Выделение чистых культур облигатных анаэробов.

Выделение чистых культур облигатных анаэробов. Питательные среды. СРЕДА ВИЛЬСОНА-БЛЕРА (ЖЕЛЕЗО-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР) используется для выделения анаэробных бактерий. Готовится из питательного агара, к которому добавляют 1% глюкозы, хлорид железа и сульфит натрия. Анаэробные клостридии (Clostridium perfringens) образуют на среде колонии черного цвета за счет образования соединений железа с серой.

Создание анаэробных условий Анаэростат Питательные среды закладываются в емкость и инкубируются при анаэробной атмосфере. Анаэробная среда может создаваться по выбору посредством так называемых генераторов анаэробов или через продувку CO2. GasPak система химическим путем обеспечивает постоянство газовой смеси приемлемой для роста большинства анаэробных микроорганизмов. В герметичном контейнере, в результате реакции воды с таблетками боргидрида натрия и бикарбоната натрия образуется водород и диоксид углерода. Водород затем реагирует с кислородом газовой смеси на палладиевом катализаторе с образованием воды, уже вторично вступающей в реакцию гидролиза боргидрида.боргидрида натриябикарбоната натрияводороддиоксид углеродапалладиевом

Схема выделения чистой культуры облигатных анаэробов. Взятие исследуемого материала осуществляется шприцем с притертым поршнем, после чего материал вносят в пробирку с транспортной средой. Выделение чистой культуры проводится со строгим соблюдением анаэробных условий на всех этапах исследования. 1-й этап – получение изолированных колоний. Готовят ряд разведений исследуемого материала и делают посев на чашки Петри со средой КАБ или другой питательной средой для культивирования анаэробов. Посевы инкубируют в микроанаэростатах. заполненных газовой смесью, при температуре 37С в течение часов.

2-й этап - получение чистой культуры анаэробов. На этом этапе: 1.Изучают морфологические и культуральные свойства выросших колоний. 2. Проводят параллельный рассев каждой отобранной колонии на две чашки Петри с питательной средой, например КАБ. Одну чашку инкубируют в аэробных условиях, другую - в анаэробных условиях. Дня дальнейшего исследования отбирают культуры, выросшие только в анаэробных условиях (так исключают факультативные анаэробы). Схема выделения чистой культуры облигатных анаэробов.

3-й этап - идентификация выделенных облигатных анаэробов. Проводят биохимическую идентификацию в микротест-системе, например АР1-20А. Суспензию выделенной культуры засевают на пластину АР-20А с набором биохимических гестов, инкубируют в анаэробных условиях в течение 48 часов, учитывают биохимические свойства культуры по изменению окраски индикаторов системы и определяют ее родовую и/или видовую принадлежность. Схема выделения чистой культуры облигатных анаэробов.