1 ОЛЛ Профессор кафедры клинической лабораторной диагностики ИГИУВа Заведующая Центром лабораторных исследований ГУЗ Иркутская ордена «ЗНАК ПОЧЕТА» областная клиническая больница д.м.н., Т.С. Белохвостикова

2 Иммунофенотипирование с помощью проточной цитофлуориметрии Стволовая клетка Про-Тл Общий тимоцит Т-хелпер Активир. Тх Промежут. Вл Иммуно- бласт Плазм. клетка NK HLA-DR CD34 Про-Вл HLA-DR CD19,22, 34 Пре-Вл HLA-DR CD19, 22, 10 Ранняя Вл HLA-DR CD19, 22, 20 Зрелая Вл HLA-DR CD19, 22, 20, 21 HLA-DR CD19, 22, 20 HLA-DR CD19, 22, 20 CD38 Зрелый Тл HLA-DR CD34, 7, 2 Общий тимоцит HLA-DR CD7, 2, 5, 1, 4/8 HLA-DR CD2, 5, 4, 7 HLA-DR CD7, 2, 5, 1, 4/8 HLA-DR CD2, 5, 4 HLA-DR CD2, 5, 4, 25 Зрелый Тл HLA-DR CD7, 2, 5, 8 Т-супрес. HLA-DR CD7, 2, 5, 8 Активир. Тс HLA-DR CD2, 5, 7, 8, 25 HLA-DR CD7, 16, 56 Костный мозг

3

4

5

6 Строение тимуса Фото 1: 1 - долька 2 - междольковая соединительная ткань 3 - корковое вещество 4 - мозговое вещество Фото 2: 1 - тельце Гассаля 2 - корковое вещество 3 - мозговое вещество Окраска гематоксилин-эозином

7 Лимфатические узлы ЛИМФАТИЧЕСКИЙ УЗЕЛ 1 - корковое вещество 2 - паракортикальная зона 3 - мозговое вещество 4 - мозговые тяжи 5 - лимфоидный фолликул коркового вещества 6 - капсула ЛИМФАТИЧЕСКИЙ УЗЕЛ 1 - корковое вещество 2 - паракортикальная зона 3 - мозговое вещество 4 - мозговые тяжи 5 - лимфоидный фолликул коркового вещества 6 - капсула 7 - субкапсулярный синус 8 - корковый синус 9 - мозговой синус Окраска гематоксилин-эозином

8 Селезенка Лимфоидный фолликул - отграничен пунктирной линией 1 - центр размножения лимфоидного фолликула 2 - мантийный слой лимфоидного фолликула 3 - маргинальный слой лимфоидного фолликула 4 - периартериальная зона лимфоидного фолликула 5 - центральная артерия 6 - красная пульпа 7 - трабекулы Окраска гематоксилин- эозином

9 (EGIL,1995) Иммунологическая классификация ОЛЛ ФенотипАнтигены В-линейные* ВI (про-В)CD19+/CD79a+/CD22+(in) ВII (common)CD10+ BIII (пре-В)Цитоплазматическая μ-цепь BIY (зрелый В)mIgM, моноклональные по κ или λ-типу Т-линейные** TI (про-Т)CD7+ TII (пре-Т)CD2+/CD5+/CD8+ TIII (кортикальный)CD1a+ TIY (зрелый Т)Мембранный СD3+CD1a+ * позитивные с двумя из трех маркеров: большинство случаев Tdt+, HLA-DR+, кроме BIY, который часто Tdt-, **- большинство случаев Tdt+, HLA-DR-, CD 34-

10 Схема реаранжировки генов тяжелых цепей иммуноглобулинов Герминальная ДНК Соматическая рекомбинация Соединение D-J Соматическая рекомбинация Соединение V-DJ Транскрипция Первичный РНК-транскрипт Сплайсинг мРНК Трансляция Полипептидная цепь Стволовая клетка От Про-В до Пре-В лимфоцита От Пре-В лимфоцита до плазмоцита V1 V2 Vn D1 D2 Dn J1 J2 Jn C С С С С D-J V-DJ AAA AAAAAA Ig

11 Про-В

12 Про-В 10-летний мальчик, которому выставлен диагноз про-В вариант ОЛЛ 6 месяцев назад. Он дал хороший ответ на химиотерапию и после месяца индукционной терапии, была подтверждена ремиссия. В костном мозге 5 месяцев спустя

13 ОЛЛ, B-precursor type, common ALL, В-2. Мать девочки 6 лет обратилась с жалобами на недомогание ребенка. При осмотре обнаружены мелкоточечные петехии. Antigen Profile: Positive for CD71, CD19, CD10, CD22, HLADR, CD34; dimly positive for CD33.

