МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВО ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ Зав.кафедрой д.м.н профессор Новожилов Владимир Александрович Университетский руководитель к.м.н. Милюкова Лалита Павловна 20. Определение группы крови. Выполнила студентка 405 группы Педиатрического факультета Полухина Маргарита Олеговна

ПН 21 Определить групповую принадлежность и индивидуальную совместимость крови ОК-1 ОПК-2 ОПК-4 ОПК-5 ОПК-6 ОПК-8 ОПК-11 ПК-5 ПК-6 ПК-8 ПК-10 ПК-16

Определение групповой принадлежности крови Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(I), А(II), В(III), АВ(IV) групп двух серий, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, резиновые перчатки. Для определения группы крови используют блюдцеобразные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозначения соответственно стандартным сывороткам.

Методика выполнения: Определение группы крови производится при температуре не ниже +15 С и не выше +25 С. 1. Наденьте перчатки. 2. Осмотрите стандартные гемагглютинирующие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок годности, были правильно расположены по отношению друг к другу. 3. На пластинке (тарелке) напишите фамилию больного. 4. Отмаркируйте секции на пластинке (тарелке), указав название реагента.

5. Нанесите по 1 большой капле (около 0,1 мл) каждого реагента: анти-А, анти-В и анти-АВ. 6. Нанесите по 1 маленькой капле (около 0,03 мл) исследуемой крови (эритроцитов) рядом с каждым реагентом. 7. Смешайте отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю крови (эритроциты) с соответствующим реагентом. 8. Мягко покачивайте пластинку. Несмотря на то, что при использовании стандартных реагентов четкая агглютинация наступает уже в первые секунды, результаты реакции учитывайте через 3 минуты после окончания смешивания, чтобы не пропустить слабые формы антигенов. 9. Запишите результаты реакции немедленно после определения.

Определение групп крови моноклональными антителами Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью гибридомной, биотехнологии. Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, резиновые перчатки.

Методика выполнения: 1. Наденьте перчатки. 2. Убедитесь в пригодности цоликлонов, донорской крови. 3. На тарелке напишите Ф. И. О. донора и реципиента. 4. Возьмите кровь реципиента и донора. 5. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанесите по 1 капле (0,1 мл) цоликлонов: в первую – цоликлон анти-А, во вторую – цоликлон анти-В.

6. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пипеткой для каждой лунки перенесите каплю крови в 10 раз меньше капли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна. 7. Блюдце осторожно покачивать в течение 2,5 мин. 8. Оцените результат пробы без добавления изотонического раствора натрия хлорида. Оценка результатов: - При отсутствии агглютинации с двумя цоликлонами группа крови 0(I) – первая. - При наличии агглютинации с циклоном анти-А группа крови А(II) – вторая. - При наличии агглютинации с циклоном анти-В группа крови В(III) – третья. - При наличии агглютинации с двумя цоликлонами группа крови АВ(IV) – четвертая.

Определение группы крови по стандартным отмытым эритроцитам с известной групповой принадлежностью Из вены больного берут 3-4 мл крови в пробирку и центрифугируют. На тарелку, разделённую на секторы, наносят соответственно надписям по капле сыворотки, к которой добавляют каплю стандартных эритроцитов в 5 раз меньше капли исследуемой сыворотки, перемешивают капли углом предметного стекла, покачивают тарелку в течение 3 мин, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия, продолжают смешивать покачиванием и через 5 мин оценивают результаты.

Возможны четыре варианта реакции агглютинации. 1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) группы и определяется с эритроцитами II(А) и III(В) групп - исследуемая кровь I(0) группы. 2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и II(А) групп и определяется с эритроцитами III(В) группы - исследуемая кровь II(А) группы. 3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и III(В) групп и определяется с эритроцитами II (А) группы - исследуемая кровь III(В) группы. 4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0), II(А), III(В) групп - исследуемая кровь I V(АВ) группы.

Определение индивидуальной совместимости крови Первый этап: Поместить 2 капли сыворотки реципиента в маркированную пробирку. Добавить 1 каплю 5% взвеси трижды отмытых эритроцитов донора в физиологическом растворе. Немедленно центрифугировать при 2000 об./мин в течение 15–20 с. Просмотреть супернатант на наличие гемолиза, мягко покачивая пробирку, отделить клеточный осадок от дна пробирки и определить наличие агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов на этой стадии может означать: несовместимость по системе АВ0;присутствие в сыворотке реципиента полных холодовых антител по специфичности АВ0 (анти-S, анти-P1 и др.).

Второй этап: Если гемолиз отсутствовал, а после встряхивания пробирки эритроциты образовали гомогенную суспензию, инкубировать пробирку 30–40 мин при +37°С.Центрифугировать пробирку и просмотреть супернатант на наличие гемолиза и агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов (после встряхивания пробирки) говорит о присутствии у реципиента полных тепловых антител против эритроцитов донора. Если агглютинация и гемолиз отсутствуют, отмыть эритроциты 3–4 раза большим объемом (не менее 5 мл) физиологического раствора; удалить полностью физиологический раствор после последнего отмывания. Добавить 1–2 капли антиглобулиновой сыворотки и тщательно смешать. Центрифугировать пробирку,мягко разбить осадок и просмотреть пробирку на наличие агглютинатов. Донор считается совместимым, если ни на одной стадии пробы на индивидуальную совместимость не наблюдается ни гемолиза, ни агглютинации.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ: 1. Гостищев В.К. "Общая хирургия", М. ГОЭТАР-МЕД, 2001,стр Общая хирургия п/р П.Н.Зубарева с соавт., Санкт-Петербург, 1999, стр.226, Гаврилов О.К.Справочник по переливанию крови и кровезаменителей, М.Медицина,1982,стр Журавлев В.А., Сведенцев Е.П., Сухоруков В.П., «Трансфузиологические операции»-М.1985, стр