Ингибиторный анализ влияния глицерина на сопряженную ферментную систему NADH:FMN- оксидоредуктаза-люцифераза Федеральное государственное автономное образовательное.

Презентация:



Advertisements
Похожие презентации
Применение ферментативной системы светящихся бактерий для анализа микробного загрязнения Федеральное государственное автономное образовательное учреждение.
Advertisements

Красноярск, 2013 Под руководством : О. С. Сутормин Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования.
Моделирование в программе Swiss-PDB Viewer NADH:FMN-оксидоредуктаза Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального.
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт фундаментальной.
Структурно-функциональная организация ферментов Леонор Михаэлис Мауде Леонора Ментен Берлин, 1912 г.
Температурная инактивация биферментной системы светящихся бактнрий NADF:FMN- оксидоредуктаза-люцефераза в желатине Выполнила Чепайкина А.В. Группа ББ11-03Б.
3. Стационарная кинетика ферментативных реакций. Уравнение Михаэлиса-Ментен. Физический смысл параметров уравнения Михаэлиса (K M, V max ). Значение параметра.
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования.
РЕГУЛЯЦИЯ КИНЕТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ.
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт фундаментальной.
Медицинская академия имени С.И Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского» Кафедра медицинской и фармацевтической химии ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ.
RuBisCO Рибулозобисфосфаткарбоксилаза EC Выполнил: Чижова Анастасия ФБ 09-01С Красноярск 2014 МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ.
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» ИНСТИТУТ ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ.
Магистр 1-ого курса Асанова Анастасия Андреевна « СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт фундаментальной биологии и биотехнологии Кафедра биофизики.
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт фундаментальной.
Люминесценция многокомпонентных растворов органических красителей при ориентационной релаксации растворителя Докладчик Научный руководитель студентка 5.
Витамин К 3 -индуцированное образование активных форм кислорода в клетках глиомы Крылова Н.Г. Научный руководитель Кулагова Т.А. Белорусский государственный.
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования « СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ » Институт.
Федеральное агентство по образованию Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «СИБИРСКИЙ.
Выполнила: Столяр Марина Александровна Руководители: канд. биол. наук, проф. Н.М. Титова, канд. мед. наук, доц. И. А. Ольховский Красноярск 2012 Федеральное.
Транксрипт:

Ингибиторный анализ влияния глицерина на сопряженную ферментную систему NADH:FMN- оксидоредуктаза-люцифераза Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт фундаментальной биологии и биотехнологии Кафедра биофизики Кириллова Мария Александровна Руководитель: к.б.н. Суковатая И. Е. Новосибирск 2012

Сопряженная ферментная система NADH:FMN- оксидоредуктаза-люцифераза 2 Бактериальная люцифераза Vibrio harvei (3fgc, ) NAD(P)H:FMN-оксидоредуктаза Vibrio fischeri (1vfr,

Фундаментальная проблема биофизики Структурно-динамическая организация белковых молекул Дизайн среды – направленное изменение физико-химических свойств реакционной среды для функционирования фермента 3

Цель Определить природу взаимодействия альдегидного субстрата сопряженной ферментной системы NAD(P)H:FMN- оксидоредуктаза-люцифераза в условиях вязкой реакционной среды. 4

Материалы и методы Реакционная смесь : 0,05 М фосфатный буфер комплекс ферментов люцифераза - оксидоредуктаза 0,0025% тетрадеканаля водный раствор NADH водный раствор FMNH 2 органический растворитель – глицерин 20 ÷ 70 об.% Измеряемые параметры: интенсивность свечения (I) константа спада (K dec ) 5 Люминометр GloMax ® -20/20 фирмы «Turner BioSystems» (Sunnyvale,USA)

Ингибирование люциферазы глицерином Рисунок 2 - Зависимость максимальной интенсивности свечения сопряженной биолюминисцентной системы от концентрации растворителя при разных концентрациях альдегида: 1 - [C 14 ]=4,7·10 -7 М; 2 - [C 14 ]=4,7·10 -8 М; 3- [C 14 ]=4,7·10 -9 М; 4 - [C 14 ]=4,7· М 6 4

Формально-кинетический анализ Рисунок 3 - Бесконкурентное ингибирование люциферазы глицерином в координатах Иди-Хофсти, где I - интенсивность свечения, [A] - концентрация альдегида

Тип ингибирования – неполностью бесконкурентный Рисунок 4 - График зависимости ординаты точки пересечения графиков бесконкурентного типа ингибирования с вертикальной осью от концентрации глицерина 8

Константа спада k dec =(ln80-ln20)/t. 9 Рисунок 5 - Константа спада при различных концентрациях альдегида С 14 в 30%-глицерине

Гидрофобное взаимодействие 10 Рисунок 6 - График зависимости константы Михаэлиса от концентрации ингибитора

Эффективность реакции Е= K m /K dec 11 Рисунок 7 – Зависимость эффективности реакции от концентрации глицерина

Выводы 1.Природа взаимодействий глицерина и люциферазы по отношению к альдегидному субстрату в исследуемой системе определена преимущественно гидрофобной 2.Тип ингибирования определен как неполностью бесконкурентный 3.Стабилизация долгоживущего интермедиата реакции наблюдается 4.Сродство альдегида к люциферазе максимально при концентрации глицерина 30 об. %, 5.Эффективность функционирования биолюминесцентной системы максимальна в среде с концентрацией глицерина 30 об. % 12