Технологические основы приготовления диагностических препаратов: диагностических сывороток, антигенов, бактериофагов и аллергенов

Содержание.Введение: 1. Что такое диагностические препараты. 1. Что такое диагностические препараты. 2. Технология приготовления бактериальных антигенов. 2. Технология приготовления бактериальных антигенов. 3. Технология приготовления вирусных антигенов. 3. Технология приготовления вирусных антигенов. 4. Технология приготовления аллергенов. 4. Технология приготовления аллергенов. 5. Технология приготовления бактериофагов. 5. Технология приготовления бактериофагов. Заключение. Заключение.

Список литературы 1. Тихонов И.В. «Биотехнология» Санкт – Петербург Гиорд 2005год. 1. Тихонов И.В. «Биотехнология» Санкт – Петербург Гиорд 2005год. 2. Аксенов М.Ю. «Диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР» М – 1993год. 2. Аксенов М.Ю. «Диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР» М – 1993год. 3. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. «Основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов». М.: ВНИИТиБП, том 1; 2000 г. 3. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. «Основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов». М.: ВНИИТиБП, том 1; 2000 г. 4. Грязнева Т.Н., Тихонов И.В. «Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов». Учебно- методическое пособие для ВУЗов. М.: МГАВМиБ, 2003 г, 49 с. 4. Грязнева Т.Н., Тихонов И.В. «Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов». Учебно- методическое пособие для ВУЗов. М.: МГАВМиБ, 2003 г, 49 с. 5. Кирюткин Г.В., Горлов И.Ф. «Справочник ветеринарных биологических препаратов». Волгоград: типография Химпром, 2002 г. 5. Кирюткин Г.В., Горлов И.Ф. «Справочник ветеринарных биологических препаратов». Волгоград: типография Химпром, 2002 г. 6. «Ветеринарная энциклопедия. Гл. ред. К.И. Скрябин. М.: Изд- во «Советская энциклопедия», 1975 г. 6. «Ветеринарная энциклопедия. Гл. ред. К.И. Скрябин. М.: Изд- во «Советская энциклопедия», 1975 г.

Диагностические препараты 1.Иммунные сыворотки 1.Иммунные сыворотки 2.Антигены-диагностикумы 2.Антигены-диагностикумы 3.Бактериофаги 3.Бактериофаги 4.Аллергены 4.Аллергены 5.Моноклональные антитела 5.Моноклональные антитела

Технологическая схема приготовления гипериммунных сывороток 1.Приготовление антигенов 1.Приготовление антигенов 2.Заготовка животных и их карантинирование 2.Заготовка животных и их карантинирование 3.Вакцинация животных-продуцентов 3.Вакцинация животных-продуцентов

Подготовка животных- продуцентов Грундиммунизация животных Грундиммунизация животных Отбор продуцентов Отбор продуцентов Гипериммунизация животных- продуцентов Гипериммунизация животных- продуцентов Получение гипериммунной сыворотки Получение гипериммунной сыворотки

Изготовление диагностической сыворотки 1.Взятие крови у продуцентов 1.Взятие крови у продуцентов 2.Получение нативной сыворотки 2.Получение нативной сыворотки 3.Очистка и концентрирование 3.Очистка и концентрирование 4.Фильтрация через пластины ФиСФ 5.Консервирование 6.Контроль 4.Фильтрация через пластины ФиСФ 5.Консервирование 6.Контроль

Диагностические сыворотки 1.Агглютинирующие 1.Агглютинирующие 2.Преципитирующие 2.Преципитирующие 3.Лизирующие (комплементсвязывающие) 3.Лизирующие (комплементсвязывающие) 4.Антитоксические 4.Антитоксические 5.Меченные (люминесцирующие, иммуноферментные,радиоиммунные) 5.Меченные (люминесцирующие, иммуноферментные,радиоиммунные)

Диагностические антигены 1.Корпускулярные (взвесь живых или убитых микробов) 1.Корпускулярные (взвесь живых или убитых микробов) 2.Тканевые антигены вирусов или риккетсий 2.Тканевые антигены вирусов или риккетсий 3.Растворимые антигены (экстракты микробов, продукты метаболизма в т.ч. токсины 3.Растворимые антигены (экстракты микробов, продукты метаболизма в т.ч. токсины

