HindIII (H) Pst I (P) EcoRI (RI) BamHI (B) Дано: Плазмида размером 3000 п.о.; В полилинкере (MCS) между H и B сайтами встроена вставка 1700 п.о. Плазмиду со вставкой подвергли гидролизу эндонуклеазами рестрикции (Э.Р.), затем провели фракционирование получившихся фрагментов ДНК в 1% агарозном геле и окрасили бромистым этидием (флуоресцирует в UV свете). Размер получившихся фрагментов узнавали путем сравнения с маркером молекулярного веса. На основании полученных результатов (сл. слайд) построить рестрикционную карту плазмиды со вставкой, т.е. определить: куда встроена вставка (между какими сайтами Э.Р. в полилинкере); есть ли сайты H, P, RI и B во вставке и, если есть, то на каком расстоянии от концов вставки. Полилинкер = MCS

Например, гидролиз плазмиды со вставкой эндонуклеазой рестрикции Hind III дает три линейных фрагмента ДНК, длинной 3300 и 1400 п.о. (первая строчка) и т.д. Если в результата гидролиза получается два фрагмента с одинаковым размером, то эта полоса будет более интенсивно окрашиваться, что показано жирным шрифтом. Э.Р.Размер линейных фрагментов ДНК H B RI P4700 RI+P B+H B+RI B+P RI+H H+P