БАКТЕРИОФАГИ ПРЕЗЕНТАЦИЮ ВЫПОЛНИЛА СТУДЕНТА 2 КУРСА ИПР СПЕЦИАЛЬНОСТЬ БИОЛОГИЯ КОНОНЕНКО ЕКАТЕРИНА

Определение Бактериофаги или фаги Бактериофаги или фаги (от др.-греч. φ γω «пожираю») вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки.

Строение бактериофага Типичная фаговая частица (вирион) состоит из головки и хвоста. Длина хвоста обычно в 24 раза больше диаметра головки. В головке содержится генетический материал одноцепочечная или двухцепочечная РНК или ДНК с ферментом транскриптазой в неактивном состоянии, окружённая белковой или липопротеиновой оболочкой капсидом, сохраняющим геном вне клетки. Нуклеиновая кислота и капсид вместе составляют нуклеокапсид.

Строение бактериофага Хвост, или отросток, представляет собой белковую трубку продолжение белковой оболочки головки, в основании хвоста имеется АТФаза, которая регенерирует энергию для инъекции генетического материала. Отросток имеет вид полой трубки, окружённой чехлом, содержащим сократительные белки, подобные мышечным. На конце отростка у многих бактериофагов имеется базальная пластинка, от которой отходят тонкие длинные нити, способствующие прикреплению фага к бактерии.

Систематика БАКТЕРИОФАГИДНК-СОДЕРЖАЩИЕ Myoviridae Siphoviridae Podoviridae Lipothrixviridae и др.семейства РНК-СОДЕРЖАЩИЕ Cystoviridae, Leviviridae

Морфологические типы I – нитевидные фаги II – фаги без отростка III- фаги с аналогом отростка IV – фаги с коротким отростком V – фаги с длинным несокращающимся отростком VI– фаги с длинным сокращающимся отростком

Характерные свойства фагов, как представителей царства Vira: Фаги – неклеточные формы жизни Содержат одну нуклеиновую кислоту – ДНК или РНК Геном фага кодирует только белки капсида У них отсутствуют белоксинтезирующие системы и самостоятельный метаболизм Облигатные внутриклеточные паразиты на генетическом уровне

Типы фагов (по характеру влияния на инфицированную клетку)

Истинно вирулентные бактериофаги

Адсорбция бактериофагов на бактериальных клетках Инъекция нуклеиновой кислоты бактериофага внутрь клетки

Сборка фаговых частиц Репликация копий нуклеиновой кислоты бактериофага

Синтез белковых и нуклеиновых частиц Выход зрелых фагов и смерть бактерии

Умеренные бактериофаги

Умеренные фаги Умеренные фаги, в отличие от вирулентных, не всегда вызывают гибель бактериальных клеток и при взаимодействии с ней переходят в неинфекционную форму фага, называемую профагом. Профаг геном фага, ассоциированный с бактериальной хромосомой. Профаг, ставший частью хромосомы клетки, при ее размножении реплицируется синхронно с геномом бактерии, не вызывая ее лизиса, и передается по наследству от клетки к клетке в неограниченном числе поколений.

Умеренные фаги. Лизогения Умеренные фаги. Лизогения Бактериальные клетки, содержащие в своей хромосоме профаг, называются лизогенными. Профаг в лизогенных бактериях самопроизвольно или под влиянием различных индуцированных агентов может переходить в вегетативный фаг. В результате такого превращения бактериальная клетка лизируется и продуцирует новые фаговые частицы.

Умеренные фаги Умеренные фаги Фаговая конверсия: процесс изменения свойств бактерии, под действием дополнительного набора генов, внесенных профагом в клетку, с приобретением ею токсигенных свойств (например, появление способности к образованию экзотоксина у возбудителей ботулизма, дифтерии, скарлатины, холеры). Лизогенные бактерии, содержащие tox-ген, полученный в результате фаговой конверсии патогенны

Некоторые умеренные фаги называются трансдуцирующими, поскольку с их помощью осуществляется один из механизмов генетической рекомбинации у бактерий трансдукции. Такие фаги могут использоваться, в частности, в генной инженерии в качестве векторов для получения рекомбинантных ДНК и/или приготовлении рекомбинантных (генно-инженерных) вакцин.

Абортивная инфекция - инфекция, при которой процесс репродукции остается незавершенным и потомство бактериофагов не образуется

ПРИМЕНЕНИЕ В МЕДИЦИНЕ

Фагопрофилактика и фаготерапия. Одной из главных областей использования бактериофагов является антибактериальная терапия, альтернативная приёму антибиотиков. Препараты бактериофага составлены из вирулентных бактериофагов широкого спектра действия, активных против антибиотико-резистентных бактерий. Их выпускают жидкими и лиофильно высушенными, в виде таблеток, кремов, мазей,свечей. Перед применением необходимо определить фагочувствительность возбудителя инфекции.

