Kyiv, TRAINING WORKSHOP ON PHARMACEUTICAL QUALITY, GOOD MANUFACTURING PRACTICE & BIOEQUIVALENCE Валидация аналитических методов, используемых в исследованиях биоэквивалентности Presented by John Gordon, Ph.D. Consultant to WHO

Kyiv, Биоаналитический метод валидации Количественные определения лекарственных средств в образцах биологических сред, например в крови или плазме, играют существенную роль при оценке и интерпретации данных биоэквивалентности.

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Для получения достоверных результатов обязательно использовать аналитические методы, которые хорошо описаны и валидированы.

Kyiv, Разработка/ использование биоаналитического метода Стандартный препарат сравнения Разработка процедуры метода Принятие валидированного метода для использования в повседневной практике

Kyiv, Сравнительные (референтные) стандарты Стандарты калибровки / Образцы для контроля качества Удостоверенная референтность –Известная тождественность –Известная беспримесность По возможности следует применять одни и те же референтные стандарты

Kyiv, Разработка метода Хроматографический анализ –например, газовая хроматография, жидкостная хроматография Лигандообменные методы –например, изотопное иммунологическое обследование (radioimmunoassay RIA)

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Валидация метода должна включать –Аккуратность –Точность –Чувствительность –Специфичность –Устойчивость –Стабильность

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Точность Степень близости между установленной и истинной оценками. Среднее значение критерия приемлемости (допустимости) составляет 15% отклонения от истинного значения. Для LOQ допустимо отклонение 20%.

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Точность Близость результатов повторных оценок выборки. Критерий допустимости 15% CV. Для LOQ допустимо отклонение 20%.

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Чувствительность Предел количественного анализа (the limit of quantitation LOQ) это минимальная концентрация, которая может быть измерена с надлежащей правильностью и точностью.

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Калибровочная кривая Внедрение достаточного количества калибровочных стандартов –Обычно 6 – 8 стандартов, отличных от нуля –«Чистый» образец –Нулевой образец –Нижний предел количественных колебаний (Lower Limit of Quantification LLOQ) Польза от надлежащей статистики

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Специфичность (селективность) Способность метода измерить только то, что предусмотрено для измерения, в присутствии других составляющих образца. Чистый образец биологической среды следует исследовать на предмет пересекающихся помех определения концентрации.

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Устойчивость Определительная эффективность аналитического процесса, выраженная в долевом соотношении к известному количеству анализируемого вещества, достигается с помощью отбора образцов и последующих шагов метода. Устойчивость не должна быть 100%-ой, но уровень устойчивости аналитического метода должен соответствовать внутреннему стандарту.

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Стабильность Стабильность анализа биологических сред –Отбор образцов –Хранение образцов –Анализ образцов

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Стабильность Стабильность при замораживании Краткосрочная стабильность Долгосрочная стабильность Стабильность после приготовления Стабильность растворов при хранении

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Точность разбавления Подтвердить способность образцов к разбавлению, превышающему верхний предел количественных колебаний (Upper Limit of Quantification ULOQ) Предел количественного анализа (LOQ) Правильность и точность

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Дополнительные соображения для лигандообменных исследований Перекрестная реактивность Влияния среды Взаимосвязи, определяемые уровнем концентрации

Kyiv, Анализ клинических образцов Однократное определение калибровочных стандартов Калибровочная кривая для каждого раунда анализа Экстраполяция выше или ниже калибровочного уровня не допускается.

Kyiv, Анализ клинических образцов Контроль качества (Quality control QC) Не меньше трех концентраций –Низкая концентрация –Средняя концентрация –Высокая концентрация Двойные определения 4 из 6 образцов для QC должны быть 15% номинального значения; два оставшихся не должны иметь одинаковую концентрацию

Kyiv, Анализ клинических образцов Повторный анализ выборки Четкие СОПы и критерии приемлемости Причины повторного анализа –Аналитического характера –Сложная фармакокинетика Нехватка образцов

Kyiv, Стандартные операционные процедуры Полное письменное описание СОПов –Контроль и обеспечение качества –Должны быть охвачены все аспекты, в т.ч. Ведение учета Обеспечение безопасности Цепочка обеспечения выборки Ремонт выборки Аналитические инструменты Процедуры для контроля качества и верификации результатов

Kyiv, Полная / Частичная валидация Полная валидация –В ходе разработки метода Частичная валидация –Обмен между лабораториями –Изменения в инструментарии / программном обеспечении –Небольшие изменения в процессе обработки выборки

Kyiv, Валидация биоаналитического метода Полезные ссылки: FDA Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation (May 2001) ( Опубликованные стендовые доклады: Shah, V.P. et al, Pharmaceutical Research: 1992; 9: Shah, V.P. et al, Pharmaceutical Research: 2000; 17: