Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине. IgG.

Презентация:



Advertisements
Похожие презентации
ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ БЕЛКОВ. Белковая инженерия 6 Комплекс методов и подходов по изучению белков и получению белков с новыми свойствами ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ Создать.
Advertisements

Выполнила : Гарипова Лилия. Генная инженерия это метод биотехнологии, который занимается исследованиями по перестройке генотипов.
ПОДГОТОВИЛ: СТУДЕНТ ГР ХАЛМУМИНОВ Н.Д ПРОВЕРИЛ КАРАГАНДИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ КАФЕДРА ОБЩЕЙ ИММУНОЛОГИИ И АЛЛЕРГОЛОГИИ СРС.
Анализ генетических библиотек ! Как найти нужный клон ?
Лектор Творко М. С.. План лекции 1. Принципиальное строение антител- иммуноглобулинов 1. Принципиальное строение антител- иммуноглобулинов 2. Основные.
Содержание: Что такое «библиотека генов?» Этапы создания геномов библиотек Скрининг геномных библиотек Банк генов Способы получения фрагментов ДНК, на.
Репродукция вирусов. Только внедряясь в клетку-хозяина вирус может воспроизводить себе подобных, он подавляет процессы транскрипции и трансляции веществ,
Лекция 11. Молекулярные основы генетической коррекции и генотерапии.
Выполнила магистрант 1 курса ИЕН группы М-БХ-18 Охотина Мария Михайловна Клонирование ДНК.
Вирусы-неклеточная форма жизни. Вирусы (лат. virus яд)- неклеточные формы жизни, то есть не имеют клеточного строения. Они представляют собой переходную.
Сформировать знания о строении и жизнедеятельности вирусов во взаимодействии с клеткой. Уяснить как происходит жизненный цикл вирусов. Раскрыть особенности.
Проверочная работа ВИРУСЫ Внимание ! Слайды переключаются автоматически!
Технологические основы приготовления диагностических препаратов: диагностических сывороток, антигенов, бактериофагов и аллергенов.
Учение о бактериофагии. Бактериофаг – это вирус, способ- ный проникать в бактериальную клетку, репродуцироваться в ней, образуя многочисленное потомство,
Вирусы-неклеточная форма жизни. Вирусы (лат. virus яд)- неклеточные формы жизни, то есть не имеют клеточного строения. Они представляют собой переходную.
Трансформация у бактерий Pneumococcus (Гриффитс, 1928г.) In vitro Эвери, Мак-Леод, Мак-Карти 1944 ДНК-азная обработка.
Плазматическая мембрана Более 3 миллиардов лет назад возникли примитивные клеточные формы, окруженные мембранными оболочками Плазматическая мембрана –
ОГЛАВЛЕНИЕ: История История Основные понятия Основные понятия Наследственность бактерий Наследственность бактерий Плазмиды Плазмиды Наследственность вирусов.
ГЕНОМНЫЕ БИБЛИОТЕКИ И МЕТОДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИХ СОЗДАНИЯ.
Селекция микроорганизмов. Микроорганизмы Бактерии, микроскопические грибы, простейшие.
Транксрипт:

Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине. IgG

Гибридомная технология. Методика получения лимфоидных гибридом, позволяющая получать моноклональные антитела практически на любой антиген в необходимых количествах. Технология лимфоидных гибридом была разработана в 1975 году Мильштейном и Келлером 1984 году Келлер и Мильштейн были удостоены Нобелевской премии.

Гибридомная технология строилась на основе следующих разработок: 1) имелись линии миеломных клеток мышей balb/c (дефектные по некоторым ферментам метаболизма нуклеиновых кислот) 2) Линии этих раковых клеток-носителей, имели дефект гена кодирующий одтн из ферментов (тимидинкиназе (ТК) или гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазе (ГГФРТ)) 3) Технология слияния клеток с помощью вирусов (вирус Сендай) и полиэтиленгликоля Гибридомная технология.

Collect RNA Convert RNA to DNA PCR amplify antibody genes Heavy Chain Genes Light Chain genes Натуральные библиотеки антител - наивные библиотеки (naïve library) - иммунные библиотеки (immune library) Конструирование комбинаторной библиотеки Фаговый дисплей.

Фаговый дисплейФаговый дисплей E.coli TG1 pHEN2 Ori M13 AprApr P lacZ RBS ColE1 pIII Vh Vl His Линкер Ser(Gly 4 Ser) 2 AlaArgGlySerGly 4 Ser Конструирование комбинаторных библиотек

Фаговый дисплей. Фаг M13

Фаговый дисплей Получение индивидуальных одноцепочечных антител Vh Vl pIII TAG Vh Vl Несупрессорные штаммы E.coli: TAG Gln Одноцепочечное антитело ковалентно связано с белком рIII фаговой частицы amber Vh Vl pIII VhVl аминокислотастоп-кодон C-myc 6×His C-myc 6×His

Фаговый дисплей Фагмида Фаг-помощник Геном фага Инфицирование E.coli фагом-помощником

Фаговый дисплей Следующий раунд Элюция V V V V V Аффинная селекция (биопеннинг) Амплификация в E.coli антиген

Фаговый дисплей. Ренатурирование in vitro Функциональное scFv Агрегировавшие АТ Частичный лизис внешней мембраны Функциональное scFv Плазмида Цит. тельце включения Секреция Продукция антиген-связывающих фрагментов антител в E.coli