Препараты бактериофагов Коли- протейный (смесь фаголизатов P.vulgaris и P.mirabilis) Стафилококковый бактериофаг Бактериофаг псевдомонас аеругиноза Сальмонеллезный бактериофаг Бактериофаг поливалентный (смесь фаголизатов стафилококков, стрептококков, E.coli, P.vulgaris и P.mirabilis)

Интести-бактериофаг представляет собой смесь стерильных фильтратов фаголизатов Shigella flexneri, Shigella sonnei, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Salmonella typhimurium, Salmonella infantis, Salmonella choleraesuis, Salmonella oranienburg, Salmonella enteritidis, энтеропатогенной Escherichia coli серогрупп, наиболее значимых в этиологии энтеральных заболеваний, Proteus mirabilis, Enterococcus, Staphylococcus, Pseudomonas aeruginosa.

Применение в медицине для лечения и профилактики кишечных инфекций тракта (колит, энтероколит, брюшной тиф, дизентерия, сальмонеллез, кольпит, дисбактериоз, диспепсия); против основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний кожи (пиодермия, фурункулёз, абсцесс, инфекции ран); при лечении ЛОР-органов (пневмония, плеврит, ангина); при лечении опорно-двигательного аппарата; при лечении инфекций почек и мочеполовой системы (цистит, пиелонефрит, уретрит); систем органов кровообращения и дыхания, в том числе у новорожденных и детей первого года жизни. рекомендуются с лечебной и профилактической целью (при операциях на желудочно-кишечный тракт, при перитонитах, акушерских операциях, ампутациях и открытых переломах костей, ожогах, артритах и т.п.)

Преимущества перед антибиотиками бактериофаги способны уничтожать бактерии, устойчивые к антибиотикам, т.к. они действуют лишь на определенные бактерии свободно проникают в ткани организма человека и животного не нарушая баланса высшего организма не вызывают побочных эффектов не подавляют рост нормофлоры, не ослабляют иммунитет постоянно эволюционируют не подавляют и не нарушают действия человеческого организма не развивают устойчивость (привыкание) бактерий сочетаются с любыми лекарственными препаратами, оказывают положительное действие на становление иммунитета

Важным свойством бактериофагов является их специфичность: бактериофаги лизируют культуры определённого вида, но встречаются поливалентные бактериофаги, которые паразитируют в бактериях разных видов. Узкая специфичность – главный недостаток лечебно-профилактических препаратов бактериофагов

Применение в медицине Для диагностики инфекционных заболеваний Один из основных методов: Фаготипирование (лиза типирование, фаготипаж) метод дифференциации бактерий при помощи бактериофагов.

Фаготипирование Основа метода Основа метода: с помощью типовых фагов дифференцируют культуры одного вида на основании их различной чувствительности к набору таких фагов, то есть выявляют фаготип, что позволяет выявить источник заболевания и пути его распространения. Фаготипирование S. typhi. Используют набор типовых Vi-фагов (А,B,C,D,E), каждый из которых лизирует культуры определенных фаговаров. Для типирования нужен фаг Vi-1, который лизирует все брюшнотифозные культуры, содержащие Vi- антиген, т.к. только такие культуры пригодны для постановки опыта.

Постановка опыта 1) Бульонную культуру засевают в виде капель на поверхность МПА. 2) На высохшие капли культуры наносят типовые Vi-фаги (А, В, С, Д), а также фаг Vi-1. Инкубируют. 3) Проводят учет результата опыта: культура должна полностью лизироваться фагом Vi-1 и определенными типовыми фагами, что и позволяет определить ее фаговар (с помощью таблицы).

Фаготипирование стафилококков

Титрование бактериофага - определение активности бактериофага по способности различных разведений его взвеси лизировать бактериальные культуры в жидких питательных средах или образовывать негативные колонии в бактериальном газоне на плотных питательных средах.

ТИТРОВАНИЕ БАКТЕРИОФАГА ПО МЕТОДУ ГРАЦИА 1,0 мл фага смешивают в пробирке с 0,5 мл бактериальной культуры и добавляют в эту же пробирку расплавленный МПА. Все содержимое выливают в чашку с МПА. Дают застыть верхнему тонкому слою и ставят в термостат. Происходит лизис бактерии и образуется негативная колония фага. Негативные колонии затем подсчитывают для определения титра (количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага)

Роль бактериофагов в биосфере Контроль численности микробных популяций Перенос бактериальных генов Привносят в бактериальный геном новые гены (трансдукция)