Лекция 30 Методы исследования белкового обмена Перфильева Г.В. 2013г. ГБОУ ВПО КрасГМУ имени профессора В.Ф. Войно – Ясенецкого Минздравсоцразвития России Фармацевтический колледж.

План лекции: Методы исследования обмена белков Подготовка обследуемых Получение биологического материала Условия хранения биологического материала Примечания

Методы исследования белкового обмена: Электрофоретический – основан на разделении белков в постоянном электрическом поле в зависимости от величины белковой молекулы. Ультрацентрифугирование – основано на различной скорости седиментации отдельных белков в зависимости от их молекулярной массы. Хроматографические: - Ионнообменная хроматография основана на различной способности отдельных белков к обмену с ионами ионнообменных смол, - Хроматография на молекулярных ситах (гельфильтрация) – на сефадексах – белки разделяются в зависимости от величины молекулы, - Аффинная хроматография – белки делятся на индивидуальные в зависимости от сродства к аффинату (наполнителю колонок).

Высаливание – основано на удалении водной оболочки различными концентрациями солей щелочных и щелочно-земельных металлов и иона аммония. Это старый метод разделения белков. Использование цветных реакций – например биуретовая на общий белок, ксантопротеиновая на циклические аминокислоты,интенсивность окраски измеряют колориметрически. Иммунологические методы – используют для количественного определения индивидуальных белков. При взаимодействии со специфической антисывороткой образуется мутный раствор, интенсивность помутнения измеряют колориметрически.

Для характеристики обмена белков можно определять различные показатели: общий белок белковые фракции мочевину креатинин билирубин мочевую кислоту в цельной крови (капиллярной и венозной), сыворотке, плазме, моче, спиномозговой жидкости

Подготовка обследуемых: Забор крови делают утром с 8 до 10 часов утра. В экстренных случаях взятие крови осуществляется в любое время дня. Кровь берут натощак, после 8-12-часового голодания. Воздержание от приема алкогольных напитков не менее 24 часов. Исключается физическое напряжение и эмоциональное возбуждение, для чего дают обследуемому отдохнуть 15 минут.

Получение и хранение биологического материала: Желтушные, гемолизированные, хилезные сыворотка или плазма не пригодны для исследования. Для получения плазмы венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку с антикоагулянтом. Соли ЭДТА, гепарин, гепаринат лития, оксалат натрия, цитраты снижают результаты. Центрифугирование проводят в обычном режиме не позднее 3 часов от забора материала.

Для получения сыворотки крови венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку. Центрифугирование проводят в обычном режиме не позднее 3 часов от забора материала. Для исследования мочи используют утреннюю порцию. Исследование проводят не позднее, чем через 2 часа после взятия пробы.

Условия хранения биологического материала: Биологический материал хранят в хорошо закрытых контейнерах. Цельная кровь не пригодна для хранения, даже в присутствии консервантов. Плазму и сыворотку можно хранить 1 день при комнатной температуре, 7 дней при 4-8 С, от 3 до 6 месяцев при –20 С. В закрытых сосудах белок стабилен в моче 2 дня при комнатной температуре, до 17 дней в холодильнике (4-8 С).

Примечания: уровень общего белка может зависеть от возраста (у детей и пожилых ниже), пола (у мужчин выше), характера питания. Повышение белков в крови вызывают следующие факторы: длительное пребывание в вертикальном положении, стресс, прием алкоголя, некоторые лекарственные препараты (цефотаксим, фуросемид, фенобарбитал, преднизалон, прогестерон). Понижение уровня белков в крови вызывают: травма, курение, беременность, голодание, перерыв в приеме алкоголя, нарушение питания, ожирение, некоторые лекарственные препараты (декстран, ибупрофен, пероральные контрацептивы).

Домашнее задание Пустовалова Л.М. Основы биохимии для медицинских колледжей стр