Опыт использования наборов «RecomBlot HCV IgG» Mikrogen Diagnostik(Германия) в качестве подтверждающего теста в диагностике HCV инфекции. Гасилова Наталья Александровна Врач КДЛ «ИНВИТРО-Москва» ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО»

ВИРУС ГЕПАТИТА С Семейство Flaviviridae Геном РНК, 9500 н Размер вируса - 50нм Поверхностный гликопротеин Е1 / Е2 Линейная РНК Нуклеокапсид ( core )

с ore E1 E2 / NS1 NS2NS3NS4NS5 СТРУКТУРНЫЕ НЕСТРУКТУРНЫЕ СТРУКТУРА ГЕНОМА HCV NS3- белок с активностью протеазы, хеликазы NS4- неизвестная функция NS5 – ферменты, в том числе РНК полимераза Core –белки нуклеокапсида Е1, Е2 – белки оболочки

Диагностика ВГС Иммуно- химическая Анти ВГС сумм. Анти-ВГС IgG Анти ВГС IgM Core Ag Молекулярно- биологическая РНК ВГС кач. РНК ВГС кол. (вирусная нагрузка) Генотипирование Определение устойчивости к препаратам ( прямое секвенирование)

ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ В ДИАГНОСТИКЕ ВГС, ВГВ. Приказ 322 от г. МЗ РФ «О применении в практике здравоохранения иммуно-ферментных тест-систем для выявления антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти ВГС) в сыворотке крови человека» Обязательное использование подтверждающих тестов при выявлении положительного результата Использовать для подтверждения положительного результата анти ВГС тест-системы содержащие полный спектр структурных и неструктурных белков Чувствительность тест-систем для определения HBsAg не менее 0,1 нг/мл Список тест-систем допущенных к использованию на территории РФ (прошли сравнительные испытания)

ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ СКРИНИНГА анти ВГС (total) Национальный институт здоровья США консенсус 2002 г. – Высокая специфичность и чувствительность тестов ИФА (99%), позволяет отказаться от проведения подтверждающих тестов в группах риска – Отрицательный результат является достаточным у иммунокомпетентных лиц для исключения ВГС – Ложноположительные результаты возможны у лиц с аутоиммунной патологией, рекомендуется проведение ПЦР – RIBA полезное дополнение при исследовании донорской крови

СХЕМА ПОДТВЕРЖДЕНИЯ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ анти ВГС (total) в практике «ИНВИТРО» Высоколожительный результат анти ВГС (total), с S/CO > 5 на « Architect» Abbott, подтверждается повторным исследованием методом ИФА Слабопожительный результат анти ВГС (total), с S/CO < 5 подтверждается методом ИБ

ИММУНОБЛОТ (иммунный блоттинг) : относится к методам серологической диагностики. Этот метод позволяет определять антитела различных классов (IgG/IgM) к отдельным антигенам возбудителя (вирусы, бактерии, простейшие), а не суммарно, как это происходит при других методах (ИФА, РНГА, РПГА и т.д.)

Преимущества метода ИБ перед ИФА : Более специфичный метод, но менее чувствительный. Позволяет сделать прогноз развития инфекции, в зависимости от наличия антител к тем или иным белкам ( при ВИЧ : полоса к р24, начало инфекции) Позволяет косвенно судить о ложноположительном результате в ИФА при ВГС : наличие только полос к NS5, признак ложноположительного результата. Предположительно судить о времени возникновения инфекции (токсоплазмоз)

«Recom Blot HCV IgG 2.0» Mikrogen Diagnostika, Германия

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ИБ

Оценка результата иммуноблота для метода «Recom Blot HCV IgG 2.0» +/-+ или ++ NS303 Хеликаза03 NS NS404 Core Ag58 Сумма балловоценка 10положительный

РЕЗУЛЬТАТ ИММУНОБЛОТА ВГС Положительный (комм: Рекомендуется выполнить тест 321 – РНК ВГС кач.) Сомнительный (комм: Рекомендуется повторить через 30 дней) Отрицательный

Программа «RecomScan» Mikrogen Diagnostik, Германия обеспечивает следующие этапы : Сканирование и сохранение протокола иммуноблота в виде файла. Оценка наличия полос, в сравнении с контрольным стрипом Оценка интенсивности окрашивания полос в баллах Выдача заключения согласно сумме баллов Возможность электронного сохранения результата и автоматической передачи результата в ЛИС

АППАРАТ BeeBlot Bee Robotica Ltd, U.K.

«Recom Blot HCV IgG 2.0» в практике «ИНВИТРО» с 2009 г. Исследовано более 6000 положительных в скрининге ВГС пациентов Положительный результат скрининга подтвержден методом иммуноблота в 72 % Выявлено ложноположительных результатов– 28 %

КП (ИП) = ОПобр./ ОПкрит. Коэффициент позитивности – позволяет увеличить информативность лабораторного сообщения КП (ИП)-соотношение оптической плотности исследуемого образца к критической оптической плотности (cut off) ПК> 9, вероятность ВГС-инфекции около 92,6% КП

Зависимость частоты ложноположительных результатов скрининга ВГС от КП в практике «ИНВИТРО»

Неопределенный результат иммуноблота В группе «неотрицательных результатов» ИБ составил - 42 % Возможен у лиц с недавней инфекцией ВГС Встречается у лиц в прошлом имевших контакт с ВГС, но не заболевшим. Может рассматриваться, как ложноположительный результат в группе лиц с низким риском ВГС (аутоиммунная патология, другие вирусные инфекции)

Благодарю за внимание!