Цикл II Генетическая информация 5. Структура нуклеиновых кислот 6. Биосинтез нуклеиновых кислот 7. Биосинтез белка Контрольная 2 Разбор контрольной 2

ДЕНАТУРАЦИЯ – («отход от натуры»), разрушение исходной (нативной) вторичной/третичной структуры Двойная спираль ДНК (N) > два отдельных тяжа ДНК как статистические клубки (D) РЕНАТУРАЦИЯ – («возвращение к натуре»), восстановление исходной (нативной) вторичной/третичной структуры Гибридизация ДНК Олигонуклеотидные зонды

Лекция 6 Биосинтез нуклеиновых кислот МАТРИЧНОЕ КОПИРОВАНИЕ - Репликация ДНК (удвоение всей информации) - Транскрипция РНК (списывание/считывание части информации)

I.РЕПЛИКАЦИЯ 1. Понятие о репликации Три этапа: инициация, элонгация, терминация 2. Полуконсервативный механизм 3. Химия полимеризации 4. ДНК – полимераза. Точность репликации 5. Проблема полярности. Фрагменты Оказаки Биосинтез ДНК - матричный синтез

Репликация ДНК – «танец хромосом» и разделение ядер

Электронная микроскопия репликации ДНК

Ступенчатый матричный синтез ДНК Алкоголиз трифосфатов

Аденозин-5-трифосфат, АТР dATP Лекция 4

Природа «не любит» реакции прямого синтеза: А + В = А-В, поскольку они энергетически затратны. Природа использует обменные реакции: А-Х + В-Y = А-В + Х-Y, поскольку они не требуют затрат энергии

Энергетический профиль процесса и реакции

ΔG для реакций гидролиза kcal/mol kJ/mol Амиды и пептиды Gln GlyGly Эфиры Этилацетат- 4, Ангидриды Р-O-Р- 4, Условная граница (- 25) АТР до АDР и Pi ATP до АМР и РРi- 10, (в клетке - 12 – 15) Уксусный ангидрид - 21,

Изменения стандартной энергии двух реакций аддитивны kJ/mol ROH + p = ROp + H 2 O HOH + pppA = p + ppA ROH + pppA = ROp + ppA (- 4.0 kcal/mol) АТР-зависимые реакции расходуют энергию гидролиза АТР (биол.) Реакционно способный АТР легко вступает в реакции замещения (хим.) Универсальный химический реакционный модуль Лекция 4

ДНК-полимераза Проверка совершенства дуплекса: изогеометричность комплементарных пар

ДНК-полимераза

Ступенчатый матричный синтез ДНК Синтез на одном матричном тяже

Проблема полярности. Фрагменты Оказаки

Репликация ДНК

Проблема вращения ДНК при раскручивании двойной спирали

Топологическая проблема репликации. Топоизомеразы

Топоизомеразы убирают суперспирализацию ДНК

Антибиотики – ингибиторы Топоизомеразы хинолоны/ Фторхинолоны (Ципробай – II пок) Норфлоксацин (нолицин - II пок)

II. Биосинтез РНК - ТРАНСКРИПЦИЯ 1. Понятие о транскрипции 2. Три этапа: инициация, элонгация, терминация 3. Сигналы транскрипции, промотор, терминатор 4. Ингибиторы

ПРОМОТОР – участок ДНК для связывания РНК-полимеразы (Адрес файла для считывания)

Консенсус промотора бактерий Одна РНК-полимераза для всех генов

Специальный белок находит промотор для РНК-полимеразы

Транскрипция

Транскрипция у бактерий in vivo

Ингибиторы транскрипции 1. Блок матрицы ДНК 2. Блок фермента РНК-полимеразы 3. Блок реакции – модифицированный (искаженный) субстрат

1. Блок матрицы ДНК Антибиотики (про-) и яды (эу-) Связываются с ДНК и блокируют РНК-полимеразу

2. Блок фермента α- аманитин из бледной поганки яд LD50 = 0,1 мг/кг

- аманитин блокирует перемещение РНК-полимеразы по ДНК (от неск. тыс. нук/мин до неск. нук/мин)

Ингибиторы РНК-полимеразы Антибиотик рифампицин Mycobacterium Mycobacterium tuberculosis

3. Модифицированный субстрат КОРДИЦЕПИН

Ацикловир

Обратная транскриптаза: РНК-зависимая ДНК-полимераза (см вирус СПИДа) ДНК-зависимая ДНК-полимераза