Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции Академик РАМН Зверев В.В. Профессор Бойченко М.Н.
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции
Вирусные белки Р17 – матриксный белок Р24 – группоспецифический антиген Р9 – нуклеокапсидный белок Р10/11 – протеаза Р65/51 – ревертаза Р31/32 – интеграза Р55 –белок-предшественник
Антигенная структура Антитела вырабатываются на все белки, продукты генов env, gag, pol, но наиболее значимый иммунный ответ вызывают группоспецифические антигены р24 и поверхностные гликопротеины gp160, gp120. gp41.
Антигенная структура Типы антигеновВИЧ-1ВИЧ-2 Группоспецифические (gag) p24p26 Типоспецифические (gp)gp 160: gp41 gp120 gp140: gp36 gp 105
gp трансмембранные белки gp 41(36),обеспечивают слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной Состоят из карбоксильного трансмембранного участка, который заякорен в оболочке вириона, и аминотерминального участка слияния, обеспечивающего пенетрацию вириона внутрь клетки
gp120 (105) Содержит связывающие домены, ответственные за прикрепление вируса к рецептору CD4 и корецепторам, а также к лектиновому рецептору С-типа DC- SIGN, Определяет макрофагальный и лимфоидный тропизм вируса Несет главную антигенную детерминанту, вырабатывающую нейтрализующие антитела (иммуногеный эпитоп).Однако иммуногенный эпитоп обладает высокой гипервариабельностью, в результате вирус «ускальзывает» от нейтрализующих антител
ВИЧ взаимодействует с клетками, несущими на своей поверхности: CD4 рецептор и хемокиновые рецепторы CCR5, CXCR4, которые расположены на поверхности Th (helper) моноцитов, макрофагов, фолликулярных дендритных клеток, клеток островков Лангерганса, клеток микроглии мозга лектиновый рецептор С-типа DC- SIGN, расположенный на дендритных клетках, который способен связываться с gp120.
Взаимодействие с CD4 и корецепторами CCR5 CXCR4 Взаимодействие с корецепторами CCR5, CXCR4 необходимо для слияния вириона с клеточной мембраной, обеспечивающее проникновение ВИЧ в клетку
Взаимодействие вируса с клетками В начале инфекционного процесса вирус является макрофаготропным (R5), используя в качестве доминантного корецептора CCR5 корецептор. После серий репликаций в организме формируются вирусные варианты, которые используют в качестве корецептора CXCR4 и являются Т-тропными (Х4). Т- тропная популяция вируса коррелирует с прогрессированием заболевания, переходу его в стадию СПИД. Шифт от макрофаготропной (R5) к Т-тропной (Х4) линии вируса связан с изменениями в последовательности env гене.
Результат взаимодействия вируса с клетками Макрофаги, клетки островков Лангерганса, фолликулярные дендритные клетки, в результате взаимодействия с ВИЧ не деградируются, представляя собой резервуар инфекции для заражения других клеток. Макрофаг единственная клетка, инфицированная ВИЧ, являющая источником продукции вируса, когда истощается пул Т (CD4)
Результат взаимодействия вируса с клетками. Дендритные клетки являются первыми клетками, с которыми ВИЧ при сексуальной передаче, поэтому они играют важную роль в передаче вируса Т-хелперам при сексуальных контактах. На их поверхности расположен лектиновый рецептор С- типа DC- SIGN, способный связываться с gp120.
Взаимодействие вируса с лектиновым рецептороим В результате связывания с DC- SIGN, расположенном на поверхности дендритной клетки, ВИЧ не проникает внутрь дендритной клетки и не подвергается процессингу, а остается в инфекционной форме. Благодаря этому, дендритные внутриэпителиальные клетки и клетки, локализованные в слизистой, способны присоединять вирус, при его передачи половым путем и доставлять в инфекционной форме в лимфатический узел, передавая его Th- лимфоцитам путем межклеточного синапса Этот путь не зависит отR5 или X4 типа вируса
Взаимодействие вируса с лектиновым рецептором
Результат взаимодействия вируса с клетками В результате взаимодействия Т-хелперов с ВИЧ происходит их гибель, что в конечном этапе приводит к истощению пула Т-хелперов, в следствие чего, они не могут полноценно обеспечить свою функцию и взаимодействие других иммунокомпетентных клеток. Следует отметить, что ВИЧ проникает и реплицируется только в активированных Т-хелперах. Активация происходит не только в ответ на антигены ВИЧ, но и в результате вторичных инфекций.
