Фенотипическая селекция Метод отбора гибридных клонов

В гене Tet находятся уникальные участки расщепления рестриктазой BamHI. Если "разрезать" плазмиду рестриктазой, участок расщепления которой находится в гене Tet, и соединить ее методом липких концов с чужеродным фрагментом ДНК, то в полученной рекомбинантной молекуле останется нетронутым только ген Amp, а ген Tet утрачивает свою активность, поскольку его последовательность разрывается вставкой.

Разрезают плазмиду рестриктазой, образующую у фрагмента ДНК однотяжевые ("липкие") концы. Той же рестриктазой разрезают на фрагменты ДНК, в одном из которых содержится интересующий нас ген. Если смешать эти фрагменты с разрезанной плазмидой, то с некоторой вероятностью они склеятся с плазмидой благодаря "липким" (комплементарным) концам. Далее чужеродную ДНК ковалентно пришивают к вектору ДНК-лигазой. В итоге получается созданная по заранее разработанному плану рекомбинантная ДНК.

Плазмиды после встройки в них фрагментов ДНК вводят в бактериальные клетки (только там они могут размножиться), культуру высевают на чашки с организованной питательной средой, в которую добавлен ампициллин. При этом вырастают колонии клеток, содержащих или исходную векторную плазмиду, или рекомбинантные плазмиды. Затем колонии перепечатывают на чашки с ампициллином и тетрациклином. Рекомбинантные плазмиды на этой среде расти не будут.