Лекция Возбудитель бруцеллеза План 1.Морфология возбудителя 2. Культуральные и биохимические свойства 3.Диагностика и профилактика бруцеллеза Здоровье животных в ваших руках

Возбудитель бруцеллеза План 1.Морфология возбудителя 2. Культуральные и биохимические свойства 3. Диагностика и профилактика бруцеллеза

Возбудитель был впервые выделен Брюсом в 1886 году БРУЦЕЛЛЕЗ – хроническое инфекционное заболевание животных и человека, проявляющееся абортами, эндометритами, задержанием последа, орхитами, артритами, рецидивирующей лихорадкой, у лошадей – преимущественно бурситами в области холки и воспалением связок затылочного сустава. У человека болезнь характеризуется затяжной лихорадкой, поражением суставов, печени и других внутренних органов. Человек заражается чаще всего через сырое молоко и во время ухода за больными животными.

Возбудитель бруцеллеза - бактерии рода Brucella: род Brucella включает 6 видов: В. melitensis (три биовара) - основной хозяин овцы и козы (патогенен для человека, при миграции его на крупном рогатом скоте и свиней эти животные становятся источником заболевания людей); В. abortus (девять биоваров) - основной хозяин крупный рогатый скот; В. suis (четыре биовара) - основной хозяин свиньи, а также северные олени и зайцы; В. ovis - инфекционный эпидидимит баранов; основной хозяин овцы; В. neotomae - основной хозяин лесные крысы; В. canis - основной хозяин собаки.

Морфология и размеры Мелкие коккобактерии или палочки. Располагаются в препарате при микроскопии одиночно, реже парами, короткими цепочками. Спор не образуют. Вирулентные штаммы образуют капсулу. Неподвижны. Грамотрицательны. При окраске по Козловскому бруцеллы красные, другие микроорганизмы и фон – зеленые. кокковидные бактерии имеют размеры: длина 0,5...1,5 мкм, ширина - 0,5…0,7 мкм, без жгутиков

В последние годы часто выделяют атипичные L-формы возбудителя бруцеллеза. Это измененные формы, которых выделяют в виде мелких зерен, шаровидных тел. L-формы обладают способностью к реверсии (т.е. переходить в типичные, патогенные формы, вызывающие заболевания). Атипичные формы

Специальные способы окрашивания возбудителей бруцеллеза по методу Козловского и Стампа Окраска по методу Козловского: препарат окрашивают 2%-м водным раствором сафранина 2 мин, промывают водой, докрашивают 1%-м водным раствором малахитовой зелени 1 мин, промывают водой. Микроскопическая картина: бруцеллы красные, остальные бактерии зеленые. Окраска по методу Стампа: фиксированный на пламени мазок окрашивают фуксином Пфейффера 10 мин, промывают водой, обрабатывают 0,5%-м водным раствором уксусной кислоты 30 с, препарат промывают водой и докрашивают 1%-м водным раствором метиленового синего с. Микроскопическая картина: бруцеллы красные, другие бактерии синие.

Устойчивость возбудителей бруцеллеза Бруцеллы спор не образуют. Однако вирулентные штаммы возбудителя бруцеллеза образуют капсулу. Неподвижны. Очень устойчивы в высушенных субстратах (сохраняются годами). При низких температурах (в почве на снегу) бруцеллы сохраняются в течение 4-5 мес. Длительное время могут сохранятся в пищевых продуктах: - в охлажденном молоке - 45 сут., - в масле - 67 сут., - в мороженом мясе - 60 сут. Прямой солнечный свет в зависимости от интенсивности убивает бруцелл в период от нескольких минут до 3-4 часов, УФЛ минут. При воздействии 1-3 % фенола - через 1 час, 1-2 % формалина - 3 часа, 5 % свежегашеной извести - 2 часа.

Лабораторная диагностика бруцеллеза Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологических и серологических исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах. Материал для исследования В лабораторию направляют: - пробы крови (сыворотки) для серологических исследований, - абортированный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, - кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов -семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло и др.), объекты внешней среды. Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки из материала окрашивают по Граму и одним из специальных методов (по Козловскому, Стампу и др.).

Морфология Бруцеллы

Культуральные свойства Возбудитель бруцеллеза – микроаэрофил Оптимальная температура – °C, Оптимум рН среды 6,8-7,2

Swine brucellosis.

Питательные среды Возбудители бруцеллеза растут на специальных питательных средах: мясо-пептонный агар и бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый агар и бульон, картофельный агар, эритрит-агар, сывороточно-декстрозный агар и др. Картофельный агар готовят на отваре картофеля, глюкозу и глицерин добавляют в среды соответственно в количестве 1 % и 2-3 %. Эритрит-агар содержит вещество (эритрит), стимулирующее рост бруцелл. В состав сывороточно-декстрозного агара помимо обычной питательной основы входит 10 % сыворотки крови и 1 % декстрозы. Некоторые виды бруцелл растут при повышенном содержании в атмосфере оксида углерода (IV) (В. abortus, В. ovis). Когда неизвестно, каким видом бруцелл заражен исследуемый материал, половину посевов инкубируют в обычной атмосфере, другую - в атмосфере, содержащей 10-15% оксида углерода (IV). Посевы культивируют в течение 30 сут, периодически просматривая. Рост бруцелл чаще появляется на 7-10-е сутки, иногда позже.

