Иммунохимические методы анализа в клинической лаборатории

Иммунохимические методы исследований Иммунохимические методы исследований – методы, основанные на специфической реакции взаимодействия антигена с антителом. Cфера применения - показаны в ситуациях, когда необходимо количественно определить концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале. Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген (РЭА), альфа-фетопротеин и др. Гормоны Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV Маркеры воспаления: Ревматоидный Фактор, С- Реактивный Белок Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин и др.

Специфичность и чувствительность иммунохимических методов Специфичность: иммунохимические методы высокоспецифичны (95-98%), можно легко и точно дифференцировать в биологической пробе химические вещества, имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, Тироксин и Трийодтиронин). Чувствительность: При помощи иммунологических методов исследования в биологической пробе можно определить химические вещества в концентрациях вплоть до моль/л.

Принцип иммунологических методов исследования Основа технологии любого иммунологического метода исследования – реакция между антигеном и антителом. Антиген - вещество, распознающееся иммунной системой Антитела (иммуноглобулины) - белки, специфически реагирующие с Аг. Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».

Общая схема строения иммуноглобулинов

Схема взаимодействия антигена с комплементарным ему антителом

Перекрестное взаимодействие. Связывание вещества, структура которого очень схожа со структурой антигена, с соответствующим антителом называется перекрёстной реакцией Связывающее сродство в перекрестных реакциях как правило более низкое чем в процессе реагирования между абсолютно специфичными партнёрами.

Методы иммунохимического тестирования Ag + At = Комплекс AgAt. 1.Детекция антигена - тест-система должна иметь в своём составе соответствующее антитело (для определения концентрации дигоксина надо иметь в тест- системе антитела к нему) 2.Детекция антител - тест-система должна содержать в своём составе соответствующий антиген (для определении антител к НbSAg в тест системе должен содержаться синтетический HbSAg) 3.Детекция иммунного комплекса (т.е. связанных между собой Антигена и Антитела) – реакция преципитации, агглютинации и т.д. ( в зависимости от молекулярной массы и концентрации в сыворотке крови исследуемого антигена

Антитела, применяемые в иммунохимических тест-системах 1.Моноклональные антитела - полученные от одной клеточной линии ( клона), синтезируются клетками гибридомы. Такие Ат при взаимодействии со специфическим антигеном обладают одинаковой специфичностью и связывающей способностью. 2.Поликлональные антитела - смесь антител, полученных от различных клеточных линий. Получают из сыворотки иммунизированных животных. Антитела в такой смеси могут различаться по связывающей способности.

Иммунохимические методы – основные технологические подходы Не предусматривается использование «твёрдой фазы» Отсутствуют процедуры разделения между несколькими реакционными стадиями Выполняются относительно быстро. Гомогенные иммунохимические методы

Иммунохимические методы - основные технологические подходы (продолжение) Устраняется влияние на процесс исследования других компонентов, содержащихся в исследуемой пробе. Чувствительность выше.

Основные виды гетерогенного иммунохимического анализа 1.Конкурентные методы 2.Сэндвич-методы

Иммунохимические методы - основные технологические подходы (продолжение) 3.Иммунохимические методы на основе диффузии и электрофореза Растворённый АГ + растворённое АТ (в жидкостях или в гелях) преципитат (АГ+АТ) детекция визуально, либо при помощи измерительной аппаратуры. Необходима точность в соотношении концентраций между антигенами и антителами. Пассивная иммунодифузия антигена и антитела может быть активизированна при помощи различных электрофоретических методик.

Изменение свойств преципитата в зависимости от соотношения АГ:АТ