1© ЗАО «Биоград», 2012г. к. х. н. Дробченко С.Н., д. м. н. Рищук С.В., Масленникова И.И. ЗАО «Биоград», Северо-западный медицинский университет им. И.И. Мечникова, ООО «Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БЕСПРИБОРНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА HTLV ДЛЯ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ КЛЕТОЧНЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 2 Т-лимфотропный вирус I типа (HTLV-I) может приводить к неопластической трансформации клеток человека и к двум тяжелым заболеваниям: Т-клеточному лейкозу-лимфоме взрослых и тропическому спастическому парапарезу. В отличие от ВИЧ, который может передаваться с бесклеточным материалом, Т-лимфотропный вирус человека ассоциирован с клетками и передаётся при переливании клеточных компонентов крови.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 3 В отличие от онкогенных ретровирусов животных, Т-лимфотропный вирус человека типа 1 не содержит онкогенов, а его трансформирующие свойства связывают с белком Tax. Белок Tax - единственный вирусный белок, обычно присутствующий в опухолевых клетках.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 4 Инфицирование HTLV пожизненное, поэтому во многих развитых странах обследование доноров на HTLV является обязательным. В рекомендациях ВОЗ от 2009 года (Screening Donated Blood for Transfusion-Transmissible Infections, Recommendations) указано обязательное обследование на HTLV доноров, происходящих из эндемичных регионов, или имевших половые контакты с лицами из этих регионов. В США, в Японии, в 11 странах Евросоюза, включая Великобританию и Францию, проводится обязательный скрининг донорской крови и ее компонентов на HTLV. При этом в России до сих пор отсутствуют требования по обязательному обследованию донорской крови на HTLV.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 5 Приказ Минздравсоцразвития РФ 325 Приказ Минздравсоцразвития РФ 325 от 25 июля 2003 года «О развитии клеточных технологий в Российской Федерации» обязывает банки стволовых клеток проводить тестирование на антитела к HTLV I и II при поступлении образца. Европейские стандарты безопасности приготовления и использования компонентов крови (2001 г.) также обязывают исследовать образцы на наличие антител к HTLV.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 6 Тестирование на антитела к HTLV за годы КДЛ тест и Гемотест, Москва исследовано образцов пуповинной крови рожениц Покровский банк стволовых клеток, Санкт-Петербург исследовано образцов пуповинной крови Югорский НИИ клеточных технологий, Ханты- Мансийск исследовано 660 образцов периферической плазмы рожениц ККБ1 им.Очаповского, Краснодар исследовано 160 образцов плазмы. Инвитро, Санкт-Петербург исследовано 4860 образцов крови пациентов, в том числе от онкологических больных и наркозависимых.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 7 ИФА тест-система ИммуноКомб HTLV I&II Использована технология последовательной сорбции на твердую фазу – Гребень вирусоспецифических рекомбинантных антигенов оболочки и ядра (gp21, gp46 и p19, p24) HTLV I, II Чувствительность: 100% Специфичность: 97% Исследуемый образец: сыворотка, плазма или цельная кровь Количество образца: 10 мкл Время анализа: 37 минут Количество определений: 36 определений

© ЗАО «Биоград», 2012г. 8 Схема постановки анализа 6. Результат анализа в виде окрашенных точек. Верхняя точка: внутренний контроль. Нижняя точка и (или) средняя точки появляются в случае наличия - инфекции. 1. Для индивидуального тестирования гребешок можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. 2. В ряд А ванночки вносятся образцы (сыворотка, плазма или цельная кровь) и контроли. 3. Гребешок вставляется в ряд А и инкубируется (реакция антиген-антитело). 4. Гребешок перемещается из ряда в ряд ванночки в соответствии с инструкцией (промывки и связывание с конъюгатом). 5. Цветная реакция в ряду F.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 9 Чувствительность ИФА тест-системы ИммуноКомб II HTLV I&II Чувствительность тест-системы ИммуноКомб II HTLV I&II составила 100%

© ЗАО «Биоград», 2012г. 10 Специфичность ИФА тест-системы ИммуноКомб II HTLV I&II Специфичность тест-системы ИммуноКомб II HTLV I&II составила 97%

© ЗАО «Биоград», 2012г. 11 Результаты испытаний ИФА тест- системы ИммуноКомб II HTLV I&II ИммуноКомб II HTLV I&II выявил все положительные образцы. Все подтвержденные отрицательные образцы, так же определялись как отрицательные в тесте ИммуноКомб II HTLV I&II. ИммуноКомб II HTLV I&II определяет HTLV- 1 так же хорошо, как и HTLV-2. ИммуноКомб II HTLV I&II не дает перекрестных реакций с образцами, содержащими ВИЧ и другие антитела. ИммуноКомб II HTLV I&II достоверно определяет НTLV в зонах низкого и высокого уровня распространенности.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 12 Результаты тестирования на наличие антител к HTLV I&II В образцах пуповинной и периферической крови рожениц положительных результатов выявлено не было, данные образцы предназначались для заготовки стволовых клеток. В образцах крови пациентов из Северо-Западного региона, было выявлено 9 положительных результатов, из которых 6 подтвердилось в иммуноблоте. Результаты тестирования показали, что антитела к HTLV I&II выявляются у 0,03% всех обследованных. Если рассматривать только группу пациентов из Северо- Западного региона, то процент выявляемости HTLV I&II составит 0,1%.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 13 Т-лимфотропный вирус человека широко распространен в юго-западной части Японии. Очаги инфекции обнаружены и в других странах Востока (например, на Тайване), в странах Карибского бассейна, включая северо-восточную часть Южной Америки, в Центральной Африке, Италии, Израиле, в Арктике, в юго- восточной части США. Инъекционные наркоманы относительно часто заражаются не только ВИЧ, но и Т-лимфотропным вирусом человека типа 1 и 2. В некоторых группах инъекционных наркоманов в США антитела к Т- лимфотропному вирусу человека типа 1 или 2 были выявлены более чем у 10% обследованных.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 14 Близость дальневосточных районов России к эндемичным по HTLV регионам (Японии), а также увеличение миграции населения, изменения в сексуальном поведении, диктуют необходимость обследования населения России на Т-лимфотропный вирус человека типа 1 и типа 2. Для чего необходимо обследование на Т- лимфотропный вирус, если данный вирус неизлечим: для выявления серопозитивных носителей, которые не должны становиться донорами и для предотвращения дальнейшего распространения инфекции. Использование тест-систем ИммуноКомб II HTLV I&II для этих целей позволит быстро и надёжно определить инфицированность HTLV-I и HTLV-2.

© ЗАО «Биоград», 2012г. 15 Приказ Минздравсоцразвития 325 от «О развитии клеточных технологий в Российской Федерации» Образец стволовых клеток может тестироваться на бесприборных ИФА тест- системах ИммуноКомб на наличие в нём: антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, антигена ВИЧ-1, антител к HTLV I и II, антител к HBcAg, антигена HBs, антител к HCV, антител к CMV, антител к Toxoplasma gondii

16© ЗАО «Биоград», 2012г. ЗАО «Биоград» 19 лет в России ! Адрес:197101, г. Санкт- Петербург, Петровский пр., д. 14, 19-Н тел./факс: (812) , (многоканальные)

© ЗАО «Биоград», 2012г. 17 Спасибо за внимание.