Приготовление эритроцитарного диагностикума

Диагностические методы 1.Реакция агглютинации (РА,РБП,ГНГА) 1.Реакция агглютинации (РА,РБП,ГНГА) 2.Реакция связывания комплемента (РСК) 2.Реакция связывания комплемента (РСК) 3.Реакция преципитации (РП,РДП) 3.Реакция преципитации (РП,РДП) 4.Реакция иммунофлюоресценции (МФА,РИФ) 4.Реакция иммунофлюоресценции (МФА,РИФ) 5.Иммуноферментный анализ (ИФА) 5.Иммуноферментный анализ (ИФА) 6.Радиоиммунный анализ (РИД) 6.Радиоиммунный анализ (РИД) 7.Реакция нейтрализации (РН) 7.Реакция нейтрализации (РН) 8.Реакция гемадсорбции (РГА) 8.Реакция гемадсорбции (РГА)

Диагностические аллергены 1.Туберкулин (ППД,АТК) 1.Туберкулин (ППД,АТК) 2.Бруцеллин 2.Бруцеллин 3.Малеин 3.Малеин

Технология приготовления туберкулинов 1.Выращивание в среде Коттона с аспарагином и лимонной кислотой 2.Бактериальную массу автоклавируют 3.Белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой 4.Центрифугируют и повторно осаждают белок сернокислым аммонием 5.Надосадок удаляют, приципитат растворяют дист.Н 2 О и диализируют для удаления сернокислого аммония для удаления сернокислого аммония 6.Раствор туберкулина подщелачивают и фильтруют 7. Расфасовывают во флаконы объемом мл и лиофильно высушивают. 8.Проводят контроль туберкулинов на растворимость, стерильность, рН, безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц

Технология приготовления бруцеллина - Прогревают в реакторе при t С при перемешивании, охлаждают и центрифугируют охлаждают и центрифугируют - Надосадок фильтруют через стерилизующие пластины, разводят физраствором 1:50, стерилизуют при 105 – С физраствором 1:50, стерилизуют при 105 – С - Доводят рН до 7,2 – 7,4, разливают по флаконам, стерилизуют в автоклаве при t – С и выдерживают трое суток при 37 0 С в автоклаве при t – С и выдерживают трое суток при 37 0 С - Контроль на стерильность, содержание бактерийного белка, рН, безвредность, спецефичность и активность. безвредность, спецефичность и активность. - Штамм Вr. abortus B -1 выращивают в питат. среде с 0,5% глюкозы глубинным методом, 4 – 5 суток

Технология приготовления маллеина 1.Actinobacillus mallei 5584 выращивают в мясо- пептонном глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение 4 глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение 4 месяцев при 37°С. месяцев при 37°С. 2.Культуральную суспензию автоклавируют и отстаивают в течение 4-х месяцев при 20°С. течение 4-х месяцев при 20°С. 3.Надосадочную жидкость фильтруют через стерилизующие пластины. пластины. 4.Готовый препарат контролируют на стерильность, безвредность и специфичность. безвредность и специфичность.

Фагодиагностика Бактериофаги-вирусы способные инфицировать бактериальную клетку, репродуцироваться в ней и вызывать её лизис или переход в лизогенное состояние Бактериофаги-вирусы способные инфицировать бактериальную клетку, репродуцироваться в ней и вызывать её лизис или переход в лизогенное состояние

Биологические формы бактериофагов 1.Вегетативный-репродуцируется внутри бакклетки и не обнаруживается 1.Вегетативный-репродуцируется внутри бакклетки и не обнаруживается 2.Вирулентный-вызывает лизис клетки и выход в среду своего потомства 2.Вирулентный-вызывает лизис клетки и выход в среду своего потомства 3.Дефектный-не способен к репродукции полноценного фага 3.Дефектный-не способен к репродукции полноценного фага 4.Умеренный-существует внутри клетки в форме профага, вызывая лизогению клеток 4.Умеренный-существует внутри клетки в форме профага, вызывая лизогению клеток

Специфичность бактериофагов 1.Полифаги-лизируют родственные бактерии разных видов 1.Полифаги-лизируют родственные бактерии разных видов 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий

Специфичность бактериофагов 1.Полифаги-лизируют родственные бактерии разных видов 1.Полифаги-лизируют родственные бактерии разных видов 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий

Развитие вирулентного фага в восприимчивой бактериальной клетке А прикрепление фага; Б проникновение ДНК фага внутрь клетки; В синтез белковых оболочек новых вирусных частиц; Г обнаружение вирулентных вирусных частиц; Д освобождение новых фаговых частиц. А Б В Г Д

Адсорбция фага на бактериальной клетке Адсорбция фага на бактериальной клетке

Строение бактериофага

Бляшки, образованные бактериофагом λ Бляшки, образованные бактериофагом λ

Рис.13. Крупные негативные колонии(В.Я. Ганюшкин,1984)Рис.12 Негативные колонии среднего размера(В.Я. Ганюшкин,1984) Рис.13. Крупные негативные колонии(В.Я. Ганюшкин,1984)Рис.12 Негативные колонии среднего размера(В.Я. Ганюшкин,1984)