Исследование Ретинальных Липофусциновых Гранул Методами Атомно-силовой И Ближнепольной Скарирующей Микроскопии А. А. Астафьев Московский-Физико Технический Институт А. Н. Петрухин Институт Химической Физики им. Н.С. Семёнова
Обьект исследования – липофусциновые гранулы из глаза человека Липофусциновые гранулы – белково-липидные образования микронного размера. Под действием синего света образуют активные формы кислорода, разрушающие зрительные рецепторы
Под действием синего света гранулы флуоресцируют в жёлтой части спектра Наиболее известным из флуорофоров является так называемый А2Е, обладающий фототоксическими свойствами, спектр флуоресценции которого в основном совпадает со спектром флуоресценции липофусцина. A2E
Изображения гранулы, полученные атомно-силовым микроскопом
Схема эксперимента по наблюдению флуоресценции
Использовалось две методики: 1.Образец освещается через зонд, флуоресценция собирается объективом (режим освещения) Достоинства: простота Недостатки: сильный фоновый сигнал из-за флуоресценции волокна. Сложные юстировки. 2.Образец освещается через обьектив, флуоресценция собирается зондом (режим сбора) Достоинства: Можно избавится от фонового сигнала. Облегчаются юстировки. Недостатки: сигнал флуоресценции слабее
12 3
Сравнение спектров флуоресценции тестового образца, полученных при сборе через объектив и через апертуру зонда
Сравнение спектров флуоресценции на вершине и у подножия скопления липофусцина
Нахождние спектра флуоресценции отдельной гранулы
Сравнение спектров флуоресценции, полученных в различных точках гранулы
Фотовыцветание гранул под действием зелёного света
Выводы: 1.Исследована структура липофусциновых гранул 2.Получен спектр флуоресценции с липофусцинового скопления. Проведенно сравнение спектров, полученных в режиме сбора и в режиме освещения. 3.Получен спектр флуоресценции одиночной гранулы. 4.Наблюдалось фотовыцветание гранул под действием интенсивного света. Дальнейшие планы: С помощью карты флуоресценции исследовать распределение флуорофоров в единичной грануле