Серологическая диагностика ревматоидного артрита Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду: высокоспецифичный маркер заболевания

«Окно возможностей» 2 Начало терапии Первый визит к ревматологу Первые симптомы Начало деструкции сустава Идеальный курс Без лечения Позднее начало Раннее начало лечения Время Через 2 года:Эрозивное поражение суставов у 90% больных Через 5 лет:Инвалидность у 40% больных Терапия ревматоидного артрита

Ревматоидный артрит: специфические аутоантигены 3 Антитела к цитруллинированным пептидам или белкам: Анти-перинуклеарный фактор (АПФ) Кератин Филаггрин ЦЦП (циклические цитруллиновые пептиды) Sa-антиген, MCV (цитруллинированный виментин) Фибриноген, фибрин -Енолаза CEP-1 (цитруллиновый пептид 1 альфа-енолазы)

Классификация РА Критерии ACR/EULAR, 2010 год 4 AПоражение суставов 1 большой сустав 2-10 больших суставов 1-3 малых суставов (в т.ч. без поражения больших суставов) 4-10 малых суставов (в т.ч. без поражения больших суставов) > 10 суставов (с поражением по крайней мере 1 малого сустава) BСерология (как минимум одно из перечисленного) РФ отрицательный и анти-ЦЦП отрицательный РФ или анти-ЦЦП слабо положительный РФ или анти-ЦЦП высоко положительный CМаркеры острой фазы (как минимум одно из перечисленного) СРБ и СОЭ в норме СРБ за пределами нормы 0101 DПродолжительность симптомов синовита < 6 недель 6 недель 0101 Aletaha et al, Ann Rheum Dis, 2010

Специфические аутоантитела: анти-филаггрин 5 Клетки эпителия щеки Эпителий слизистой щек Анти-перинуклеарный фактор (1964 г.) Антитела к кератину, 1979 г. Аутоантитела к филаггрину Чувствительность: 35-80% Специфичность: 70-99% ЭПИТОПЫ?

Цитруллин 6 Дезиминирование остатков аргинина Аргинин Цитруллин АНТИГЕННЫЙ ЭПИТОП

Антигенный эпитоп: цитруллин 7 Walther J. van Venrooij Department of Autoimmune Biochemistry University of Nijmegen, Nijmegen, The Netherlands Цитруллин – важная составляющая часть эпитопов аутоантител, выявляемых при ревматоидном артрите

Цитруллинированные пептиды: история ИФА тест-системы 8 Выявляемые при ревматоидном артрите антитела распознают цитруллин-содержащие пептиды (ЦП) Выявление аутоантител к линейному ЦП Специфичность > 98%, но чувствительность 35-49% Выявление аутоантител к циклическому ЦП Специфичность > 98%, чувствительность > 70% Поиск оптимальных пептидов – тест-система 2 поколения – Anti-CCP2

Цитруллинированный пептид Чувствительность для РА: 49% CCP =Cyclic Citrullinated Peptide 68% = Цитруллин Линейный пептид (из молекулы филаггрина:) Schellekens et al., Arthritis Rheum, 2000 Циклический пептид:

Table 1 Specificity and sensitivity of the CCP2 test for RA van Venrooij, W. J. et al. (2011) Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future Nat. Rev. Rheumatol. doi: /nrrheum

Антитела к ЦЦП: выявляются задолго до появления симптомов РА 11 Rantapäa-Dahlqvist et al., Arthritis Rheum, 2003 Время до появления симптомов, годы Анти-CCP2 положит. 83 больных РА, все бывшие доноры крови Образцы сыворотки получены из банка крови – вплоть до 10 лет до появления первых симптомов

Анти-ЦЦП, тест 2 поколения: чувствительность и специфичность 12 Панель Anti-CCP2 ELISA nПоложит. Чувствительность для РА (78.5%) Доноры крови4002 (0.5%) Псориатрический артрит280 Другие формы артрита353 (8.6%) Системная красная волчанка1083 (2.8%) Синдром Шегрена1062 (1.9%) Системная склеродермия983 (3.1%) Аутоиммунный тиреоидит1594 (2.5%) Грануломатоз Вегенера251 (4.0%) Положительные на антитела к парвовирусу B (2.4%) Вирусные гепатиты540 ВИЧ-положительные50 Специфичность для РА (98.2%)

EUROIMMUN Калибратор 1 -верхняя граница измеряемого диапазона Калибратор 2 -верхняя граница нормальных значений Калибратор 5 -граница чувствительности теста ИФА тест-система фирмы EUROIMMUN КАЛИБРОВКА : НАДЕЖНО И ЭКОНОМИЧНО О

EUROIMMUN ИФА тест-система фирмы EUROIMMUN - калибратор 1 - положительный контроль - калибратор 2 - отрицательный контроль - калибратор 3 - калибратор 4 - калибратор 5 МЕТОДИКА : УДОБНО И БЫСТРО Инкубация: мин. (комн. темп.)