Иммуносупрессия при ВИЧ Истощение пула Т-хелперов и их неспособность обеспечить функционирование и взаимодействие других иммунокомпетентных клеток приводит к развитию иммуносупрессии
Иммуносупрессия при ВИЧ выражается в : Гибели Th лимфоцитов в результате взаимодействия с вирусом Апоптозе Th лимфоцитов Нарушении пополнения лимфатических узлов Th клетками из-за повреждений стволовых клеток Неспецифической поликлональной активации В-лимфоцитов
Одной из причин, приводящей к функциональной недостаточности Т- хелперов является обладание ВИЧ свойством суперантигена Суперантигены микробов взаимодействуют с рецептором 2 класса главного комплекса гистосовместимости и антигенраспознающим рецептором Т(CD4) вне антиген связывающей щели
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СУПЕРАНТИГЕНА С МОЛЕКУЛАМИ АНТИГЕНПРЕЗЕНТИРУЮЩЕЙ КЛЕТКИ И Т-ЛИМФОЦИТА
Суперантигены блокируют специфический иммунный ответ: Стимулируя ложную реакцию распознавания антигена Вызывая поликлональную активацию и антиигеннеспецифическую пролиферацию лимфоцитов Вызывая гиперпродукцию цитокинов, способствуют гибели Т-лимфоцитов
Однако и на ранних этапах течения ВИЧ- инфекции, когда еще нет выраженного снижения содержания CD4+-клеток, а доля инфицированных CD4+-лимфоцитов не превышает 0,01% их числа, основное значение в развитии дисбаланса иммунного ответа, формировании иммунодефицита принадлежит нарушениям регуляторных функций Т- хелперов. Причиной указанных нарушений является блокада рецептора CD4.
Иммуносупрессия, вызванная блокадой рецептора CD4. Распознавание Т-хелперами антигенов на поверхности антигенпрезентирующих клеток (например, макрофагов) происходит с обязательным участием двух структур рецептора CD4, который взаимодействует с главным комплексом гистосовместимости II класса (ГКГС II) макрофага, и рецептора для антигена.
Иммуносупрессия, вызванная блокадой рецептора CD4. Связывание только молекулы CD4 каким-либо лигандом (например, анти- СD4-антителом или вирусным белком gp120) в отсутствие последующего задействования рецептора для антигена является для клетки «отрицательным сигналом». При этом происходит быстрая и существенная элиминация молекул CD4 с поверхности клетки.
Иммуносупрессия, вызванная блокадой рецептора CD4. В результате такой лимфоцит не может нормально взаимодействовать с белками главного комплекса гистосовместимости II класса (ГКГС II), локализованного на антигенпрезентирующих клетках, что является необходимым условием для формирования нормального иммунного ответа.
Иммуносупрессия при ВИЧ В течение первых нескольких месяцев CD8 уменьшают виремию, за этим следует появление нейтрализующих антител, несмотря на ежедневное появление 10 млрд новых вирусных частиц и 1 млрд инфицированных Th. Затем иммунный ответ и количество Th начинает падать
Иммуносупрессия при ВИЧ Падает активность NK клеток, CD8 лимфоцитов Исчезает чувствительность кожных проб Падает продукция интерликинов Th лимфоцитами в ответ на митогены Нарастают аутоиммунные нарушения
Иммуносупрессия при ВИЧ Утрата ревертазой контрольных функций и появление квазивариантов вируса приводит к ускользанию вируса от иммунного ответа
Обычное развитие ВИЧ-инфекции
Иммунный ответ Первые недели после инфицирования представляют собой «период серонегативного окна», когда антитела к ВИЧ не выявляются. Поэтому отрицательный результат тестирования на ВИЧ в этот период не означает, что человек не инфицирован ВИЧ и не может заразить других
Иммунный ответ В первые 3 мес. после заражения антитела к ВИЧ появляются у % пациентов, через 6 мес. у остальных 5-9 %, а в более поздние сроки только у 0,5- 1 %. В стадии СПИД регистрируют существенное снижение содержания антител в крови.
