Минск, БГУ 2009 Разработка схемы очистки свиного рекомбинантного альфа-интерферона из телец включения

Основные цели исследования: Клонирование и экспрессия гена свиного лейкоцитарного α-интерферона в клетках Escherichia coli Оптимизация экспрессии данного гена Разработка схемы очистки рекомбинантного белка

Нуклеотидная последовательность структурной части гена свиного ИФН-α Цветом выделены редко встречающиеся в E. coli аминокислотные кодоны. AGG/AGA/CGA – аргинин, CTA – лейцин, CCC – пролин, GGA – глицин

Накопление свиного ИФН-α в клетках E. coli BL21 (λDE3) и E. coli BL21-CodonPlus(DE3)- RIPL

Электронная микрофотография клеток E. coli BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL (трансмиссионный электронный микроскоп Philips CM120 BioTwin) А. Без индукции ИПТГ В. После индукции 0,5 ммоль/л ИПТГ в течение 3 часов А.В.

Профиль элюции свиного рекомбинантного ИФН-α при проведении обессоливания растворенных в GdHCl телец включения на колонке с Sephadex G25

Профиль элюции свиного ИФН-α при проведении ионообменной хроматографии на колонке с Toyopearl SP550-C

Хроматограмма свиного рекомбинантного ИФН-α на колонке Phenomenex C18, 250 х 4,6 мм, 300Å, 5 мкм

Рекомбиннатный свиной α-интерферон на различных стадиях очистки

Выводы: Частота использования синонимических аминокислотных кодонов влияет на уровень накопления в клетках E. coli свиного лейкоцитарного α-интерферона Свиной лейкоцитарный α-интерферон аккумулируется в клетках E. coli в виде телец включения Очищенный рекомбинантный свиной α- интерферон является биологически активным