ПЛАН : 1. Общие требования к лаборатории. Условия асептики при выполнении работ по культивированию растений in vitro. 2. Методы и приемы стерилизации растительного материала при введении в культуру. 3. Питательные среды для культивирования растительных клеток и тканей in vitro.

Основное условие успешного культивирования – СТЕРИЛЬНОСТЬ

СТЕРИЛИЗАЦИИ ДОЛЖНЫ ПОДВЕРГАТЬСЯ: операционная комната, в которой производят изоляцию и посадку культур; одежда и руки работающего персонала; посуда, используемая для культивирования объектов; все необходимые инструменты и материалы (пинцеты, ланцеты, петли и др.); питательные среды; объекты культивирования.

Стерилизация операционной комнаты: тщательное удаление загрязнений и пыли со всех поверхностей с помощью мыльного раствора; УФ-облучение

СПОСОБЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ ПОСУДЫ: сухим горячим жаром в сушильном шкафу. Продолжительность стерилизации при 150 °С – 2,5 ч, 160 °С – 2 ч, 170 °С – 1 ч. автоклавирование при 2 атм (133°С) в течение мин.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ: предварительная (сухим горячим жаром в сушильном шкафу в течение 2 ч при 140°С; кипячением); непосредственная (в ламинар- боксе инструменты стерилизуют еще раз, помещая в фарфоровый стакан с 96%-ним этиловым спиртом и обжигая в пламени спиртовки) Стерильный инструмент используют только для одноразовой манипуляции!

Некоторые химические агенты, используемые для поверхностной стерилизации растительных тканей: соединения, содержащие активный хлор, – 0,5-1% (гипохлорит кальция, гипохлорит натрия, хлорная известь, хлорамин); двухлористая ртуть (сулема), 0,1-1 %-ный раствор; формалин, 5%-ный раствор; перекись водорода, 10-20%-ный раствор; этиловый спирт, 70%-ный раствор; фенол, 5%-ный раствор; CuSO4,10%-ный раствор; антибиотики.

ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО МАТЕРИАЛА: 1) Предварительная стерилизация (проводят очистку поверхности путем ее промывания проточной водой; обработки этанолом (70%-ный раствор в течение 1 мин), растворами CuSO4 либо KMnO4 ) 2) Стерилизация (в условиях ламинар-бокса предварительно простерилизованные ткани помещают в стерилизующий раствор) 3) Постстерилизация (растительный материал отмывают от стерилизующего агента 3-4 порциями стерильной дистиллированной воды) Основные компоненты питательных сред: макроэлементы; микроэлементы; источники углерода; витамины; регуляторы роста Главные практические аспекты получения культуры и ее поддержания группируются вокруг проблемы подбора подходящей среды для культивирования