Серологические маркеры ВИЧ-инфекции
Лабораторные маркеры в течении ВИЧ-инфекции При первичной инфекции наблюдается следующая динамика маркеров ВИЧ в крови инфицированных. В первый месяц в результате активации репликативного процесса происходит резкое увеличение вирусной нагрузки (содержание РНК ВИЧ в плазме).
Лабораторные маркеры в течение ВИЧ-инфекции Затем, вследствие диссеминации вируса и массового инфицирования клеток-мишеней в крови и лимфатических узлах, становится возможным определение провирусной ДНК. Первостепенную диагностическую ценность имеет факт выявления ДНК провируса, интегрированной в геном клетки-мишени
Лабораторные маркеры в течение ВИЧ-инфекции Вирусная нагрузка отражает интенсивность репликативного процесса в инфицированных клетках. В период первичной инфекции уровень вирусной нагрузки различен при инфицировании разными субтипами ВИЧ, однако динамика его изменений примерно одинакова. Так, при инфицировании субтипом В, например, если в первый месяц после заражения значение вирусной нагрузки составляет 700 копий/мл, то во 2-й месяц происходит снижение до 600, в 3-й до 100, в 4-й до 50 копий/мл. Такая динамика наблюдается на фоне нарастания содержания в крови специфических антител к ВИЧ.
Лабораторные маркеры в течение ВИЧ-инфекции В стадии инкубации в течение некоторого времени не происходит образования специфических антител к ВИЧ в количестве, достаточном для определения существующими лабораторными методами. До регистрации антител в течение очень короткого времени наблюдается появление в крови белка Nef.,
Лабораторные маркеры в течение ВИЧ-инфекции Антиген р24 может быть выявлен в крови методом иммуноферментного анализа уже через 12 нед после заражения и определяться до 8-й нед, затем его содержание резко снижается. Далее в клиническом течении ВИЧ- инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р24. Он приходится на период формирования СПИД.
Лабораторные маркеры в течение ВИЧ-инфекции Исчезновение в крови свободных (не связанных антителами) сердцевинных белков р24 и появление специфических антител к белкам ВИЧ знаменуют наступление сероконверсии.
Лабораторные маркеры в течение ВИЧ-инфекции lg клеток/мм куб. СПИД латентный период сероконверсия дни ____________________________________________________ годы РНК копий/мл РНК анти Р24 P24 антиген анти gp41 CD4
Диагностика ВИЧ серодиагностика В России диагностика ВИЧ-инфекции проводится определением антител/антигенов ВИЧ с последующим отдельным подтверждением антител в реакции иммунного блоттинга.
Обнаружение антител/антигена ВИЧ включает два этапа: На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител/антигена ВИЧ с использованием тестов для совместного определения антител и р24 антигена ВИЧ методом ИФА. На втором этапе методом иммунного блоттинга проводится определение антител к отдельным антигенам вируса и наличие р24 антигена ВИЧ.
Диагностика ВИЧ серодиагностика На первом этапе у обследуемых проводится определение антител к ВИЧ с помощью одной Иммуноферментной тест-системы, предназначенной для детекции антител к обоим типам вируса ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Фирмами-производителями в предлагаемых тест- системах в качестве антигенной основы используются вирусный лизат, рекомбинантные белки, синтетические пептиды. Каждый из них обладает своими достоинствами и недостатками. Поэтому при выборе тест-систем приблизительно равной стоимости следует наибольшей предпочитать наборы с чувствительностью (желательно 100%).
Диагностика ВИЧ серодиагностика На основе лизата вируса были созданы первые тест-системы для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. В 80-х годах такие тест-системы характеризовались чувствительностью менее 100% и низкой специфичностью, проявляющейся большим количеством (до 60%) ложноположительных результатов. При формировании вириона в культуре лимфоцитов его оболочка создается из наружной мембраны и поэтому содержит антигены главного комплекса гистосовместимости I и II классов. Это обстоятельство обусловливает ложно-положительные реакции в том случае, если в крови пациентов присутствуют антитела к аллоантигенам гистосовместимости
Диагностика ВИЧ серодиагностика Одними из лучших по самым важным характеристикам чувствительности и специфичности признаны иммуноферментные тест-системы, в составе которых использована комбинация очищенного вирусного лизата с синтетическими пептидами, представляющими собой наиболее антигензначимые участки белков вируса, или рекомбинантными белками.