Характер роста возбудителя На плотных средах возбудитель формирует мелкие, прозрачные круглые с ровными краями, гладкой поверхностью, с голубоватым оттенком колонии (S-форма), возможно появление шероховатых колоний (Л-форма). По мере старения колонии мутнеют и за счет пигментообразования могут темнеть. На жидких питательных средах рост бруцелл проявляется равномерным помутнением среды, образованием голубоватого пристеночного кольца, позднее формируется небольшой осадок.

Бруцеллы - факультативные внутриклеточные паразиты, размножаются преимущественно внутри клеток РЭС

Выделение культур из патматериала и биохимические свойства Выделение культур из патологического материала удается в среднем через 0,5-1 месяц; лабораторные культуры развиваются через 1-2 суток. Для выделения культуры бруцелл из загрязненных посторонней микрофлорой патологических материалов пользуются этими же средами после добавления к ним антибиотиков, угнетающих постороннюю микрофлору и не препятствующих росту бруцелл. На агаре бруцеллы образуют мелкие S-колонии, бесцветные, круглые, выпуклые с гладкой поверхностью, прозрачные с голубоватым оттенком (со временем переходят в R-формы). На жидких средах - равномерное помутнение среды. Старые - осадок, поднимающийся при встряхивании в виде косички. Биохимические свойства Нет протеолитических ферментов, не разжижают желатину и не свертывают молоко. Не обладают гемолитической активностью. Продуцируют каталазу. Сахаролитическая активность слабая. Br. abortus и Br. suis выделяют сероводород, Br. melitensis - нет (на обычных питательных средах).

Вид бруцелл Био- вар Потребность в оксиде углерода (IV) Выделение сероводо- рода Рост на средах с красками Агглютинация моноспеци- фическими сыворотками ТионинфуксинАМР В. melitensis В. abortus1х* х х х х х х В. suis1-++х х++- В. ovis+-+х--+ В. neotomae В. canis--+х--+ Дифференцирующие признаки видов и биоваров бруцелл

Исследователи бруцеллеза

Бруцеллез у свиней и овец

Бруцеллез у человека

Бруцеллез (Поражения суставов, бруцеллез кожи)

Бурсит при бруцеллезе у лошади

Клинические признаки при бруцеллезе у крупного рогатого скота

Лабораторная диагностика

Серология бруцеллеза

Профилактика и лечение бруцеллеза

Специфическая профилактика Серологическая диагностика 1.Роз-бенгал проба (0,3 мл сыв-ки+0,03 бруц. антигена) 2.Кольцевая реакция агглютинации с молоком 3.Пробирочная реакция агглютинации: -сыворотку крови крс, лошадей, верблюдов в разведении 1:50 -1:400 (1:100 и выше +; 1:50 –сомнительный результ); овец, коз, свиней, буйволов,оленей, собак 1:25 и выше; пушных зверей -1:10 и выше (1:50+; 1:25 сомнительный результат) При массовых исследованиях в первых двух разведениях. 4.РСК

Биопрепараты 1.Вакцина из штамма Brucella abortus Живая сухая вакцина из слабоаггютиногенного штамма 82 3.Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК,РДСК 4.Антиген для колцевой РА с молоком, окрашенный гематоксилином 5.Роз-бенгал антиген, окрашенный бенгальским розовым 6.Флюоресцирующая бруцеллезная сыворотка 7.Позитивная бруцеллезная сыворотка 8Аллерген-бруцеллин (для определения ГЗТ)

Медицинское обследование работников животноводства

Ежеквартальная динамика заболеваемости по бруцеллезу КРС за г г; М±2м=1785±390 ( ) ГодыКварталы IIIIIIIV По данным ИАЦ Россельхознадзора

Динамика регистрации первичных неблагополучных пунктов по бруцеллезу КРС, ежеквартально за г г; М±2м=29,0±8,0 (37,0-21,0) ГодыКварталы IIIIIIIV По данным ИАЦ Россельхознадзора

Ежеквартальная динамика заболеваемости по бруцеллезу МРС за г г; М±2м=300,0±102,0 (402,0-198,0) ГодыКварталы IIIIIIIV По данным ИАЦ Россельхознадзора

Динамика регистрации первичных неблагополучных пунктов по бруцеллезу МРС за г г; М±2м=7,0±2,4 (9,4-4,6) ГодыКварталы IIIIIIIV По данным ИАЦ Россельхознадзора

Ситуация: эндемическая (заболеваемость среди с/х ж-х на два порядка выше, чем заболеваемость людей) Пики регистрации неблагополучия среди с/х животных приходятся на 2 квартал года (выгон скота на пастбища и проведение массовых исследований) Очаговая инцидентность (п = 6) КРС = 61,5; МРС = 42,2 Заболевание регистрировалось во всех Федеральных округах (кроме СЗФО); в общей сложности новых неблагополучных пунктов среди КРС – 144, среди МРС - 58 Эпидемические пороги не превзойдены. Тренды по неблагополучию и заболеваемости возрастающие Видовая дифференциация Br. abortus, Br. melitensis, Br. suis явно недостаточна и не отслеживается по отчётным документам Бруцеллез (по данным ИАЦ Россельхознадзора )

Бруцеллез ( ИАЦ Россельхознадзора) Бруцеллез: - риск распространения заболевания остается «значительным», особенно в южных и юго-восточных регионах страны, а так же в популяции северных оленей и при завозе овец из южных регионов;