Лекция 8. Тема: Питательные среды. ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «КРАСНОЯРСКИЙ МЕДИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ КОЛЛЕДЖ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ»

План: Классификация, требования, этапы приготовления, хранение. Контроль качества питательных сред.

При исследовании разнообразных свойств микроорганизмов, а так же для диагностики инфекционных заболеваний, обычно приходится прибегать к выращиванию микроорганизмов на искусственных питательных средах. Питательные среды являются основой микробиологической работы. Чтобы микроорганизмы могли интенсивно размножаться на такой среде, она должна соответствовать определенным требованиям: 1. Содержать достаточное количество питательных веществ, быть питательной т.е содержать в легко усвоенном виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергических потребностей.

Нередко в питательные среды вносят факторы роста – vit, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать. Необходимо помнить, что микроорганизмы как и все микроорганизмы нуждаются в большом количестве воды. 2. Иметь оптимальную концентрацию водородных ионов – рН, т.к. это сказывается на проницаемость оболочки, благодаря чему микроорганизмы могут усваивать питательные вещества. Для большинства патогенных бактерий оптимальной средой является слабощелочная ( рН 7,2 – 7,4 ).

Исключением является холерный вибрион, его оптимальное нахождение в щелочной среде ( рН 8,5 – 9,0). И возбудитель tbc, грибы слабокислая среда ( рН 6,2 – 6,8) Питательные среды должны содержать вещества, которые нейтрализуют продукты обмена микроорганизмов, это необходимо для того, чтобы не менялось рН питательной среды. 3. Осмотическое давление в среде должны быть так же, как внутри клетки т.е. Быть изотоничным для большинства микроорганизмов составляет 0,5% р-ру NaCl. 4. Стерильность и малейшая погрешность в этом отношении может сделать среду не пригодной, препятствующий росту изучению микроорганизма. Определения его свойств и изменяющие свойства среды. (состав, рН и др.)

5. Плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную консистенцию. 6. Обладать определенным окислитильно – восстоновительно потенциалом, т.е. соотношением веществ отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH 2 - он показывает насыщение среды кислородом. Мы знаем, что микроорганизмы подразделяются на, аэробы и анаэробы. 7. Среды должны быть унифицированными, т.е. содержать постоянные количества отдающих ингредиентов. Одним из желательных требований к средам: прозрачность, т.к. удобнее следить за ростом культуры.

Классификация сред Поскольку потребность у разных видов микроорганизмов в питательных веществах неодинакова, то и создание универсальной среды практически не возможно. Предложено очень большое количество сред, в основе классификаций которых положены следующие признаки: 1.По исходным компонентам различают натуральные и синтетические среды. Натуральные среды - готовят из продуктов животного и растительного происхождения.

Синтетические – готовят из оргонических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растительных в дважды дистиллированной воде. И поэтому они имеют преимущество, в том что их состав постоянен, известно сколько и какие вещества в них входят, поэтому их легко произвести. 2. Консистенция ( степень плотности ) Среды делятся на: жидкие, плотные, полужидкие. Плотность достигается за счет добавления агар – агара или желатина, полисахарид получают из определенных сортов морских водорослей. Каких либо питательных веществ для микроорганизмов он не содержат и служит только для уплотнения сред.

Желатин - белок животного происхождения поэтому некоторые микроорганизмы используют его как питательные вещества при их росте среда разжижается. Свернутая сыворотка крови, свернутые яйца, картофель, так же используются в качестве плотной сред. 3. По составу простые сложные МПБ, МПА, бульон, простые среды + агар Хоттингера, кровь, сыворотка, желатин, пептон, углеводы и др. Н2О.

4. Назначение: А) основные они служат для культивирование большинства патогенных микробов. К ним относят: МПБ, МПА, бульон и агар, пептонная вода. Б) Специальные среды служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не расщепляющих на простых средах. Например: добавляя сахар к среде способствует росту стрептококков. В) элективные ( изберательные) само название говорит за себя т.е. благоприятствующий росту определенного вида, подавляющий рост других. Жидкие элективные среды называются средами накопления.

Г) дифференциально – диагностические среды позволяют отличить один вид микроба о другого по ферментативной активности Д) консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировке исследования материала. Например: глицериновая смесь используется для сбора испражнений при исследовании, проводимых с целью обнаружения ряда кишечных бактерий. Сухие среды - это порошки во флаконах с завинчивающими крышками выпускаемые нашей промышленностью.

Преимущество сухих сред - стандартность ( их выпускают большими партиями ), простота приготовления ( готовятся по прописи на этикетках ) стабильная возможность приготовления в любых условиях.

Этапы приготовления питательных сред 1. Варка. Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве. 2. Установление оптимальной величины. РН, с помощью индикаторных бумажек. Для более очного определения рН использует потенциометр или компаратором ( аппарат Михаэлиса ) 3. Осветление в подогретую среду до 50С вливают куриный белок предварительно взвитый с двойным количеством воды. Или сыворотку крови ( мл. на 1л. Среды) кипятят, свертываясь белки увлекают в осадок взвешенные в среде частицы.

4. Фильтрацию осуществляют через фильтр бумажный или матерчатый. Фильтрацию агаровых сред ( т.к. быстро застывают) заменяют отстаиванием в автоклаве. 5. Разливают в пробирки ( по 3 – 5 мл. 10мл.) флаконы, колбы, бутылки не более чем на 2/3 емкости. Среды которые стерилизуют при t выше 100С наливают в чистую посуду. Закрывают ватно – марлевыми пробками поверх которых надевают бумажные колпачки. Прикрепляют этикетку с названием среды и датой ее приготовления. 6. Стерилизация. Режим стерилизации зависит от состава среды и указан в ее рецепте.

7. Контроль осуществляется на стерильность среды ( в термостате на 2 суток, после чего смотрят не появились ли признаки роста) затем передают в хим. Лабораторию на хим. Контроль. Устанавливается рН, содержания общего и аминного азота, хлоридов, все должно соответствовать количеству указному в рецепте. Для биологического контроля засевают специально подобранными культурами микроорганизмов, по их росту о питательных свойствах среды. К готовой среде приклеивают этикетку и паспорт, в котором указывают название и состав среды. Результаты контроля хранят при комнатной t в шкафах.