Диагностика ВИЧ серодиагностика Первичный положительный результат необходимо перепроверять повторным исследованием образца в той же тест-системе, но желательно другой серии и другим лаборантом. Если при повторном исследовании получен отрицательный результат, исследование проводится третий раз. После подтверждения положительного результата желательно осуществить повторное взятие крови и исследовать ее на антитела к ВИЧ как первичную. Повторное взятие крови позволяет предупредить ошибку, обусловленную неточностью маркировки пробирок и заполнения бланков направлений.
Диагностика ВИЧ серодиагностика Серопозитивная на скрининговом этапе сыворотка крови направляется на референтные исследования, выполняемые с использованием двух-трех высокоспецифичных ИФА тест-систем. В случае двух положительных результатов проводят экспертное исследование методом иммуноблотинга.
Иммунный блоттинг В настоящее время иммунный блоттинг (иммуноблот, ИБ) является основным методом для подтверждения наличия вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке
Иммунный блоттинг Тест-системы для ИБ на основе рекомбинантрных белков, полученных путем генной инженерии, оказались более специфичными, чем обычные системы на основе очищенного вирусного лизата. При использовании рекомбинантного антигена формируется не диффузная, а четко выраженная узкая полоска антигена, легко доступная для учета и оценки.
Иммунный блоттинг Лабораторное экспертное заключение об инфицированности ВИЧ выносится только на основании положительного результата иммуноблотинга (Western blot). При проведении экспертной диагностики необходимо пользоваться предложенными в 1990 г. группой экспертов ВОЗ номенклатурой генов и генных продуктов ВИЧ
Иммунный блоттинг Специфичность полос на иммуноблоте следует оценивать очень внимательно и тщательно, используя при этом результаты исследований контрольных сывороток (положительной и отрицательной), которые проводятся параллельно с исследованием опытных проб, и образец иммуноблота с обозначением белков ВИЧ (прилагается фирмой-производителем к тест-системе).
Иммунный блоттинг Интерпретацию полученных результатов следует проводить согласно прилагаемой к тест-системе инструкции. Как правило, критерием позитивности является обязательное наличие антител к двум белкам (предшественнику, наружному или трансмембранному), кодируемым геном env, и возможное присутствие антител к продуктам двух других структурных генов ВИЧ gag и pol
Иммунный блоттинг ВИЧ Western Blot - тест-система фирмы Organon Teknika для определения антител к ВИЧ в сыворотке и плазме крови тест-система
Полоски-стрипы из блота. Чтение результатов Полоска А - Положительный контроль Полоска В - Слабоположительный контроль Полоска С - Отрицательный контроль Полоска D - Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)
Полоски-стрипы из блота. Чтение результатов В положительном контроле и исследуемом образце присутствуют полосы: –gp 160 (поверхностные структуры –Gp120 –p55 (белок-предшественник) –p51, p65 (обратная транскриптаза) –envgp 41 (трансмембранный белок) –polp31 (интеграза) –P24 –gagp17,
Оценка результатов ИБ Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ, 1991) рекомендует следующую оценку результатов исследований, проведенных методом ИБ: Положительный результат обнаружение в сыворотке антител к двум вирусным белкам из группы env с наличием или отсутствием белков продуктов других структурных генов (gag, pol); Отрицательный результат отсутствие антитела к вирусспецифическим белкам; Неопределенный результат обнаружение в сыворотке антител к белкам из групп gag, pol.
Оценка результатов ИБ Основная часть первично обследованных серопозитивных в ИФА пациентов относится к фазе персистирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ) или к бессимптомной фазе. Поэтому на иммуноблоте (нитроцеллюлозной полоске, на которой иммобилизованы белки ВИЧ) определяется, как правило, следующая комбинация антител к ВИЧ-1: антитела к оболочечным белкам gp160, gp120 и gp41, кодируемым геном env, в сочетании с антителами к сердцевинным белкам р24 (белок нуклеокапсида. кодируемый геном gag) и р31/34 (интеграза), кодируемая геном pol].
