БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ СЕРДЕЧНЫЕ ГЛИКОЗИДЫ (ОФС )

СЕРДЕЧНЫЕ ГЛИКОЗИДЫ Сердечные гликозиды циклопентанопергидрофенантрена (карденолиды) (буфадиенолиды) лактонное кольцо кардиотоническим действием Сердечные гликозиды - это гликозиды, агликоном которых являются производные циклопентанопергидрофенантрена, содержащие в положении 17 ненасыщенное пятичленное (карденолиды) или шестичленное (буфадиенолиды) лактонное кольцо и обладающие кардиотоническим действием. Заместителями могут быть: R 1 - OH; R 2 - OH, Н; R 3 - СН 3, -С-OH, -CH 2 -OH; R 4 - OH, Н; R 5 - CH 3 ; R 6 - OH; R 7 - OH, H; R 8 - ненасыщенное пятичленное лактонное кольцо или шестичленное лактонное кольцо

ДЕЙСТВИЕ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ Сердечные гликозиды пока не имеют себе равных синтетических заменителей. Действие сердечных гликозидов проявляется в изменении всех основных функций сердца. Под влиянием терапевтических доз сердечных гликозидов наблюдаются действия: 1. Положительное инотропное 1. Положительное инотропное (увеличение силы сокращения сердца, длительность систолы уменьшается); 2. Отрицательное хронотропное 2. Отрицательное хронотропное (уменьшение частоты сокращений, удлинение диастолы, улучшается приток крови к желудочкам); 3. Батмотропное 3. Батмотропное (изменение возбудимости различных структур сердца - дозозависимо); 4. Повышение автоматизма 4. Повышение автоматизма. circulation-image.jpg

БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ПОДЛЕЖАТ Листья наперстянки пурпуровой, крупноцветковой и их ЛП art.com/art/Digitalis art.com/art/Digitalis ЛП наперстянки шерстистой u/uploads/images/ 00/00/70/2013/07/0 8/05cd54. jpg u/uploads/images/ 00/00/70/2013/07/0 8/05cd54. jpg Трава, ЛП горицвета art.com/art/Adonis- vernalis art.com/art/Adonis- vernalis Трава, листья, цветки ландыша, ЛП ландыша art.com/art/Convall aria-maialis art.com/art/Convall aria-maialis Семена и ЛП строфанта s.la.coocan.jp/Apo cynaceae/Strophan thus%20preussii/DS C JPG s.la.coocan.jp/Apo cynaceae/Strophan thus%20preussii/DS C JPG Трава и семя желтушника раскидистого (серого) um.ru/page/image/ id/ html um.ru/page/image/ id/ html

ПРИНЦИП МЕТОДА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ систолическую остановку сердца Биологическая оценка указанных ЛС основана на способности сердечных гликозидов вызывать в токсических дозах систолическую остановку сердца животных. единицах действия «лягушачьи»«кошачьи» Активность сердечных ЛС оценивают по сравнению с активностью стандартных образцов и выражают в единицах действия (ЕД), которые, в зависимости от вида животных обозначают: ЛЕД - «лягушачьи», КЕД - «кошачьи». 1 г 1 мл Устанавливают наименьшие дозы стандартного образца и испытуемого ЛС, вызывающие систолическую остановку сердца подопытных животных. Затем рассчитывают содержание единиц действия в 1 г испытуемого препарата (ИП), если испытываются ЛРС или сухие концентраты; в одной таблетке - при испытании таблеток или в 1 мл, если испытываются жидкие лекарственные формы. валор В НД на лекарственное сырье и препараты, содержащих СГ, обязательно указывается валор (количество ЕД в 1 г сырья).

СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ И ПОНЯТИЕ ЕДИНИЦЫ ДЕЙСТВИЯ Стандартные образцы: 1. Специально изготовленные спиртовые экстракты, содержащие сумму гликозидов и очищенные от сопутствующих веществ (для таких ЛР, как ландыш, наперстянка пурпуровая и крупноцветковая) 2. Индивидуальные кристаллические гликозиды (при испытании других ЛР, содержащих сердечные гликозиды) лягушачья единица действия (ЛЕД) Одна лягушачья единица действия (ЛЕД) соответствует наименьшей дозе стандартного препарата, вызывающей систолическую остановку сердца стандартной лягушки (самец массой г) в течение 1 ч, если испытывают сырьё и препараты наперстянки, ландыша и горицвета, или 2 ч, если испытывают сырьё и препараты строфанта или желтушника. кошачьей единицей действия (КЕД) Под одной кошачьей единицей действия (КЕД) подразумевают смертельную дозу стандартного образца или ИП из расчета на 1 кг массы животного. Разведения стандартного образца или ИП подбирают с таким расчетом, чтобы 1 КЕД содержалась примерно в 15 мл раствора.

МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ СГ НА ЛЯГУШКАХ Для опытов пригодны лягушки-самцы видов: Травяная (Rana temporaria) массой г temporaria Водяная - озерная (Rana ridibunda) массой г Rana-ridibunda Прудовая (Rana esculenta) массой г esculenta

ТЕХНИКА ИСПЫТАНИЯ Отбирают партию лягушек одного вида, возможно близких друг к другу по массе. Взвешивание животных проводят непосредственно перед опытом с точностью до 0,5 г с отклонениями от средней массы в группе не более чем на +/- 2,5 г. Лягушек по 5 штук укрепляют на досках брюшком кверху с предельно вытянутыми конечностями, булавки вкалывают в верхнюю часть морды и в суставы передних и задних конечностей. Пинцетом захватывают кожу на груди и вырезают в ней треугольное отверстие. Вырезанный лоскут кожи откидывают в сторону. При этом становится отчетливо видимой грудина, просвечивающая через мышцы в виде белой пластины, напоминающей по форме песочные часы. Приподняв пинцетом грудину в узкой части, тонкими ножницами перерезают ее поперек выше и ниже места наложения пинцета, так что образуется узкое поперечное оконце, через которое видны дуги аорты и предсердия. Тонким (глазным) пинцетом проникают в разрез (осторожно, чтобы не поранить предсердия и крупные сосуды), слегка вытягивают сердечную сорочку и рассекают ее ножницами. Затем легкими надавливаниями на брюшко лягушки выводят сердце наружу. При препарировании следят за тем, чтобы через образованное отверстие не выступали наружу печень и легкие и чтобы сердце свободно помещалось на лишенном кожи участке, не прикасаясь к наружной поверхности кожи. В течение опыта обнаженное сердце каждые мин. смачивают 0,6% раствором натрия хлорида (наносят пипеткой 2-3 капли на обнаженное сердце). Испытания на травяных лягушках следует проводить, вводя растворы в лимфатические бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка); на водяных - в сердце (в полость желудочка) или в вену; под кожу - только растворы, содержащие гликозиды ландыша. Лягушкам, относящимся к одной группе (5 штук), вводят одинаковые дозы испытуемого раствора. Испытуемые препараты предварительно разводят водой с таким расчетом, чтобы 0,3 или 0,4 мл испытуемого раствора содержали 1 ЛЕД. Для этого среднее количество единиц действия лекарственного средства умножают на количество миллилитров, соответствующее 1 ЛЕД. Например, если в 1 мл препарата «Коргликон раствор 0,06% для инъекций» содержится в среднем 13,3 ЛЕД (13,3 x 0,3 = 3,99), то препарат следует развести 1:4.

НЕДОСТАТКИМЕТОДА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ СГ НА ЛЯГУШКАХ НЕДОСТАТКИ МЕТОДА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ СГ НА ЛЯГУШКАХ 1. Исследования проводятся на холоднокровных животных, генетически далеко отстоящих от человека; 2. Определяется смертельная доза, тогда как для клиники важно правильно определить терапевтические дозы; 3. Лягушки используемых видов распространены не во всех районах нашей страны и не во всех странах; 4. Малая точность метода (+/ %) ввиду резко изменяющейся чувствительности лягушек в зависимости от времени года и других условий; 5.Трудоёмкость; 6. Высокая стоимость.

МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ СГ НА КОШКАХ Для опыта отбирают кошек обоего пола, здоровых, не беременных и не лактирующих, массой 2,0-3,5 кг, находившихся в условиях лабораторного содержания в течение 2-3 сут. За ч до начала опыта животных лишают пищи, но не воды.

ТЕХНИКА ИСПЫТАНИЯ Опыт проводят под легким наркозом. В отпрепарированную бедренную вену животного вводят канюлю, соединенную тонкой каучуковой трубкой, с градуированной бюреткой вместимостью мл, откуда поступает раствор ИП, приготовленный на 0,9% растворе натрия хлорида для инъекций. На пути между бюреткой и канюлей включают стеклянный змеевик, помещенный на водяную баню с температурой 39 град. C для поддержания постоянной температуры (37 град. C) вводимого раствора. В резиновую трубку, соединяющую стеклянный змеевик с канюлей, вставляют с помощью стеклянного тройника термометр, показывающий температуру жидкости, поступающей к животному. Жидкость из бюретки вытекает под постоянным давлением, что достигается введением в бюретку стеклянного капилляра внешним диаметром не более 1 мм, укрепленного при помощи каучуковой пробки в верхнем отверстии бюретки (по принципу сосуда Мариотта). Длина капилляра должна быть такова, чтобы его нижний конец доходил до уровня нижнего деления бюретки. Скорость вытекания жидкости из бюретки регулируют при помощи зажима, наложенного на каучуковую трубку, или стеклянного крана таким образом, чтобы в вену животного в 1 мин. поступал 1 мл испытуемого раствора. Можно использовать другое оборудование, позволяющее соблюдать указанную скорость введения и температуру испытуемого раствора. Введение раствора проводят до наступления остановки сердца. Длительность опыта должна составлять не менее 30 и не более 55 мин. Момент остановки сердца определяют по исчезновению сердечного толчка и контролируют последующим вскрытием грудной клетки. При наличии патологических изменений в органах опыт в расчет не принимают.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Государственная фармакопея Российской Федерации. XII издания. // М.: «Издательство «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», с. 2. Государственная фармакопея РФ. – 11-е изд. – М. : Медицина, – Вып. 2. – 400 с. 3. Государственная фармакопея РФ. – 10-е изд. – М. : Медицина, – 1035 с. 4. Химический анализ лекарственных растений: Учеб. пособие для фармацевтических вузов / Ладыгина Е. Я., Сафронич Л. Н., Отряшенкова, В. Э. и др. Под ред. Гринкевич Н. А., Сафронич Л. Н. - М.: Высшая Школа, с., ил.