ПРИНЦИПЫ ОРГАНИЗАЦИИ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА

Принцип контактного взаимодействия Эндотелиальный покров сосудов – гладкая текучая поверхность. Целостность эндотелия – основное условие несвертывания крови в сосудистом русле Субэндотелий организован полимерными белками: коллагеном, эластином, имеющими свойство твердого тела. Субэндотелий обладает выраженным тромбогенным эффектом

Принцип избыточности В норме скорость коагуляции практически не определяется концентрацией факторов, так как они присутствуют в избытке и процесс идет в состоянии насыщения.

Принцип активации Путем ограниченного протеолиза из неактивного предшественника образуются активный (диагностически значимый) пептид и активированный фермент

Принцип сборки комплексов На поверхность твердой фазы (адгезированные тромбоциты, поврежденные клетки, бактерии и др.) прикрепляется (интернализуется крупный кофакторный белок), который организует место контакта факторов свертывания. Факторы действуют друг с другом по принципу комплементарности

Принцип каскадного усиления сигнала Каждый предыдущий компонент системы свертывания активирует несколько последующих.

Принцип обратной связи Принцип обратной связи на примере активации тромбином V и VIII факторов и инактивации Vа и VIIIа факторов гемостаза

Принцип конечного звена Цикл компонентов гемостаза. Тромбоциты образуются в процессе тромбоцитопоэза в костном мозге, освобождаются в систему циркуляции, где потребляются или удаляются

Принцип защитного ингибирования Транспортный С4b-связывающий белок (С4ВР) доставляет протеин S (РS), участвующий как ко-фактор в формировании комплексов на фосфолипидной мембране. Высвобождение РS сопровождается быстрым его потреблением

Плазменный гемостаз Плазменный гемостаз – многоэтапный ферментативный процесс, в котором участвуют белки плазмы и тканей, надмолекулярные образования и ионизированный кальций. 1) белки, обладающие свойствами протеолитических ферментов 2)лишенные ферментных свойств белки – акцелераторы процесса гемокоагуляции 3) фибриноген, являющийся конечным субстратом процесса свертывания. Различают: Внешние путь свертывания(основной) Внутренний путь(добавочный)

Симво л факто ра НазваниеВремя полужиз ни (час) Концентра ция в плазме (нМ) Гемостат ический минимум Зависимост ь от витамина К IФибриноген (2-4 г/л) 0,5-1,0 г/л - IIПротромбин (100г/л) 40%+ IIIТканевой тромбопласт ин (тканевой фактор, ТФ) В норме в плазме отсутствуе т - IVИон Са 1,15-1,27 ммоль/л - VПроакцелери н 1220 (10 мг/л) 10-15%- Плазменные факторы свертывания крови

VIIПроконвертин4-610 (0,1 мг/л) 5-10%+ VIIIАнтигемофильный глобулин А , %- IXАнтигемофильный фактор В 2490 (5 мг/л)20-30%+ XФактор Стюарта32170 (8 мг/л) 10-20%+ XIАнтигемофильный глобулин С, (5 мг/л)10-20%- XIIФактор Хагемана (30 мг/л)

СХЕМА СТРОЕНИЯ И УЧАСТКОВ ПРОТЕОЛИЗА ПЛАЗМЕННЫХ ФАКТОРОВ

Агрегация тромбоцитов, повреждение сосудистой стенки Тканевой тромбопластин XII XI IX Xa VII X ПротромбинТромбин ФибриногенФибрин VIII V

Сборка комплексов плазменных факторов на VIIIa и Va факторах, интернализованных в фосфолипидную мембрану

Каскад активации плазменного гемостаза

Контактная фаза активации плазменных факторов.

Внутренний каскад активации плазменного гемостаза.

Внешний путь образования протромбиназы Тканевой фактор (ТФ) – трансмембранный белок у которого внеклеточная часть гомологична цитокиновым рецепторам. Его практически нет на поверхности эндотелиальных клеток, лейкоцитов или эритроцитов. Субэндотелий богат тканевым фактором. ТФ присутствует практически во всех тканях, кроме сухожилий. Определение экспрессии ТФ на моноцитах проводят методом проточной цитометрии. М.б. для оценки гиперкоагуляции в будущем его определение заменит коагуляционные методы

