Лекция 24 Методы исследования углеводного обмена Перфильева Г.В. 2013г. ГБОУ ВПО КрасГМУ имени профессора В.Ф. Войно – Ясенецкого Минздравсоцразвития России Фармацевтический колледж.

План лекции: Методы исследования углеводного обмена Подготовка обследуемых Получение биологического материала Условия хранения биологического материала Примечания

Методы исследования углеводного обмена: Редуктометрические методы: основаны на восстановитльных свойствах глюкозы, определяют глюкозу в моче с реактивом Гайнеса-Акимова. Колориметрические методы: основаны способности глюкозы образовывать окрашенные соединения. К ним относится ортотолуидиновый метод Ферментативные методы: определение глюкозы по реакциям со специфическими ферментами. Используют глюкозооксидный и гексокиназный методы. Экспрес-метод - использование диагностических тест- полосок для полуколичественного определения уровня глюкозы в крови и моче. Использование автоматических и полуавтоматических анализаторов: «Эксан», карманные глюкометры. Специальные исследования:ГТТ, кортизон (преднизалон) глюкозотолорантный тест КПТГ, инсулиновый тест

Основным показателем обмена углеводов в организме служит глюкоза. Её исследование проводят в цельной крови (капиллярной и венозной), сыворотке, плазме, моче. При заборе, хранении и транспортировке биологического материала нужно соблюдать ряд общих требований.

Подготовка обследуемых: Забор крови делают утром с 8 до 10 часов утра. В экстренных случаях взятие крови осуществляется в любое время дня. Кровь берут натощак, после 8-12-часового голодания. Воздержание от приема алкогольных напитков не менее 24 часов. Исключается физическое напряжение и эмоциональное возбуждение, для чего дают обследуемому отдохнуть 15 минут.

Получение и хранение биологического материала: Капиллярную кровь исследуют сразу же после забора материала. Для получения цельной крови или плазмы венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку с антикоагулянтом (соли ЭДТА, гепарин, гепаринат лития, натрия или аммония), стабилизатором гликолиза. В качестве ингибиторов гликолиза используют фторид натрия или калия. соотношение кровь : антикоагулянт : стабилизатор = 1 мл : 2 мг: 2,5 мг. Центрифугирование проводят в обычном режиме.

Для получения сыворотки крови венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку со стабилизатором гликолиза. Центрифугирование проводят в обычном режиме. Для исследования мочи используют утреннюю порцию. Исследование проводят не позднее, чем через 2 часа после взятия пробы. Для сбора мочи используют контейнеры из темного стекла, в которые предварительно добавляют ледяную уксусную кислоту, бензоат натрия или фторид натрия (ингибиторы гликолиза).

Условия хранения биологического материала: Биологический материал хранят в хорошо закрытых контейнерах. Капилярную кровь хранят 1 час. Исследования проводят в течение 10 минут от забора материала Для хранения цельной крови в ней удаляют белки. В таком виде глюкоза стабильна в течение 8 часов при комнатной температуре и 3 дня в холодильнике при 4-6 С.

Плазму и сыворотку отделяют от форменных элементов не позднее 30 минут после забора материала. Плазму и сыворотку можно хранить 12 часов в холодильнике при температуре 4-8 С. При использовании ингибиторов гликолиза хранить можно: 1 день при комнатной температуре, 7 дней при 4-8 С, 1 месяц при –20 С. Глюкоза в моче стабильна при комнатной температуре и 4-8 С в течение 2 часов, при –20 С в течение 2 дней.

Примечания: Концентрация глюкозы в венозной крови на 10 % меньше, чем в капиллярной. Концентрация глюкозы в сыворотке и плазме на 10-13% выше, чем в цельной крови. Цитрат натрия мешает определению глюкозы.

Повышение глюкозы в крови вызывают следующие факторы: курение, голодание, стресс, прием пищи, кофе, гипертермия, диета с низким содержанием жиров, ожирение, беременность, физические нагрузки, некоторые лекарственные препараты (кофеин, эстрогены, пероральные контрацептивы, диуретики). Понижение уровня глюкозы в крови вызывает прием алкоголя в больших дозах, длительное пребывание в положении лежа, тепловой стресс, лихорадка, очень тяжелые физические упражнения, сезонное снижение весной, некоторые лекарственные препараты (анаболические стероиды, ацетилсалициловая кислота, антигистаминные препараты).

Домашнее задание Пустовалова Л.М. Основы биохимии для медицинских колледжей стр