 см от края фильтровальной бумаги и друг от друга, наносят бляшки культуры музейного и исследуемого штамма диаметром 0,5 см Помещают чашку с посевом в термостат на 24 часа

Учет результатов При положительном результате у токсигенных культур между бляшками посевов и фильтровальной бумагой появляются тонкие штрихи образо-вавшегося преципитата. Стрелки преципитата двух рядом расположенных токсигенных штаммов сходятся между собой. Стрелки нетоксигенных штаммов не сходятся, а перекрещиваются

КОК

Другие виды реакции преципитации Реакция радиальной иммунодиффузии Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, ком-понентов системы комплемента и др.

Иммуноэлектрофорез Сочетание метода электрофореза и им- мунопреципитации: - смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации.

Применение реакции преципитации в практической медицине Реакцию преципитации используют в диагностике : Сибирской язвы, туляремии, оспы и т.д. При типизации и изучении антигенной структуры некоторых микроорганизмов В судебной медицине для определения принад- лежности крови, спермы В санитарной экспертизе продуктов