Федеральная целевая программа «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на годы Проект «Изучение закономерностей взаимодействий низкомолекулярных органических соединений и специфических антител с использованием флуоресцентных маркеров и разработка новых методов индивидуального и класс-специфического определения антибиотиков, пестицидов и микотоксинов» Государственный контракт N от 2 сентября 2010 г. Организация – исполнитель – Институт биохимии им. А.Н.Баха РАН Руководитель работ – д.х.н., проф. С.А. Еремин

Методы: Поляризационный флуороиммуноанализ Мембранный иммуноанализ с флуоресцентной детекцией Объекты: Пестициды Пестициды Микотоксины Микотоксины Антибиотики Антибиотики Маркеры: Низкомолекулярные флуорофоры (производные флуоресцеина) Коллоидные флуоресцентные наночастицы (квантовые точки)

Sensors ПРИНЦИП ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ФЛУОРОИММУНОАНАЛИЗА Быстрое вращениеМедленное вращение Низкая поляризация Высокая поляризация F – флуоресцентная метка Ag – антиген Ab – антитело F-Ag – трейсер = меченное флуоресцентной меткой производное определяемого вещества

РАЗРАБОТКА И ОПТИМИЗАЦИЯ ПФИА Разработка и оптимизация флуоресцентного иммуноанализа должна включать в себя ряд последовательных процедур: определение аффинности (константы связывания) антител; подбор оптимального трейсера; подбор оптимальной длины и структуры спейсерного мостика; подбор оптимального состава среды проведения анализа а) материал иммунохимического планшета; б) природа и концентрация детергента.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПФИА ГЕРБИЦИДОВ Градуировочные кривые ПФИА метсульфурон-метила и хлорсульфурона ПараметрПФИА МСМПФИА ХС Предел обнаружения, мкг/мл 5,4±2,39,89±3,35 IC 50, мкг/мл123,3±7,893,1±7,6 Линейный диапазон, мкг/мл Наклон0,91±0,030,76±0,06 RSD intra, %0,94,6 RSD inter, %7,112,8 Аналитические параметры ПФИА метсульфурон-метила и хлорсульфурона

СПЕЦИФИЧНОСТЬ ПФИА АНТИБИОТИКОВ Анализируемый антибиотик Перекрестнореагирующее соединение НазваниеCR, % ХлорамфениколТиамфеникол

Коллоидное золото Квантовые точки Применение квантовых точек как маркеров в иммунохроматографии

Свойства: поглощение в широком диапазоне длин волн поглощение, зависящее от размера высокий квантовый выход фото- и химическая стабильность Invitrogen ядро – CdSe, оболочка - ZnS водорастворимые с полимерным покрытием пик эмиссии при 625 нм свободные СООН – группы диаметр около 10 нм Поглощение Флуоресценция

Аналитические характеристики тест-системы Предел обнаружения 0,03 нг/мл* Диапазон определяемых содержаний0,04-3 нг/мл Предел обнаружения при визуальной детекции1 нг/мл Время анализа20 минут * ПДК хлорамфеникола в молоке (СанПиН ) составляет 0,3 нг/мл Флуоресцентный ридер Визуальная детекция Иммунохроматографический анализ хлорамфеникола с использованием квантовых точек Контрольная зона Тестовая зона Berlina A.N. et al. (2013). Analytical & Bioanalytical Chemistry. 405 (14):

Предложена высокопроизводительная мультипараметрическая тест-система для одновременного контроля определения 3-х пороговых уровней ХФ с целью контроля степени превышения нормативов пищевой безопасности. Принцип многозонной тест-системы заключается в расположении на мембране 3-х тестовых зон, в которых сорбировано различное количество конъюгата ХФ-Белок. С увеличением концентрации ХФ в пробе происходит исчезновение одной или нескольких тестовых зон: при С(ХФ)= 0 нг/мл наблюдается 3 полосы; при С(ХФ)= 1 нг/мл наблюдается 2 полосы; при С(ХФ)= 10 нг/мл наблюдается 1 полосы;

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!