Работу подготовила: Романова Екатерина Алексеевна Ученица школы «АШ» класса Научный руководитель: Матвеева Татьяна Валерьевна, Калиничева Наталья Юрьевна. Место проведения: Лаборатория генной и клеточной инженерии растений Санкт-Петербургского государственного университета. Новые подходы к изучению филогении растения рода Linaria

Актуальность темы: Бурное развитие молекулярной филогенетики на протяжении последних двух десятилетий дало в руки ботаников новые методы для выявления родственных связей между групп растений. Филогения входит как необходимая составная часть почти в каждый отдел научного курса.

Цель работы: Знакомство с молекулярными ДНК маркерами, используемыми для филогенетических исследований растений, на примере рода Linaria. Задачи: Знакомство с литературой; Освоение метода ПЦР; Изучение гель электрофореза; Изучение полиморфизма Т-ДНК маркера двух видов льнянок

Материалы и методы исследования Материалы. Материалами в моей работе служили гербарий двух видов льнянок Linaria hepatica и Linaria incompleta. Методы: Работа состояла из письменной и экспериментальной частей. Экспериментальная часть включала материал (ДНК, выделенная из гербария L. hepatica и L. incompleta), методы (ПЦР, электрофорез).

Теоретическая часть работы Полимера́зная цепна́я реа́кция (ПЦР)- экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий многократно амплифицировать выбранный фрагмент ДНК без помощи рестриктаз, векторов или клетки-хозяина. Кэри Муллис год Полимеразная цепная реакция

Проведения ПЦР ДНК-матрица; два праймера; дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T); термостабильная ДНК-полимераза; ионы Mg2+; буферный раствор

Детекция результатов ПЦР Метод гель-электрофореза Наиболее распространенным до недавнего времени являлся метод электрофореза, основанный на разделении молекул ДНК по размеру

Агробактериальная трансформация Ti-плазмида Т-ДНКхромосомы Агробактерия Ti-плазмида Ген вирулентности Цитокинин Опин ДНК Точка начала репликации Ауксин

Растительная клетка Agrobacterium tumefaciens Ti-плазмида хромосома Т-ДНК Agrobacterium tumefaciensAgrobacterium rhizogenes

Трансформация табака Nikotiana tabakum штаммами Agrobacterium rhizogenes Бородатый корень

В геномах растения может быть фрагмент т-ДНК. Такое описано в пределах рода Linaria. Linaria incompletaLinaria hepatica В геномах растений Linaria обнаруживаются фрагменты Т-ДНК A.rhizogenes

Практическая часть работы. Выделение геномной ДНК Оборудование: водяная баня(нагретая до +56°С),,дозаторы, центрифуги,фарфоровые ступки и пестики. Расходные материалы: микроцентрифужные пробирки на 1,5 мл,наконечники для дозаторов на 1мл,200мкл. Проведение ПЦР Оборудование: ДНК-амплификатор, дозаторы Расходные материалы: микроцентрифужные пробирки на 0,5 мл, наконечники для дозаторов на 10 и 200 мкл. Проведение гель-электрофореза. Оборудование: камеры для электрофореза, источники тока, дозаторы, трансиллюминатор. Расходные материалы: наконечники для дозаторов на 10 и 200 мкл.

Подведение итогов В моей работе я пришла к выводу, что мутация в ДНК растения Linaria, т.е. выпадение нуклеотидов, имело место не зависимо. Т.е. скорей всего, это были независимые события, это эволюционно не зависимая группа видов.

Список использованной литературы. imeraznaya-tsepnaya-reaktsiya-istoriya- vozniknoveniya&Itemid=3 Матвеева Т.В.,Богомаз Д.И.,Лутова Л.А. Малый практикум по генной инженерии –СПБ: Реноме, с. : ил. technology.ru/files/images/metodichki/OsnoviPCR.pdf Van Larebeke N., Engler G.,Holsters M.,et al. Large plasmid in A. tumefaciens essential for crown gall-in-ducing ability // Nature V.252. p / Pavlova, O. A., Matveeva, T. V., and Lutova, L. A Characteristics of the ability of Linaria plants to Agrobacterium mediated transformation. Page 553 in: Abstr. Fifth Cong. Vavilov Soc. Genet. Breed. (VOGiS), Part 1, Moscow.