Внешний каскад свертывания крови

Активация только внешнего пути достаточна для формирования протромбиназы и образования тромбина, но тромбина образуется мало и его хватает только для активации внутреннего пути, но не для превращения фибриногена в фибрин в количестве достаточном для образования сгустка. Поэтому больные гемофилией страдают кровотечениями. Физиологическая активация свертывания крови происходит в большинстве случаев через тканевой фактор. Активность внешнего пути поддерживается за счет механизма положительной обратной связи

Для поддержания активности внешнего пути наиболее важна, обратная связь с активацией фактора V тромбином. Протромбиназный комплекс значительно эффективнее активирует тромбин, нежели один фактор Ха

Агрегация тромбоцитов, повреждение сосудистой стенки Тканевой тромбопластин XII XI IX Xa VII X ПротромбинТромбин ФибриногенФибрин VIII V

Последовательные и взаимовлияющие реакции, определяющие на суммарную активность протромбинового теста

Фибриноген

Формирование фибрина

Формирование фибрин мономеров из фибриногена

Последовательные стадии образования нерастворимого фибрина

Фибринолиз

Основные звенья фибринолиза Основные звенья фибринолиза

ФИБРИНОЛИЗ ПРОАКТИВАТОРЫ АКТИВАТОРЫИНГИБИТОРЫ АКТИВАТОРОВ ПЛАЗМИНОГЕН ПЛАЗМИН АНТИПЛАЗМИН 2 - МАКРОГЛОБУЛИН 1 - АНТИТРИПСИН ФИБРИНПДФ

Активациия плазминогена

Ингибиторы фибринолиза

Образование фибрина из фибриногена и D-димеров при деградации фибрина плазмином

Образование ПДФ при деградации фибриногена плазмином

Антикоагулянты

Агрегация тромбоцитов, повреждение сосудистой стенки Тканевой тромбопластин XII XI IX Xa VII X ПротромбинТромбин ФибриногенФибрин VIII V Протеин САнтитромбин III

Ингибиторы протеаз Ингибирование активных сериновых протаз серпинами за счет образования стабильного неактивного фермент- субстратного комплекса Ингибирование активных протаз за счет погружения фермента внутрь макромолекулы 2 - макроглобулина

Эффект нефракционированого гепарина Терапевтическое антикоагулянтное действие гепарина связано со способностью вызывать конформационные изменения АТ. Функция гепарина каталитическая. После образования эквимолярного 1:1 комплекса тромбин-антитромбин (ТАТ) гепарин может освобождаться для других комплексов.

Снижение уровня АТ в плазме в период активного лечения нефракционированным гепарином

Активация тромбоцитов гепарином за счет образования комплекса между гепарин- зависимыми IgG антителами и тромбоцитарным фактором 4.

Прокоагулянный и антикоагулянтный эффекты тромбина

Система протеина С

Нарушения в системе протеина С, способствующие развитию тромбофилий: 1 – дефицит протеина С, 2 - дефицит тромбомодулина, 3 - дефицит протеина S, 4 - резистентность к активированному протеину С

Резистентность к активированному протеину С (АПС) при мутации в гене, контролирующем синтез V фактора и приводящей к образованию фактора V Лейден

Принцип работы механического коагулометра

Принцип регистрации выпадающего фибрина оптико-механическим коагулометром

Принцип регистрации момента образования сгустка турбидиметрическим коагулометром. Принцип регистрации момента образования сгустка турбидиметрическим коагулометром.

Амидолитические методы с использованием хромогенных и флуорогенных субстратов Принцип определения активности протеолитического фермента (протеазы) с использованием хромогенного субстрата

Принцип определения содержания фактора VIII Определение фактора VIII основано на том, что количество образующегося фактора Ха в реакциях активации плазменного гемостаза прямо пропорционально содержанию VIII фактора в пробе

Иммунохимические методы Принцип латекс- агглютинации Принцип ELISA. На плашке, покрытой антителами против фактора гемостаза, связывается антиген

Принцип метода радиальной иммунодиффузии, используемый для полуколичественной оценки некоторых факторов гемостаза

Линейка коагулометров фирмы Sysmex Коагулометр СА-50, 4- канальный, выполняются тесты: ПВ, АЧПВ, ТВ, МНО, AT, фибриноген Автоматический коагулометр СА- 500 Делает клоттинговые тесты, хромогенные тесты и др. До 33 тестов в час Автоматический коагулометр СА Выполняет клоттинговые, хромогенные и турбидиметричес кие тесты До 80 тестов/час СА-7000 До 500 тестов/час по 20 выбранным параметрам