1© ЗАО «Биоград», 2010г. к.х.н. Дробченко С.Н., проф. Кальво А., проф. Сэмюэльс Ф. ЗАО «Биоград», Санкт-Петербург, Orgenics LTD, Израиль, Orgenics PBS, Франция ДИАГНОСТИКА Т ЛИМФОТРОПНОГО ВИРУСА ЧЕЛОВЕКА - HTLV

© ЗАО «Биоград», 2010г.2 Пути передачи Т лимфотропного вируса От матери к ребенку При половых контактах При переливании крови При использовании инфицированных игл

© ЗАО «Биоград», 2010г.3 Распространение Т лимфотропного вируса Юго-западная часть Японии и остров Окинава (более 1 млн. человек) Страны карибского бассейна включая северо- восточную часть Южной Америки Центральная Африка Италия Израиль Арктика Общее число инфицированных на 2000 год составило более 20 миллионов человек

© ЗАО «Биоград», 2010г.4 Распространение HTLV Российской Федерации РФ в 1990-х годах, обнаруживали HTLV-1 на дальнем востоке и в восточной Сибири, в том числе у коренного населения. Одно из исследований доноров в Москве в 1992 году показало распространенность HTLV-1 в 1,4% (из 1011 исследованных доноров крови 14 были определены как положительные по HTLV-1). Отсутствие эпидемического характера распространения HTLV на всей территории России возможно связано с незначительным количеством заносов вируса из эпидемических очагов, а возможно - отсутствием надлежащего обследования населения на высокоспецифичных тест-системах, позволяющих выявлять различные субтипы HTLV-I/II.

© ЗАО «Биоград», 2010г.5 Мировые стандарты диагностики HTLV В рекомендациях ВОЗ от 2009 года (Screening Donated Blood for Transfusion-Transmissible Infections, Recommendations) указано обязательное обследование на HTLV доноров, происходящих из эндемичных регионов, или имевших половые контакты с лицами из этих регионов. В США, в Японии, в 11 странах Евросоюза, включая Великобританию и Францию, проводится обязательный скрининг донорской крови и ее компонентов на HTLV. Европейские стандарты безопасности приготовления и использования компонентов крови (2001 г.) обязывают исследовать образцы на наличие антител к HTLV.

© ЗАО «Биоград», 2010г.6 Российские нормативные акты Приказ Минздравсоцразвития РФ 325 от 25 июля 2003 года «О развитии клеточных технологий в Российской Федерации», обязует банки стволовых клеток проводить тестирование на антитела к HTLV I и II при поступлении образца.

© ЗАО «Биоград», 2010г.7 ИммуноКомб HTLV I&II В 2008 году в России зарегистрирована иммуноферментная бесприборная тест-система ИммуноКомб II HTLV I&II, производства Orgenics, Израиль. Чувствительность: 100% Специфичность: 97% Исследуемый образец: сыворотка, плазма или цельная кровь Количество образца: 10 мкл Время анализа: 37 минут Количество определений: 36 определений

© ЗАО «Биоград», 2010г.8 Рекомбинантные антигены оболочки и ядра (env и core) Т- лимфотропных вирусов типов I и II последовательно нанесены на нижнюю точку зубца Гребня. Такая сорбция антигенов обеспечивает высокую специфичность теста. Для обеспечения высокой чувствительности тестов ИммуноКомб специально подобрана реакция связывания с использованием фосфатазно-щелочного конъюгата. Французское агентство по контролю за медикаментами (ADA), оценивая тесты, разрешенные для использования в клиниках Европы, подчеркивает, что использование фосфатазно-щелочного конъюгата позволяет достичь наиболее высокой чувствительности по сравнению с тестами, основанными на пероксидазной реакции.

© ЗАО «Биоград», 2010г.9 Схема постановки анализа 6. Результат анализа в виде окрашенных точек. Верхняя точка: внутренний контроль. Нижняя точка и (или) средняя точки появляются в случае наличия - инфекции. 1. Для индивидуального тестирования гребешок можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. 2. В ряд А ванночки вносятся образцы (сыворотка, плазма или цельная кровь) и контроли. 3. Гребешок вставляется в ряд А и инкубируется (реакция антиген-антитело). 4. Гребешок перемещается из ряда в ряд ванночки в соответствии с инструкцией (промывки и связывание с конъюгатом). 5. Цветная реакция в ряду F.

© ЗАО «Биоград», 2010г.10 Чувствительность теста ИммуноКомб II HTLV I&II Тип HTLV Количество образцов Результат ИммуноКомб ® II HTLV I&II ОтрицательныйПоложительный HTLV I1110 HTLV II500 HTLV I&II (неизвестный тип) 930 Итого2540 Чувствительность тест-системы ИммуноКомб II HTLV I&II составила 100%

© ЗАО «Биоград», 2010г.11 Специфичность теста ИммуноКомб II HTLV I&II Специфичность тест-системы ИммуноКомб II HTLV I&II составила 97% Группы обследуемых Количеств о образцов ИммуноКомб® II HTLV I&II Специфи чность % Отрица- тельный Положи- тельный Доноры, область низкого уровня распространенности HTLV Доноры, область высокого уровня распространенности HTLV Онкологические пациенты ,6 Пациенты с аутоимунными заболеваниями Группа высокого риска (принимающие наркотики и т.п.) ,3 Имеющие другие инфекционные заболевания (ВИЧ, гепатит А, гепатит В, СМВ, Эпштейн-Барр вирус) Пациенты подозреваемые на наличие HTLV, отрицательные по серологическим тестам Итого

© ЗАО «Биоград», 2010г.12 Выводы ИммуноКомб II HTLV I&II выявил все положительные образцы. Все подтвержденные отрицательные образцы, так же определялись как отрицательные в тесте ИммуноКомб II HTLV I&II. ИммуноКомб II HTLV I&II определяет HTLV- 1 так же хорошо, как и HTLV-2. ИммуноКомб II HTLV I&II не дает перекрестных реакций с образцами, содержащими ВИЧ и другие антитела. ИммуноКомб II HTLV I&II достоверно определяет НTLV в зонах низкого и высокого уровня распространенности.

© ЗАО «Биоград», 2010г.13 Близость дальневосточных районов России к эндемичным по HTLV регионам (Японии), а также увеличение миграции населения, изменения в сексуальном поведении, диктуют необходимость обследования населения России на Т-лимфотропный вирус человека типа 1 и типа 2. Использование тест-систем ИммуноКомб II HTLV I&II для этих целей позволит быстро и надёжно определить инфицированность HTLV-I и HTLV-2.

14© ЗАО «Биоград», 2010г. ЗАО «Биоград» 17 лет в России! Адрес:197101, г. Санкт- Петербург, Петровский пр., д. 14, 19-Н тел./факс:(812) , (многоканальные)

© ЗАО «Биоград», 2010г.15 Спасибо за внимание.