И. С. Мамедов, Ю. А. Смолина, В. С. Сухоруков НИЛ общей патологии ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии 1

катаболизм полиаминов « пероксисомное дыхание » синтез плазмологенов β - окисление длинноцепочечных ( С и более ) и разветвлённых жирных кислот ( С 26 и более ) биосинтез эфиросодержащих липидов α - окисление жирных кислот детоксикация глиоксилата 2

морфологический : отсутствие или наличие пероксисом в печени биохимический : нарушение одной или нескольких функций пероксисом Критерии разделения : 3

Пероксисомы в печени отсутствуют или их количество значительно уменьшено, полное нарушение биогенеза. 1- ая группа 4 Синдром Целльвегера ( СНЦ ) Инфантильная форма болезни Рефсума Неонатальная адренолейкодистрофия Точечная остехондродисплазия Ряд форм амавроза Лебера Гиперпипеколовая ацидемия Ризомиелическая точечная хондродисплазия ( РТОХД ) первого типа

целльвегероподобный синдром синдром недостаточности D- бифункциональных белков синдром псевдоцелльвегера 2- ая группа 5 Нарушение нескольких биологических функций, нормальное количество пероксисом в печени

Пероксисомные нарушения β - окисления : X- сцепленная адренолейкодистрофия ( Х - АЛД ) Недостаточность ацил - КoA - оксидазы Недостаточность D - бифункциональ ­ ных белков Недостаточность белка, транспортирующего стирол ( СТБ ) Недостаточность 2- метил - ацил - КоА - редуктазы ( МАК o АР ) Нарушения биосинтеза эфиросодержащих липидов : РТОХД второго типа РТОХД третьего типа Нарушения α - окисления фитановой кислоты : Болезнь Рефсума Нарушение детоксикации глиоксилата Гипероксалурия первого типа 3- ая группа 6 Нарушение одной биологической функции нормальное количество пероксисом в печени

7 ДЦЖКПристановая к-таФитановая к-та Спектр нарушений Целльвегера (СНЦ) N- * Ризомиелическая точечная хондродисплазия (РТОХД) первого типа NN- * Пероксисомные нарушения β-окисления X-сцепленная адренолейкодистрофия NN Недостаточность ацил-КoA-оксидазы NN Недостаточность D-бифункциональных белков NN- * Недостаточность белка, транспортирующего стирол (СТБ) NN- * Недостаточность 2-метил-ацил-КоА редуктазы (МАКoАР) NN- * Нарушения биосинтеза эфиросодержащих липидов РТОХД второго типа NNN РТОХД третьего типа NNN Нарушения α-окисления фитановой кислоты Болезнь Рефсума NN-N-N- * Нарушение детоксикации глиоксилата Гипероксалурия первого типа NNN

Фитановая кислота ( C 19 H 39 COOH ) Пристановая кислота Гексакозаеновая кислота ( С 26:0) Лигноцериновая кислота ( С 24:0) Бегеновая кислота ( С 22:0) C24/C22 C26/C22 8

9

10

11

Agilent 6850/

Shimadzu GS 17 A / GSMS - QP

14 Rf/DC Voltage

Материалом для исследования служит плазма, собранная аспирацией венозной крови как детей, так и взрослых пациентов. Для длительного хранения, чтобы исключить изменения уровней содержания исследуемых соединений, плазма замораживается. Большое число образцов плазмы пациентов, поступающих в лабораторию из различных клинических баз РГМУ, объединяются и тщательно перемешиваются. Для каждой серии анализа используются образцы, полученные из смеси плазмы одной выборки. 15

1) Кислотный гидролиз 2) Щелочной гидролиз 3) Экстракция гексаном 4) Упаривание эстрагента в токе гелия 5) Дериватизация ацилирующим реагентом MBTFA 16

17

Концентрации ДЦЖК в плазме контрольных образцов, в мкмоль / л. 18 Определяемые соединения Среднее значение5-95% доверительный интервал С22: С24: С26:00,790,45-1,32 C24 / С22 0,750,57-0,92 C26 / С22 0,010,01-0,02 Верхние эталонные значения фитановой и пристановой кислот для людей в возрасте 2- х лет и более : фитановая кислота – 10 мкмоль / л пристановая кислота – 3 мкмоль / л

19 Рис. 1. Уровни содержания жирной кислоты С 26:0 в плазме крови пациентов с различными наследственными пероксисомными заболеваниями и контрольной группы в мкмоль / л. С С 26:0 мкмоль / л

20 Рис. 2. Значение соотношения С 24/C22 для пациентов с Х - сцепленной адренолейкодистрофией и контрольной группы. С 24/ С 22

21 Рис. 3. Уровни содержания фитановой кислоты в плазме крови пациентов с болезнью Рефсума, РТОХД первого типа и контрольной группы в мкмоль / л. С Фитановой к - ты мкмоль / л

Нами показано, что концентрация длинноцепочечных жирных кислот в плазме контрольной группы не зависит от возраста в то время, как для фитановой и пристановой кислот корреляция прослеживается в определённой степени. Верхний эталонный уровень для фитановой кислоты, равен 10 мкмоль / л, тогда как для пристановой - 3 мкмоль / л для пациентов в возрасте от 2- х лет и более. Совместный анализ длинноцепочечных жирных кислот, пристановой и фитановой кислот является действенным методом для выявления больных с пероксисомными нарушениями, что особенно важно на ранних стадиях заболевания. 22