БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ биологический факультет кафедра биохимии Исследование окислительной модификации флаволигнанов микросомальной и митохондриальной клеточными фракциями Дипломная работа Васянович Юлии Викторовны Научный руководитель: канд. биол. наук, доцент Кукулянская Т.А. Минск 2010

Содержание Актуальность исследования Цели и задачи Обзор литературы Методы исследования Результаты Выводы

Актуальность темы С каждым годом усиливается загрязнение ксенобиотиками окружающей среды, а следовательно, возрастает их поступление в организмы растений и животных. Это серьезно угрожает здоровью и даже жизни всех живых существ, включая человека, так как многие ксенобиотики способны повреждать клетки и вызывать мутации. Однако организм располагает эффективным механизмом инактивации и выведения чужеродных веществ. Этот процесс носит название биологической трансформации ксенобиотиков, и за его начальные этапы ответственна монооксигеназная система цитохрома Р450. Природные соединения полифенольной природы, флавоноиды, имеют большое физиологическое значение для человека и животных, так как способны активировать работу системы биотрансформации чужеродных соединений.

Цель дипломной работы: изучение окислительной модификации флавоноидов микросомальной и митохондриальной фракцией печени крыс. Задачи дипломной работы: 1) изучение возможности окислительной модификации флаволигнанов Расторопши пятнистой – силимарина и силибинина – микросомальной и митохондриальной фракцией печени крыс; 2) исследование влияния внутрибрюшинного введения силимарина на интенсивность окислительной модификации флаволигнанов; 3) исследование влияния внутрибрюшинного введения силимарина на интенсивность накопления продуктов перекисного окисления липидов в митохондриальной фракции печени крыс; Цели и задачи

Выделение митохондриальной фракции печени крыс Выделение микросомальной фракции печени крыс Определение содержания белка в микросомальной фракции печени крыс по Петерсону Определение активности окислительных систем микросомальной и митохондриальной фракции печени крыс Внутрибрюшинное введение силимарина Определение содержания ТБК-активных продуктов в митохондриальной фракции печени крыс Методы исследования

1) НАДФН-цитохром P-450 редуктаза: терминальный участок НАДФН-зависимой цепи переноса электронов ; 2) цитохром Р-450: начальное звено цепи переноса электронов; 3) фосфолипиды: гидрофобное окружение ферментов или их фрагментов. Обзор литературы I. Строение микросомальной системы биотрансформации

II. Схема процесса биотрансформации

Функции флавоноидов: 1) взаимодействие с системой цитохрома Р450 и снижение уровня биоактивации проканцерогенных веществ в канцерогенные; 2) непосредственное ингибирующее воздействие на рост опухолевых клеток; 3) гепатопротекторное действие. III. Флавоноиды: структура и функции Общая структура молекулы флавоноида

Результаты I. Окисление силибинина

II. Окисление ТМБД

III. Окисление силимарина

IV. Содержание ТБК-активных продуктов 1 – спонтанное ПОЛ (контроль); 2 – спонтанное ПОЛ (после введения силимарина in vivo); 3 – индуцированное Fe/аскорбатной системе ПОЛ (контроль); 4 - индуцированное Fe/аскорбатной системе ПОЛ (после введения силимарина in vivo).

Выводы 1) Установлено, что силимарин и силибинин подвергаются окислительной модификации в присутствии микросомальной и митохондриальной фракций печени крыс. Внесение в реакционную смесь перекиси водорода приводило к повышению интенсивности процесса микросомального окисления силимарина. 2) В присутствии микросомальной и митохондриальной фракций печени крыс также происходит окислительная модификация 3,3,5,5-ТМБД. 3) Окисление силимарина и силибинина микросомальной и митохондриальной фракциями печени крыс in vitro после внутрибрюшинного введения силимарина (2 мг/кг массы тела) происходит с большей интенсивностью по сравнению с контролем.

4) Окислительная модификация ТМБД микросомальной и митохондриальной фракциями печени крыс in vitro после внутрибрюшинного введения силимарина (2 мг/кг массы тела) происходит с той же интенсивностью, что и в контроле. 5) Установлено, что интенсивность перекисного окисления липидов в митохондриальной фракции печени крыс снижается после внутрибрюшинного введения силимарина (2 мг/кг массы тела): при введении силимарина содержание ТБК-активных продуктов при спонтанном перекисном окислении липидов падает в 2 раза по сравнению с контролем; при индукции перекисного окисления липидов в Fe/аскорбатной системе содержание ТБК-активных продуктов возрастает в 9 раз, а после введения силимарина – в 8 раз по сравнению с контролем

Спасибо за внимание! Exit