Оценка результатов ИБ При исследовании методом ИБ обнаружено, что чаще всего в сыворотках больных СПИДом выявляются антитела к gp 41
Оценка результатов ИБ Положительные реакции только с белками gag и/или pol могут иметь место в случае ранней фазы сероконверсии, а также указывать на инфекцию, вызванную ВИЧ-2, или неспецифическую реакцию
Интерпретация результатов иммуноблотинга Результатполосы положительный2 полосы env белков(предшественника(gp160), наружного gp120 или трансмембранного белка gp41 +/-полосы белков pol +/-полосы белков gag отрицательныйОтсутствие ВИЧ-специфических полос неопределенн ый Другой профиль не рассматривается ни как позитивный, ни как негативный
Диагностика ВИЧ ПЦР Обладает меньшей точностью (ок. 95 %), чем ИФА, однако может быть использован уже спустя 10 дней после возможной передачи вируса. В связи с изменчивостью вируса при первичной постановке диагноза не используется По результатам ПЦР диагноз не ставится.
Диагностика ВИЧ ПЦР Применяется в случаях, когда желателен ранний предварительный результат (до истечения 3 месяцев) или иммунный ответ не может служить показателем: у новорожденных, у пациентов, проходивших иммунносупрессорную терапию Для оценки эффективности лечения Определения формирования резистентности к препаратам противовирусной терапии
Дети рождаются с антителами матери, поэтому тест на антитела большинства детей, рожденных от ВИЧ-положительных матерей, какое-то время будет положительным. Но это не означает что у ребенка есть вирус в крови. Если заражения не произошло, антитела постепенно исчезнут, и тест будет отрицательным. Ребенку необходимо пройти повторный анализ на ВИЧ в полтора года, чтобы установить верный диагноз. Развитие ВИЧ-инфекции у ребенка, родившегося от ВИЧ-положительной матери
Развитие ВИЧ-инфекции у ребенка, родившегося от ВИЧ-положительной матери.
Диагностический алгоритм тестирования крови на ВИЧ В России в настоящее время стандартной процедурой тестирования крови на ВИЧ является обнаружение антител/антигенов ВИЧ с последующим отдельным подтверждением антител в реакции иммунного блоттинга и р24 антигена в тестах для определения р24 антигена.
Диагностический алгоритм тестирования крови на ВИЧ- инфекцию На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител/антигена ВИЧ с использованием тестов для совместного определения антител и р24 антигена ВИЧ. На втором этапе методом иммунного блоттинга проводится определение антител к отдельным антигенам вируса и наличие р24 антигена ВИЧ.
Скрининговая лаборатория Исследование донорской крови проводится с использованием только тест-систем, одновременно выявляющих как антитела, так и р24 антиген ВИЧ. Используемые тест-системы должны обладать наивысшими показателями по чувствительности и специфичности (близкими к 100%).
Скрининговая лаборатория Если получен положительный результат, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе). Если при этом был получен еще хотя бы один положительный результат (два положительных результата из трех постановок в ИФА), сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования
Скрининговая лаборатория После получения первого положительного результата в ИФА, забранная порция крови бракуется в установленном порядке. Донор отстраняется от донорства до получения окончательного заключения из референс-лаборатории.
Референс-лаборатория В референс-лаборатории первично положительная сыворотка (то есть давшая два положительных результата в первой тест- системе) повторно исследуется в ИФА во второй (другой) тест-системе, выбранной для подтверждения. При получении положительного результата анализа и во второй тест-системе сыворотку необходимо исследовать в иммунном блоте. При получении отрицательного результата во второй тест-системе сыворотка повторно исследуется в третьей (другой) тест-системе. В случае получения отрицательного результата анализа и во второй и в третьей тест-системе выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ.
Референс-лаборатория При получении положительного результата в третьей тест-системе сыворотка также направляется на исследование в иммунном блоте. При получении положительного результата во второй или третьей ИФА тест-системе и отрицательного результата в ИБ сыворотка исследуется в тестах для определения р24 антигена.
Станция переливания крови или отделение переливания крови При получении заключения из референс- лаборатории об отрицательных результатах исследования в ИФА-тестах - временные ограничения по сдаче крови снимаются и донора можно допускать к сдаче крови. При получении положительных результатов в ИФА, неопределенных или положительных результатов в иммунном блоте донор пожизненно отстраняется от донорства и ставится на диспансерный учет в Центре по профилактике и борьбе со СПИД в установленном порядке.