Серологическая диагностика РА 15 Схема, принятая в Германии При подозрении на РА: определение антител к ЦЦП (Anti- ССP-2) Рекомендуется: дополнительно – определение ревматоидного фактора, особенно класса IgM Определение анти-ЦЦП полезно: для прогнозирования эрозивного течения РА Определение анти-ЦЦП не слишком пригодно: - для мониторинга прогрессирования РА - для мониторинга ответа на терапию Может быть, более полезны: Anti-MCV?Anti-Sa?

Серологическая диагностика РА 16 Anti-MCV: чувствительность несколько выше, специфичность ниже ИсследованиеNAnti-MCVAnti-CCP РА Контрол. группа Чувств.Специф.Чувств.Специф. H.Bang Arthritis Rheum дон. 257 CTD 82 % 98 % 79 % 72% 96% - C. Dejaco Arthritis Res Therapy %91 %70 %99 % D. Coenen Clin Chem %90 %73 %97 % L. Soos J Rheumatol %92 %66 %98 % L. Mathsson Arthritis Rheum дон.71 %95 %58 %96 % R. Sghiri Rheumatol Int %79 %72 %96 %

Серологическая диагностика РА 17 Тест-системаАнтиген Чувств.[%] (n=100 больных РА) Специф. [%] (n=202) AUC Чувств. [%] при 98% специфичности EUROIMMUNCCP PhadiaCCP Axis ShieldCCP EurodiagnosticaCCP Inova 2. Generation CCP Inova 3. Generation CCP Inova 3.1. Generation CCP Genesis Цитруллин. филаггрин OrgentecMCV Astra Цитруллин.пептид ВЭБ RF-TestIgG AeskuЦитруллин. IgG ( Bizzarro et al., Clinical Chemistry, 2007)

Серологическая диагностика РА 18 Что дает определение антител к ЦЦП? Диагностика РА: высокая специфичность и чувствительность Прогнозирование появления симптомов (у асимптоматических доноров крови, при недифференцированных артритах и т.д.) Прогнозирование эрозивных форм Но: Низкая степень корреляции с активностью процесса Sa-антиген?

Sa-антиген 19 Kindly provided by H. Ménard Стрипы 3-4 – анти-Sa-антиген

Анти-SA: тест-система EUROIMMUN 20 Сходимость: 98.5% Lora et al., 9th Dresden Symposium on Autoantibodies, Germany, September 2009

Анти-Sa и анти-CCP: чувствительность и специфичность 21 Исследование: проф. Й. Венковски, Пражский университет / EUROIMMUN ВыборкаnAnti-SaAnti-CCP2 РА (48.1%)157 (66.2%) Ранний РА74 28 (37.8%) 44 (59.5%) ЮИA561 (1.8%)2 (3.6%) Чувствительность для РА % 66.2% СКВ1902 (1.1%)8 (4.2%) Псориатический артрит (1.7%) Специфичность %97.0% Доноры4083 (0.7%)2 (0.5%)

Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА 22 Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010 Выборка Anti-Sa positive (n=10) Anti-CCP positive (n=20) Anti-MCV positive (n=39) RG 10 (0%)1 (5%)7 (18%) RG 20 (0%)1 (5%)8 (21%) RG 31 (10%)2 (10%)5 (13%) RG 49 (90%)16 (80%)19 (49%) Группы риска (модифицированный счет Виссера): RG 1:благоприятный прогноз (вероятность эрозивного РА

Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА 23 Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010 Положительное прогностическое значение (PPV) для плохого прогноза: анти-Sa 90% анти-CCP80% анти-MCV49%

Анти-Sa: прогностический маркер при раннем РА РЕЗЮМЕ Анти-Sa обнаружены только у больных с неблагоприятным и плохим прогнозом (10% в группе риска 3, 90% в группе риска 4) PPV для плохого прогноза (группа риска 4): 90% анти-Sa, 80% анти-CCP, 49% анти-MCV 20% положительных на анти-Sa образцов были отрицательны как на анти-CCP, так и на анти-MCV. 1) Анти-Sa: преимущество в прогнозировании тяжелого течения РА 2) Анти-Sa позволяет выявить ряд больных, отрицательных на анти-CCP и анти-MCV Langer et al., 7th International Congress on Autoimmunity, Ljubljana, May 5-9, 2010

Анти-CCP и анти-Sa 25 Выводы Чувствительность: анти-ЦЦП>> анти-Sa Специфичность: анти-Sa > анти-ЦЦП Прогноз тяжелого течения: анти-Sa > анти-ЦЦП Анти-ЦЦП – основной диагностический маркер Анти-Sa – дополнительный показатель ИФА наборы EUROIMMUN для выявления IgG к ЦЦП и Sa-антигену

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ! Зайко Сергей Дмитриевич Сентябрь 2011 г.