Выполнила : Иса Салтанат 403 « А » группа Ветеринарная медицина

Этапы трансплантации эмбрионов 1. Отбор коров доноров. 2. Вызывание суперовуляции у коров – доноров. 3. Осеменение коров - доноров. 4. Сбор ( вымывание ) эмбрионов. 5. Оценка эмбрионов. 6. Отбор и подготовка самок - реципиентов. 7. Пересадка эмбрионов.

1. Отбор коров доноров. Первой ступенью в реализации метода трансплантации эмбрионов является отбор коров доноров. Метод трансплантации подходит для ограниченного количества особей мясного или молочного скота, которые могут стать улучшителями породы по одному или более экономически важным признакам.

Под суперовуляцией понимается выделение множества яйцеклеток из яичников коровы в течение одной течки. Подвергнутая соответствующей гормональной обработке корова или тёлка способна выделить до 10 и более жизнеспособных яйцеклеток за одну течку. Основной принцип суперовуляции состоит в стимулировании роста фолликулов яичника с использованием гормональных препаратов с фолликул стимулирующей активностью. Препараты вводят корове два раза в сутки на протяжении 4 х дней во вторую половину эстрального цикла, в период функциональной активности жёлтого тела яичника. На третий день обработки фолликулостимулирующим гормоном корове инъецируют простагландин, который вызывает рассасывание жёлтого тела и проявление течки приблизительно через часов после инъекции.

3. Осеменение коров Так как при суперовуляции выделяется много яйцеклеток, специалисты по трансплантации эмбрионов практикуют несколько осеменений в течении течки при осеменении доноров. Одна из эффективных схем включает в себя осеменение коров - доноров через 12, 24 и 36 часов после начала охоты. Использование семени высокого качества с высоким процентом нормальных, подвижных спермиев является крайне важным моментом в процессе эмбриотрансплантации. При этом наиболее оптимальным местом введения семени является тело матки.

Сбор эмбрионов осуществляется с помощь резинового катетера, который вводится через шейку матки. Через этот катетер в полость матки вводится специальная жидкая физиологическая среда и затем откачивается обратно вместе с эмбрионами. Вымывание эмбрионов осуществляется обычно на 7-8 день после осеменения донора. Эта процедура сбора эмбрионов относительно проста и может быть проведена в течение 30 минут без причинения вреда животному.

Кончик катетера помещается в тело матки, манжета медленно заполняется примерно 2 мл физиологического раствора. Затем катетер аккуратно вытаскивается так, чтобы манжета располагалась в внутри канала шейки матки. Затем в манжету подаётся дополнительно жидкость, чтобы полностью уплотнить наружную стенку катетера с внутреннего стенкой канала шейки матки. Далее с наружного конца катетера крепится Y- образный разъем с трубками для притока и оттока жидкости. К каждой из трубок крепится зажим для регулировки потока промывочной жидкости. При этом жидкость последовательно добавляется и удаляется самотёком под действием силы тяжести ( по методу капельницы ). Жидкость в полости матки перемешивают рукой через стенку прямой кишки, особенное внимание уделяется верхней трети рога матки. Жидкость вместе с вымытыми эмбрионами помещается в большой мерный цилиндр. Примерно через 30 минут, эмбрионы оседают на дне цилиндра и после слива верхних слоёв жидкости могут быть помещены под микроскоп для выделения и оценки.

При хирургическом извлечении эмбрионов у крупного рогатого скота достигнуты отличные результаты, этот метод неэффективен – относительно дорогостоящий, неудобный для применения в условиях производства. Нейрохирургичесоке извлечение эмбрионов состоит в использовании катетера. Наиболее оптимальные сроки для извлечения эмбрионов – 6-8 день после начала охоты, т. к. ранние бластоцисты этого возраста наиболее пригодны для глубокого замораживания и могут быть с высокой эффективностью пересажены нехирургическим способом. У овец и свиней нехирургическое извлечение эмбрионов невозможно ввиду трудности прохождения катетера через шейку в рога матки.

5. Оценка эмбрионов. Для оценки эмбрионов используются следующие основные критерии : - форма эмбриона ; - компактность бластомеров ( делящихся клеток ) внутри сферы эмбриона ; - различие размера бластомеров ; - цвет и структура цитоплазмы ( жидкости внутри клеток ) бластомеров ; - внешний диаметр эмбриона ; - наличие неразвитых или мёртвых бластомеров ; - целостность и форма зоны защитного белково - полисахаридного слоя окружающего одноклеточный эмбрион ; - наличие пузырьковидных образований в цитоплазме бластомеров.

В соответствии с этими критериями эмбрионы оцениваются как: 1-й класс - отличного и хорошего качества; 2-й класс - удовлетворительного качества; 3-й класс – плохого качества; 4-й класс – мёртвые и дегенерированные эмбрионы.

Коровы, которые не имеют проблем с воспроизводством, и у которых наблюдался лёгкий отёл – являются подходящими реципиентами. Для них должен быть подобран специальный рацион, что бы обеспечить упитанность тела 6 баллов для мясного скота и 3-4 балла для молочного скота. Эти коровы также должны происходить из здорового стада. Для получения максимальной приживаемости эмбрионов при пересадке, состояние репродуктивного тракта реципиента должно, как можно точнее соответствовать состоянию репродуктивного тракта донора : необходимо синхронизировать половой цикл у донора и реципиента одновременно. Для этого обычно используется инъекция препаратов простагландина. Этот прием повышает вероятность того, что в период эмбриотрансплантации реципиент будет находиться в той же стадии полового цикла, что и донор. В период проявления течки и охоты коровы доноры должны быть осеменены. Обычно пересадка эмбрионов реципиенту производиться на седьмой день после осеменения донора.

Первое что необходимо, для осуществления пересадки эмбриона реципиенту, это поместить эмбрион в соломинку для искусственного осеменения. Эта операция осуществляется под наблюдением через микроскоп с помощью шприца объёмом в 1 мл. Инструмент для пересадки эмбрионов вводиться также как при искусственном осеменении в шейку матки реципиента. Затем кончик инструмента продвигается в рог матки, на стороне которого в яичнике произошла овуляция. При этом нужно действовать очень аккуратно, чтобы не повредить слизистую оболочку рога матки. Затем надавливая на поршень шприца для трансплантации, эмбрион выталкивается из соломинки в полость рога матки. Затем инструмент также аккуратно выводится из половых путей. Для того чтобы сократить риск травмирования слизистой оболочки матки процессы вымывания и пересадки эмбрионов осуществляются после проведения эпидуральной анестезии, которая позволяет блокировать сокращение прямой кишки.

Эмбрионы могут быть пересажены сразу после их извлечения от донора и оценки, или могут быть заморожены и оставлены на хранение в жидком азоте до следующей пересадки. Процессы заморозки и оттаивания очень сложные и не безопасные для жизнеспособности эмбриона, и поэтому результаты стельности от пересадки замороженных эмбрионов бывают обычно ниже на 10-20% по сравнению с результатами от пересадки свежих эмбрионов. Замороженные эмбрионы должны быть соответствующим образом промаркированы. Часто они используются для продажи.