Карантинизация свежезамороженной плазмы Описанный выше алгоритм лабораторного исследования донорской крови не позволяет со 100% гарантией предотвратить возможность переливания ВИЧ-инфицированной крови. Сохраняется возможность дачи крови лицами без клинических и лабораторных проявлений признаков ВИЧ-инфекции (период "окна" в начальной стадии заболевания). С целью обеспечения безопасности трансфузий плазмы осуществляется ее хранение на протяжении определенного времени - карантин плазмы.
Карантинизация свежезамороженной плазмы Карантинизация свежезамороженной плазмы рассматривается как дополнительная мера исключения передачи вирусной инфекции. Это мероприятие рассматривается как дополнительное мероприятие, исключающее передачу ВИЧ- инфекции.
Карантинизация свежезамороженной плазмы Правила карантинизации определены приказом Минздрава России от 7 мая 2003 г. N 193 "О внедрении в практику работы службы крови в Российской Федерации метода карантинизации свежезамороженной плазмы". Карантинизация свежезамороженной плазмы (СЗП) рассматривается как дополнительная мера исключения передачи вирусной инфекции.
Карантинизация свежезамороженной плазмы С учетом максимальной продолжительности латентного периода гемотрансмиссивных инфекций в течение 180 суток хранят свежезамороженную плазму, полученную от доноров, обследованных в установленном порядке. По истечении этого срока проводят повторное обследование донора с определением клинических и лабораторных (антитела/антигены ВИЧ-1, ВИЧ-2, антитела к вирусу гепатита C, HBs-антиген) признаков гемотрансмиссивных инфекций. При отсутствии признаков заболевания СЗП выдается для лечебного применения или переработки при соответствии требованиям ФС "Плазма для фракционирования".
Карантинизация свежезамороженной плазмы При выявлении в период карантинизации вирусоносительства или заболевания донора (ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты), вся заготовленная от него плазма бракуется. Забракованная плазма уничтожается в установленном порядке с составлением акта утилизации. При неявке донора для повторного обследования за три месяца до истечения срока хранения СЗП снимается с карантинизации и уничтожается в установленном порядке
Социальные аспекты тестирования Тестирование на ВИЧ может иметь как позитивные, так и негативные последствия. Поэтому во всех демократических странах право выбора сдавать анализ или нет предоставляется самому человеку. Тестирование на ВИЧ очень важно с точки зрения сохранения здоровья человека. Результаты могут повлиять на планирование жизни и карьеры, отношение к собственному организму, сексуальные практики и точку зрения на употребление вредных или опасных субстанций. Вместе с тем, результат может стать известен окружающим, а значит, служить причиной для дискриминации увольнения с работы, развода с супругом, потери близкого человека или друзей, отказа в предоставлении медицинской помощи или других услуг. Часто получение положительного анализа приводит к сильному стрессу самого человека. Поэтому решение о тестировании должно приниматься осознанно, без давления и на полностью добровольной основе.
Социальные аспекты тестирования Проведение анализа без согласия человека является незаконным в России. Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан от 22 июля 1993 г. N устанавливают, что для любого медицинского вмешательства необходимо информированное добровольное согласие пациента. Это, в частности, означает, что забор крови не может быть на законных основаниях произведен принудительно. Исключение сделано для пациентов, чье состояние здоровья не позволяет им выразить свою волю (в этом случае решение принимает медицинский консилиум), и для подростков младше 15 лет (решение принимают законные представители).
Социальные аспекты тестирования Существуют также 4 ситуации, в которых предоставление результатов тестирования на ВИЧ является обязательным (но не насильственным каждый может просто отказаться от участия): 1) донорство крови, других биологических жидкостей органов, 2) при устройстве на работу медицинского работника или другого специалиста в учреждение, которое непосредственно обрабатывает или принимает материалы, заведомо содержащие ВИЧ, 3) для иностранных граждан получение виз для проживания на территории России сроком более 3 месяцев, 4) тестирование лиц, находящихся в местах лишения свободы в случае наличия клинических показаний (и в этом случае обследование может быть проведено только с согласия пациент