Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт фундаментальной биологии и биотехнологии Кафедра биофизики Особенности метаболизма изолированной перфузируемой печени крысы Асанова Анастасия Андреевна. Студенческий лабораторный практикум Красноярск, 2012 Руководитель работы : Шадрин К. В.

Ф ИЗИОЛОГИЯ ОРГАНА Самая большая железа в теле позвоночных Подразделяющаяся на четыре доли: срединную правую левую хвостатую 2

Перфузия – пропускание через ткань раствора, поддерживающего орган в жизнеспособном состоянии Изолированная печень крысы часто применяется при исследовании действия биологически активных веществ П ЕРФУЗИЯ 3

Цель: Выявить динамику ряда физиологических и биохимических показателей жизнедеятельности изолированной перфузируемой печени крысы. Задачи: Оценить динамику физиологических параметров (сопротивление сосудов органа, объем продукции желчи) изолированной перфузируемой печени крысы; Оценить динамику глюкозы в оттекающем перфузате, изолированной перфузируемой печени крысы; На основе полученных данных сделать выводы о функционировании печени крысы в условиях изолированной перфузии. Ц ЕЛЬ И ЗАДАЧИ 4

М АТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Метод перфузии: Подготовка животного к операции; Операция по выделению органа из организма и подключение его к перфузионному аппарату; Снимание показателей перфузии Объем выделения желчи Импеданс сосудовПотребление кислорода Желчный проток Мерный цилиндр Прямое измерение (см 3 /мин) Воротная вена Блок венозных датчиков Прямое измерение (см. вод. столба) Центральная вена Вольтметр Измерение напряжения П = 100 – V (мВ) 5

Датчики теплообменник Забор проб Термостат ОРГАН Термостат Насос Оксигенатор Раствор Кребса-Хенселейта (pH 7.4, 37°C) О 2 +СО 2 Схема установки 6

Глюкозо-оксидазный метод М АТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Н2О2Н2О2, глюкозооксидаза О2О2 Н2О2Н2О2 хромоген Окрашенный продукт 7

8 Р ЕЗУЛЬТАТЫ Динамика выделения желчи (слева), потребления кислорода и импеданса сосудов (справа) изолированной перфузируемой печени крысы; мВ см 3

Р ЕЗУЛЬТАТЫ Зависимость концентрации глюкозы от времени перфузирования; время, мин 9

В ЫВОДЫ Исследуемый орган способен синтезировать желчь в течение часа перфузирования; Потребление кислорода согласуется с импедансом сосудов: резкое возрастание импеданса, сопровождается спадом уровня кислорода в центральной вене; В течение 35 минут орган активно потребляет глюкозу, после чего устанавливается баланс между ее потреблением и производством; Печень исследуемого животного способна метаболизировать в течение 60 минут перфузии. Полученные показатели жизнедеятельности, схожи с таковыми in vivo. 10

Б ЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ ;) 11

И СПОЛЬЗУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА Шадрин К.В., Особенности метаболизма изолированной перфузируемой печени крысы / Шадрин К.В., Федеральное агентсво по образованию, Сибирский федеральный университет, Красноярск, Руководство по применению набора реагентов для определения концентрации глюкозы в биологических жидкостях энзиматическим колориметрическим методом /НПП «Глюкоза-Витал». - М.,