Диагностические и терапевтические подходы с использованием нового СС хемокина CLTAP Грачёв Алексей Николаевич

CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью Поддержание концентраций цитокинов Координирование обновления тканей Подавление нежелательных иммунных реакций Уничтожение трансформированных клеток Детекция патогена Стимуляция воспалительной реакции Уничтожение патогена Стимуляция системы приобретенного иммунитета Фагоцитоз апоптотических клеток и клеточного дебриса Стимуляция миграции и деления клеток Стимуляция ангиогенеза Подавление активности клеток иммунной системы Функции макрофагов в организме

Опухоль привлекает моноциты периферической крови. МАО развиваются под воздействием цитокинов, производимых опухолевыми клетками и гипоксии, характерной для опухоли. Взаимодействие опухолевых клеток с макрофагами является важным факторов развития опухоли ТФРбета это один из ключевых факторов влияющих на развитие МАО VEGF M-CSF Хемокины Возникновение макрофагов ассоциированных с опухолью (МАО) CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью

Макрофаги ассоциированные с опухолью (МАО) поддерживают рост опухоли секретируя ростовые факторы и цитокины TGF, EGF, CXCL8, CXCL12 МАО подавляют противоопухолевый иммунитет TGF IL-10 (Иммуносуппрессия) СCL17, CCL18, CCL22 (привлечение Т-клеток, не имеющих цитотоксической активности) МАО поддерживают ангиогенез VEGF МАО перестраивают внеклеточный матрикс: MMP, белки внеклеточного матрикса, трансглютаминазы МАО поддерживают миграцию опухолевых клеток: MMP, хемокины МАО - типичные макрофаги 2 типа CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью

CLTAP был обнаружен в макрофагах стимулированных ТФР бета CLTAP CC-chemokine Like TGFbeta Activated Protein Нет гомологов на уровне белка Нет гомологов на уровне мРНК Нет консервативных доменов IL-4Dex TGF IFN LPS CD163 Stab1 CD14 TLR4 TLR2 SI-CLP MMR FN1 IGH3 MMP2 MMP12 TTG AMAC-1 IL-1ra NO H 2 O 2 Fc R STAT1 MCP2 TNF IL-1 IL-12 IL-10 ID3 OLR1 HAMP LTA4H ALOX5AP CLTAP Фагоцитоз эндоцитоз Перестройка внеклеточного матрикса Продукция воспалительны х цитокинов Макрофаги 2-го типа (M2)Макрофаги 1-го типа (M1) Бактерицидная активность CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью

Экспрессия CLTAP в макрофагах активируется только ТФР бета

Структура CLTAP в сравнении со структурой CCL25 Сигнальный пептид или трансмембранный участок Экспрессия CCL25 в различных тканях CCL25 CLTAP Экспрессия CLTAP в различных тканях Структура белка и высокая тканеспецифичность указывает на возможную принадлежность CLTAP к семейству СС-хемокинов

Экспрессия мРНК CLTAP образцах почечноклеточной карциномы (GEO) Экспрессия CLTAP значительно снижена в образцах почечноклеточной карциномы

Моноклональные антитела к CLTAP Получены моноклональные антитела к CLTAP (Клон 7A5) Антитела пригодны для проточной цитометрии (левая панель) и иммунофлуоресценции (средняя панель) Вестерн блоттинга (правая панель) Внутриклеточная окраска CLTAP локализован в везикулярных структурах CHO - CHO+ A498 Caki-1 Caki-2

Экспрессия CLTAP в почках CLTAP экспрессируется в клетках эпителия проксимальных канальцев

Экспрессия мРНК CLTAP в почечноклеточной карциноме Во всех исследованных случаях обнаружена полная потеря экспрессии

Экспрессия мРНК CLTAP в опухолях шейки матки В отдельных случаях наблюдается повышение экспрессии CLTAP

Роль CLTAP в развитие опухолей Почечноклеточная карцинома CLTAP участвует в регуляции апоптоза эпителиальных клеток потеря экспрессии CLTAP ведет к устойчивости клеток к апоптозу Опухоли шейки матки Повышенная экспрессия CLTAP является маркером количества МАО

Перспективные диагностические стратегии 1. Стратегии Исследование экспрессии CLTAP в различных опухолях с целью выявления МАО с высоким иммуносуппрессорным потенциалом Ассоциация уровня экспрессии CLTAP с прогнозом заболевания 2. Методика Иммуногистохимический анализ экспрессии CLTAP в парафиновых срезах при помощи имеющихся антител. 3. Состояние проекта Отработана методика, получены первые данные на клиническом материале. Необходимо проведение широкомасштабных клинических исследований.

Перспективная терапевтическая стратегия 1. Стратегия Активация апоптоза в клетках почечноклеточной карциномы за счет экспрессии рекомбинантного CLTAP. 2. Методика Внесение экспрессионного конструкта при помощи аденовирусов или иммунных нанолипосом. 3. Состояние проекта Показано участие CLTAP в регуляции апоптоза в клетках почечноклеточной карциномы. Получены конструкты, содержащие кодирующую последовательность CLTAP. Необходима подготовка средства доставки (аденовируса или иммунных нанолипосом).

Спасибо за внимание!