14 В-2

15 В-2

16 В2-ОЛЛ Пациент - 52-летний мужчина, который обнаружил целлюлит на локте и был обследован, в крови обнаружен лимфоцитоз. Костный мозг был пунктирован и послан в лабораторию для фенотипирования. Когда лаборатория представила результат онкологу, который послал образец, предположили, что это ошибка. Это - прямой случай расхождения фенотипа клеток с морфологическим исследованием. Гранулярный common лейкоз в этом специфическом случае стал причиной расхождения диагнозов, поскольку начальное впечатление было об остром промиелоцитарном лейкозе. Подобно миелопероксидазе и цитоплазматическому CD3, пермеабилизация позволяет обнаружить внутриклеточные антигены (ядерные). Диагноз: острая лимфообластный лейкоз, гранулярный тип B-предшественников (обычный common) Фенотип: CD71, CD19, CD10, CD34, CD38, CD20, CD22, TdT; слабая экспрессия CD33

17 В2-ОЛЛ

18 В2-ОЛЛ

19 В2-ОЛЛ

20 В 2

21 Клинический случай лимфобластный лейкоз Пациент Т.,27 лет ОАК: L-1.96х10 9 /л Нв-63г/л, Эр1,91х10 12 /л тр-27х10 9 /л L-формула: бластные клетки-18% п/я-9%, с/я-25, Мон-1%, лф-47% Цитохимия: Реакция на пероксидазу - отрицательная Реакция на гликоген - положительная, гранулярная в 21% бластных клеток

22 Клинический случай лимфобластный лейкоз CD33+ CD7- CD3 in+ CD79a+ CD4+ CD8- CD8+ CD4- Ki-67+ CD79a+ Ki-67+ CD3+- Ki-67+ CD3-

23 Клинический случай лимфобластный лейкоз МаркерЭкспрессия % статистика по гейту МаркерЭкспрессия % статистика по гейту МаркерКоэкспрессия % статистика по гейту СD4595СD16,560СD3 in/ CD79a73 СD2СD231СD140HLA-DR/СD341 СD3 ext3СD130СD7/СD3333 СD3 in86СD3333СD7/СD230 СD4СD41MPO1СD2/СD3 ext2 СD8СD81СD150СD5/СD3841 СD5СD5 СD1170TDT/СD3 in37 СD7СD796СD3489TDT/CD79a27 СD100HLA-DR2Ki-67/СD3 in47 СD191СD3899Ki-67/CD79a29 CD79a76TDT37IgM/СD22 in4 СD201CD9589IgM/СD22 ext10 СD22 ext44CD7194 СD22 in12Ki-6749СD3/СD41 IgM ext4СD250СD3/СD81 IgM in10 Kappa in0 Lambda in0

24 Описание: В исследованной пробе костного мозга гейт бластных клеток составляет 94% от всех просчитанных событий. В гейте выявляется экспрессия ранних маркеров CD34, TDT. Выявляется экспрессия Т-клеточных СD2, СD3 in, СD5, СD7 и В- клеточных маркеров CD79a, СD22 ext, in; также СD33, СD38, CD71,CD95. Уровень пролиферативной активности высокий. Заключение: Данный иммунофенотип соответствует острому лимфобластному лейкозу с экспрессией Т- и В-клеточных антигенов. Иммунофенотип опухолевых клеток: CD34+, TDT-/+, СD2-/+, СD3 in+, СD3 ext-, СD5-/+, СD7+, СD33-/+, CD79a+, СD22 ext, in-/+, СD38+, CD71+, CD95+. Клинический случай лимфобластный лейкоз

25 Т-ОЛЛ Пациентка 36 лет, отмечает лимфоаденопатию в течение 6 месяцев. Фенотип: CD3(+),CD2,CD5(+++),CD4+,HLADR+,CD25+ ; CD7 -

26

27 Спасибо за внимание